跌打七厘片的鉴别及含量测定方法改进

高燕妮 高武翔 幸忠 王文娟

重庆希尔安药业有限公司，重庆 401520

跌打七厘片的鉴别及含量测定方法改进

高燕妮 高武翔 幸忠 王文娟

重庆希尔安药业有限公司，重庆 401520

目的对跌打七厘片质量标准中三七的鉴别及血竭素的含量测定方法进行改进。方法完善三七鉴别反应的样品处理方法及层析条件；改变含量测定中血竭素的样品处理方法。结果改进后的鉴别方法斑点清晰，分离度好；含量测定方法重现性好，准确度高。结论改进后的方法灵敏、准确，适合跌打七厘片的质量控制。

跌打七厘片；三七；鉴别；血竭素；含量测定

跌打七厘片为传统优质中成药，处方由麝香、三七、血竭、红花等十味药组成，具有活血散瘀，消肿止痛的功效，临床上用于治疗跌打损伤，外伤出血[1]，疗效确切。由于该药为全粉入药，成分复杂，实际工作中发现，其质量标准存在三七的鉴别斑点多、分离度差、不易判断，血竭素的高效液相色谱法重现性差、测定不准确的问题。本文将二者的检测方法进行了改进，获得了满意的效果。

1 仪器与试药

1.1 仪器

日本岛津LC–2010AHT型高效液相色谱仪；CP225D电子天平（Sartorius，十万分之一天平）；KQ5200B超声波清洗机型（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

人参皂苷Rg1对照品（批号：110703-200929，共含量测定用，购自中国药品生物制品检定所）；三七皂苷R1对照品（批号：110745-200415，供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所）；血竭素高氯酸盐对照品（批号：0811-200608，供含量测定用，购自中国药品生物制品检定所）；跌打七厘片（批号：110801，重庆希尔安药业有限公司生产）；乙腈为色谱纯；其余试剂为分析纯；水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 跌打七厘片中三七薄层鉴别方法的改进

2.1.1 改进方法

本品30片，研细，置索氏提取器中，加适量氯仿，置水浴中回流提取2 h，弃去氯仿液，取出滤筒，晾干[2]。待氯仿挥尽，再置索氏提取器中，加适量甲醇，置水浴中回流提取4 h，回收甲醇至干，残渣加5%氢氧化钠溶液5 mL使溶解，转移至分液漏斗中，再用5mL的水分2次洗涤容器，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次（10、5、5、5mL），合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次5 mL，分取正丁醇液，蒸干，残渣用0.8mL水分次溶解，转移至氧化铝柱上（中性氧化铝100～200目，2 g，干法装柱，直径1 cm，长25 cm）[2]，先用30 mL氯仿洗脱，弃去氯仿洗脱液，再用70%甲醇25mL洗脱，洗脱液于水浴上蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为样品溶液。另取人参皂苷Rg1及三七皂苷R1对照品适量，加甲醇制成每毫升含人参皂苷Rg1及三七皂苷R1各1mg的对照品溶液。以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）于5～10℃放置12 h的下层液为展开剂[3]，展开，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10min，置紫外光灯（365 nm）下检视。

2.1.2 结果

样品斑点清晰，分离度好。供试品色谱中，在与对照品及对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，且阴性无干扰。表明该鉴别方法效果良好，可行性高，可用于替代原标准中三七的薄层鉴别。改进前后薄层对比见图1、2。

2.2 跌打七厘片中血竭素含量测定方法的改进

2.2.1 色谱条件[4]

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，LP-C18（4.6mm×250 mm，5μm，美国Ultimate）；柱温：30℃；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（45∶55）；检查波长：440 nm；流速：1.0mL/min。理论塔板数以血竭素计算应不低于3 000。

2.2.2 对照品溶液的制备

精密称取血竭素高氯酸盐对照品7 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密量取1 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀即得（每毫升含血竭素10μg）（血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377）。

2.2.3 供试品溶液的制备方法考察

实际工作中发现原含量测定方法重现性不好，经多次实验发现成品的取样量及提取溶剂中磷酸浓度的差异均会导致最后的测定结果差异较大，故对其进行了考察。

2.2.3.1 取样量的考察按原标准中样品处理方法，将取样量改为分别取约0.2、0.5、0.8、1.0、1.2 g，精密称定，进行测定，计算含量。结果明，取样量0.5 g，含量稳定。

