VEGF和CD44v6过表达与乳腺癌浸润转移的关系

瞿峰

肿瘤细胞的浸润与转移是一个复杂的过程，其中肿瘤的血管生成及癌细胞与间质的黏附作用是重要的影响因素。近年的研究表明，血管内皮细胞生长因子 (vascular endothelial cell growth factor，VEGF)参与了肿瘤的脉管生成和浸润转移等过程［1］。CD44v6作为黏附分子CD44的主要成员之一，参与细胞与细胞、细胞与间质之间的黏接，与多种恶性肿瘤浸润转移有关［2］。本研究采用免疫组织化学法检测乳腺癌组织中VEGF和CD44v6在乳腺癌中的表达，探讨VEGF和CD44v6在乳腺癌转移中的可能作用。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选取2008—2010年我院病理科确诊的原发乳腺导管浸润癌手术切除的存档石蜡标本92例，其中有、无淋巴结转移病例分别为55例、37例。患者均为女性，术前未行放、化疗，中位年龄47.8岁。按照李树玲主编的《乳腺肿瘤学》的诊断标准［3］，复查全部切片。另取45例同期乳腺癌手术切除癌旁组织作为对照。

1.2 方法 鼠抗人VEGF单克隆抗体、鼠抗人CD44v6单克隆抗体及相应二抗试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。采用免疫组织化学SP法对全部病例进行染色，严格按照试剂说明书操作，两种一抗稀释度均为1:100。同时取已知阳性组织作对照，以PBS替代一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定 VEGF蛋白阳性表达均主要定位于细胞质;CD44v6蛋白阳性表达主要定位于细胞膜，少数见于胞质。根据染色强度和阳性细胞百分比进行半定量的综合计分。即随机选取5个高倍镜视野计数阳性细胞百分比的平均数，无阳性细胞计0分，≤25%计1分，26% ～50%计2分，51% ～75%计3分，＞75%计4分;着色强度以多数阳性细胞呈现的染色计分，无着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分;将阳性细胞百分比和着色强度两者的计分相加，0～2分为阴性 (－)，≥3分为阳性 (+)。

1.4 统计学方法 应用SPSS 13.0统计学软件，采用χ2检验及Fisher确切概率法进行统计学处理，以P＜0.05有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF的表达 VEGF蛋白阳性反应定位于细胞质，呈棕黄色颗粒。VEGF蛋白在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的阳性表达率分别为6.7%(3/45)和90.2%(83/92)(P＜0.05，见表1)，而且VEGF在淋巴结转移组中的阳性表达率 (53/55)明显高于无淋巴结转移组 (P=0.016，见表2)。

2.2 CD44v6的表达 CD44v6蛋白阳性反应定位于细胞膜，呈棕黄色颗粒。CD44v6蛋白在正常乳腺组织和乳腺癌组织中的阳性表达率分别为8.9%(4/45)和85.9%(79/92)(P＜0.05，见表1)，而且CD44v6在淋巴结转移组中的阳性表达率(51/55)明显高于无淋巴结转移组 (P=0.021，见表2)。

2.3 VEGF和CD44v6表达的关系 VEGF和CD44v6的表达呈正相关关系 (r=0.497，P＜0.05，见表3)。

表1 VEGF和CD44v6在正常乳腺组织和乳腺癌中的表达〔n(%)〕Table 1 VEGF and CD44v6 in normal breast tissue and breast carcinoma

表2 乳腺癌组织中VEGF和CD44v6的表达与淋巴结转移的关系Table 2 VEGF and CD44v6 expression and lymph node metastasis in breast cancer tissue

表3 乳腺癌组织中VEGF和CD44v6表达的关系Table 3 Relationship between the expression of VEGF and CD44v6 in breast cancer tissue

3 讨论

乳腺癌的浸润与转移是导致临床治疗失败的主要原因，其中，新血管的生成是重要的影响因素。VEGF是一种重要的促脉管生成因子，具有促进血管内皮细胞分裂、增殖及血管生成的能力［4］。本实验中VEGF在乳腺癌组织中高表达，而且淋巴结转移组乳腺癌VEGF的表达水平明显高于无淋巴结转移组，与国内研究结果一致［5］。提示癌细胞通过产生VEGF促进淋巴管形成，新生的淋巴管壁具有高通透性，使肿瘤细胞容易进入淋巴管随着淋巴回流至淋巴结，而使其容易完成淋巴结转移。同时，VEGF促进肿瘤血管内皮细胞增殖，导致肿瘤血管数量增加，不仅为肿瘤的生长提供营养，而且为肿瘤细胞的转移提供通道。因此，肿瘤血管生成对淋巴转移具有间接促进作用。这说明VEGF随着乳腺癌进展及淋巴结转移，其阳性表达升高，可作为临床参数进行预后评估。

CD44v6作为黏附分子CD44的主要成员，与多种恶性肿瘤浸润转移有关。目前认为CD44v6主要参与瘤细胞与宿主基质的黏附，黏附在癌细胞侵袭和转移过程中起促进作用。研究显示，CD44v6的过度表达与乳腺癌等的发生发展、侵袭和转移有关［6－7］。本研究发现CD44v6在乳腺癌组织中高表达，且与腋窝淋巴结转移有密切的关系。这提示CD44v6作为黏附分子，参与了乳腺癌的发生发展和浸润转移过程，其使癌细胞与间质间有更强的黏附能力，同时使癌细胞逃避机体的免疫监测的能力，从而使癌细胞更容易发生转移。因此，CD44v6的过度表达是乳腺癌变及浸润转移的一个重要因素，检测淋巴结中CD44v6的表达可能成为早期诊断乳腺癌的指标之一。

从VEGF与CD44v6蛋白的表达发现，VEGF和CD44v6的表达在乳腺癌组织中同时出现表达上调，存在正相关关系，并且均与淋巴转移有关，提示两者可能在乳腺癌的远处转移中起协同作用。因此VEGF和CD44v6蛋白可以作为判断乳腺癌转移能力的生物学指标。

1 甲状腺乳头状癌VEGF、MMP－9及COX－2蛋白表达与淋巴道转移和血管生成的相关性 ［J］.肿瘤防治研究，2010，37(4):441－444.

2 Heider KH，Kuthan H，Stehle G，et al.CD44v6:a target for antibody － based cancer therapy［J］.Cancer Immunol Immunother，2004，53(7):567－579.

3 李树玲.乳腺肿瘤学［M］.北京:科学技术文献出版社，2000:337－340.

4 Saad RS，Kordunsky L，Liu YL，et al.Lymphatic microvessel density as prognostic marker in colorectal cancer［J］.Mod Pathol，2006，19(10):1317－1323.

5 罗彬，秦蓁，王旭东.肺癌MMP－9和VEGF表达与微血管密度的关系及意义［J］.现代预防医学，2011，38(7):1338－1345.

6 田斌，牛虎.乳腺癌组织CD15和CD44V6及PCNA表达及其临床意义 ［J］.中华肿瘤防治杂志，2009，16(14):1082－1085.

7 段秀方，钟容，简莉人.CD44v6、E－Cadherin在乳腺癌中的表达及意义［J］.中国妇幼保健，2010，25(23):3332－3334.