天冬中总氨基酸的含量测定

刘亮刘英波周英信丁斗潘年松冯华

1．贵州省遵义医药高等专科学校，贵州 遵义 563002;2．贵州省遵义市药品检验所，贵州 遵义 563000

天冬中总氨基酸的含量测定

刘亮1刘英波1周英信1丁斗1潘年松1冯华2

1．贵州省遵义医药高等专科学校，贵州 遵义 563002;2．贵州省遵义市药品检验所，贵州 遵义 563000

目的:建立天冬中总氨基酸含量测定的方法。方法:以天冬素为对照品，2%茚三酮及pH=6．8磷酸二氢钾－氢氧化钠缓冲液为显色剂，置沸水中显色15min，于566nm下测定吸光度。结果:天冬素的质量浓度在4～14μg·mL－1与吸光度成良好线形关系，r=0.9994(n=6)，平均回收率为100.59%，RSD=2.47%。结论:该法可用于天冬的含量测定。

天冬;总氨基酸;含量测定

天冬为百合科植物天门冬Asparagus cochinchinensis(Lour．)Merr．的块根，是一种临床常用中药，具有养阴清热，润肺滋肾的功效，临床上多用于治阴虚发热、咳嗽吐血、肺痈、咽喉肿痛、消渴、便秘等病症。天冬中所含化学成分主要有氨基酸类、糖类、螺甾甙类。通过查阅文献，我们发现氨基酸类具有抗肿瘤活性，但其含量测定方面的研究较少［1］，难以进行深入开发。本文通过紫外法，以天冬素为对照品对天冬中总氨基酸的含量测定进行了方法学的考察，为天冬的质量控制提供了新思路，新尝试。

1 仪器与试药

Aquelix 5型实验室高纯水系统(重庆市金富科技发展有限公司)，UV2501紫外分光光度计(日本岛津);DKS－26型电热恒温水浴锅(宁波江南仪器厂);FA2004B型电子天平(上海越平科学仪器有限公司);SHZ－DⅢ型予华牌循环水真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司);FW200型高速万能粉碎机(北京科伟永兴仪器有限公司)。

天冬素购于上海华壹生物科技有限公司(批号:70－47－3);天冬药材购于贵州遵义，经遵义医药高等专科学校张学愈副教授鉴定为百合科植物天冬Asparagus cochinchinensis(Lour．)Merr．的块根;所用水为高纯水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液的配制

2.1.1 茚三酮溶液的配制(2%)

称取茚三酮2.0g加乙醇溶解，定容至100mL。

2.1.2 磷酸盐缓冲液的配制(pH=6.8)

精密称取磷酸二氢钾3.4022g及氢氧化钠0.4720g混合加水使其溶解，定容至500mL。

2.1.3 天冬素对照溶液的配制

精密称取天冬素0.0100g加水使其溶解，定容至100mL。此溶液浓度为0.1mg/mL。

2.1.4 供试溶液的制备

精密称取天冬药材粗粉1克，加水50mL，超声提取30min，抽滤，滤液定容至100mL。

2.2 测定波长的选择

分别精密吸取对照溶液、供试溶液适量于25mL容量瓶中，加水至10mL，再分别加入磷酸盐缓冲液2mL和茚三酮溶液2mL，摇匀，置于沸水中显色15min，取出后立即用冰水冷却5min，用水定容至刻度，摇匀，静置10min，在400～800nm进行扫描，结果显示对照溶液在577nm处有最大吸收(图1)，而供试溶液在566nm处有最大吸收(图2)，故选择566nm为本试验的测定波长。

2.3 标准曲线的制备

分别精密移取对照溶液0.0，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0和3.5mL于25mL容量瓶中，加水至10mL，再分别加入磷酸盐缓冲液2mL和茚三酮溶液2mL，摇匀，置于沸水中显色15min，取出后立即用冰水冷却5min，用水定容至刻度，摇匀，静置10min，于566nm处测定吸光度。以吸光度(A)为纵坐标，质量浓度(C)为横坐标进行线性回归。结果表明，天冬素在4～14μg/mL与吸光度呈良好的线性关系。回归方程为A=0.052314C－0.077162，r=0.9994。

2.4 稳定定性试验

精密吸取样品溶液1.0mL，按2.3项下的操作方法显色，于566nm处分别在0，10，20，，40，60，90，120min测定吸光度。结果表明样品液显色后在120min内稳定，RSD=0.43%。

2.5 精密度试验

精密吸取对照溶液2mL，共6份，按2.3项下的操作方法显色，于566nm处测定吸光度，计算RSD=0.57%。结果表明方法的精密度良好。

2.6 重复性试验

精密称取同一批样品6份，按2.1.4项下方法制备供试品溶液，按2.3项下操作方法显色，于566nm处测定吸光度，并计算含量，结果平均含量为2.05%，RSD=1.08%。结果表明方法的重复性良好。

2.7 加样回收率试验

分别精密吸取6份已知含量的样品溶液0.5mL于25mL容量瓶中，加入对照品溶液1.0mL，按2.3项下操作方法显色，于566nm处测定吸光度，结果见表1。

表1 天冬加样回收率试验结果(n=6)

2.8 样品的含量测定

按照2.1.4项下操作方法，制备3批供试溶液，按2.3项下操作方法显色，于566nm处测定吸光度，3批药材中总氨基酸的含量分别为:2.07%，2.07%，2.06%，RSD=0.35%。

3 讨论

根据文献的查阅［2－4］，试验前期比较了醋酸－醋酸钠(pH=5.5)、磷酸二氢钾－磷酸氢二钠(pH=8.04)及磷酸二氢钾－氢氧化钠(pH=6.8)三种缓冲液对显色稳定性的影响。结果表明醋酸－醋酸钠(pH=5.5)缓冲液条件下生成物不稳定，吸光度值在短时间内下降很快。后两种缓冲液条件下相比较而言，磷酸二氢钾－氢氧化钠(pH=6.8)稳定性最好，故选为本试验反应条件。实验过程中应严格控制温度和时间。本法具有操作简单，准确等优点，为天冬的质量控制提供了新的有效手段。

［1］ 马家骢，项勤，刘浙创等．异硫氰酸苯柱前衍生法测定天冬中天冬素含量［J］．科技通报，1990，6(3):152－154．

［2］ 胡京枝，董小海，于大杰．紫外分光光度法测定含乳饮料中游离氨基酸含量［J］．中国食品添加剂，2007，18(6):164－167．

［3］ 朱瑾，李新霞，陈坚．茚三酮比色法测定蒜氨酸原料药中总氨基酸的含量［J］．西北药学杂志，2008，23(3):136－138．

［4］ 梁英丽，李艳，高孟婷等．西归中总氨基酸含量测定方法的研究［J］．大理学院学报，2009，8(10):7－9．

R927.2

A

1007－8517(2012)15－0045－02

贵州省教育厅自然科学研究项目，黔教科(2008)069号;遵义医药高等专科学校自然科学科技项目，遵医专科合(2011)Z01号。

刘亮(1981～)，男，讲师，理学硕士，主要从事中药、民族药化学成分及质量研究。

周英信，教授。Tel:13985235292。

2012.05.16)