2.2.3.2 提取溶剂的考察[5]取样量为0.5 g，分别以甲醇、1%磷酸甲醇溶液、3%磷酸甲醇溶液、7%磷酸甲醇溶液、10%磷酸甲醇溶液作为提取溶剂，进行测定，计算含量。结果表明，磷酸浓度在3%～7%范围内，含量稳定。

根据实验结果，将供试品溶液的制备改为：取本品粉末0.5 g，精密称定，置25mL棕色容量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液振摇5min，稀释至刻度，摇匀，过滤即得。

取不含血竭药材的其余药材，按处方比例和工艺制备方法制备阴性样品，并按供试品溶液的制备方法制备成阴性样品溶液。

2.2.4 系统适应性试验

取对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，记录色谱，见图3。

由图3可知，该条件下，血竭素峰与样品中其他组分色谱峰可基线分离，血竭素与其相邻色谱峰的分离度大于1.5，且阴性样品无干扰。

2.2.5 线性关系考察

分别精密量取对照品溶液5 mL，对照品储备液2、4、6、8 mL，分别置10 mL的棕色量瓶中，以3%的磷酸甲醇溶液稀释至刻度，摇匀。分别进样10μL，测定峰面积。以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X，μg）为横坐标，做线性分析，得回归方程Y=22 785.4X+21.9（r=0.999 9）。结果表明，血竭素进样量在0.050 80～0.813 36μg范围内呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验

精密吸取对照品溶液10μL，连续进样5次，测定其峰面积，计算相对标准偏差（RSD）为0.7%。

2.2.7 稳定性考察

取改进方法后的供试品溶液，于0、2、4、6、8 h分别测定血竭素的峰面积，计算峰面积的RSD为0.9%，即供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.2.8重复性考察

取同一批样品5份，按改进后的供试品溶液制备方法制备供试品溶液，精密吸取10μL溶液，测定其血竭素含量，计算含量的RSD值为1.21%，表明方法重现性较好。

2.2.9 加样回收率考察

精密称取同一批样品6份（0.25 g），分别加入血竭素高氯酸盐对照品适量，依法测定，计算，结果见表1。

表1 加样回收率实验结果

2.2.10 与原方法比较

采用改进的血竭素含量测定方法与原标准中血竭素的含量测定方法分别对同一批跌打七厘片进行了测定，结果表明新方法重现性更好。结果见表2。

表2 两种测定方法测定结果对比

3 讨论

3.1 三七薄层鉴别样品制备方法比较

因跌打七厘片为十味药材全粉入药，其所含成分较多，不易分离。原标准中三七的薄层鉴别样品处理过程较为简单，脱脂后以正丁醇萃取即得，导致斑点分离度不好，不易辨别。本实验选用氧化铝柱层析[1]及大孔吸附树脂[6]进行样品纯化比较，结果表明氧化铝柱层析效果明显。

3.2 三七薄层鉴别展开剂选择

本实验亦对展开剂进行了考察，以展开剂氯仿-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置的下层液[7]，正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶5）上层溶液[8-10]，及氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）于5～10℃放置12 h的下层液进行了对比研究，最终确定为后者，并取得了满意的分离效果。

3.3 血竭含量测定中样品制备方法的改进

本研究对血竭含量测定中的样品制备方法进行了多方面的研究，包括取样量、提取溶剂、提取方式、提取时间的比较。试验发现，原标准中的含量测定取样量为1.0 g，虽然仍在线性范围内，可能由于样品中成分复杂，影响了血竭素高氯酸盐的溶出，导致样品含量偏低，且重现性不好，将样品的取样量改为0.5 g，且固定稀释剂为3%磷酸甲醇溶液后，含量测定结果更加稳定可靠。

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Im provement of identification and determ ination of content in Diedaqili Tablets

GAO Yanni GAOWuxiang XING Zhong WANGWenjuan
Chongqing Healn Pharmaceutical Co.,Ltd.,Chongqing 401520,China

ObjectiveTo improve the identification for Notoginseng radix et rhizoma and determination of dracorhodin both in the quality standard of Diedaqili Tablets.MethodsThe sampling pre-treatment and condition of chromatography for identification of Notoginseng radix et rhizome were improved,and the sampling pre-treatment for determination of dracorhodin wasmodified.ResultsThe TLC spotswere fairy clear and separated well;determination method was reliable and accurate.ConclusionThe improved method ismore sensitive andmore accurate,and it is suitable for the quality control of Diedaqili Tablets.

Diedaqili Tablets;Notoginseng radix et rhizoma;Identification;Dracorhodin;Determination

R927.2

A

1673-7210（2012）11（c）-0117-03

2012-07-23 本文编辑：卫轲）