快速培养法与实时荧光定量聚合酶链反应检测肺炎支原体的对照研究

周燕，申旭霞

(1.成都市妇女儿童中心医院检验科，四川成都610016;2.成都市第五人民医院检验科，四川成都611130)

快速培养法与实时荧光定量聚合酶链反应检测肺炎支原体的对照研究

周燕1，申旭霞2

(1.成都市妇女儿童中心医院检验科，四川成都610016;2.成都市第五人民医院检验科，四川成都611130)

目的探讨快速培养法和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，MP)的异同。方法对2011年1～12月住院的218例疑似肺炎支原体肺炎患儿采集咽拭子，同时用快速培养法和实时FQPCR法检测MP。结果快速培养法与实时FQ-PCR法诊断肺炎支原体肺炎的灵敏度、阳性预测值、假阴性率及诊断符合率差异无统计学意义(P＞0.05);实时FQ-PCR法诊断肺炎支原体肺炎的特异度明显高于快速培养法，假阳性率明显低于快速培养法，差异有统计学意义(P＜0.05)。二者联合检测的灵敏度、阴性预测值及诊断符合率分别为93.8%、90.7%和90.8%，均高于快速培养法和实时FQ-PCR法(P＜0.05);假阴性率为6.2%，明显低于快速培养法和实时FQ-PCR法(P＜0.05);联合检测的特异度为86.7%，明显高于快速培养法(P＜0.05)。结论两种方法的敏感度差别不大，而实时FQ-PCR法的特异性优于快速培养法。应用这两种不同方法学原理的检测方法组合检测，取长补短，在提高肺炎支原体感染检出率的同时，还可以互相佐证，减少实验误差，提高检测的准确性。

肺炎支原体;快速培养法;FQ-PCR法

肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae，MP)是小儿呼吸道感染的常见病原体之一，主要通过呼吸道传染;临床表现多种多样，以呼吸道感染最为多见，并可引起全身各脏器损害［1］。MP的实验室检测方法有很多，临床常采用血清特异性抗体及冷凝集素的检测，但受病程制约，早期诊断较为困难。近年来发展的MP快速培养法和实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法均具有不受病程影响、快速、敏感性高的优点［2，3］。为了客观评价这两种方法的异同，本研究对218例疑似肺炎支原体肺炎患儿采集咽拭子同时用快速培养法和实时FQ-PCR法检测MP，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料2011年1～12月成都市妇女儿童中心医院儿科收治的疑似MP感染的急性呼吸道感染患儿218例，其中男123例，女95例，年龄6个月至15岁，平均4岁3个月。

1.2 方法所有患儿均于就诊当日由儿科护士无菌采集咽试子标本，同时用快速培养法和实时FQPCR法检测MP。操作方法均严格按照说明书进行。快速培养试剂盒由郑州市贝瑞特生物技术有限责任公司生产提供;PCR法检测试剂盒由广州中山大学达安基因有限公司生产提供;仪器为杭州博日line gene实时荧光定量PCR扩增仪。

1.3 小儿肺炎支原体肺炎临床诊断标准［9，10］①持续剧烈咳嗽;②全身症状比胸部体征明显;③X射线所见较体征显著，胸片可见两肺均匀一致的片状阴影成似大叶性肺炎改变，肺门阴影增浓;④白细胞计数正常或稍高，血沉多增快;⑤应用大环内酯类效果好，其他抗生素如青霉素，头孢无效。

1.4 统计学方法使用SPSS 12.0统计软件进行数据分析，对两种方法的阳性检出率比较采用配对McNemar检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 快速培养法检测结果将快速培养法同小儿肺炎支原体肺炎临床诊断进行比较，其对小儿肺炎支原体肺炎诊断的灵敏度、特异度分别为82.0%、76.7%，阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)分别为83.3%和75.0%，假阳性率、假阴性率分别为23.3%、18.0%，诊断符合率为79.8%，见表1。

表1 快速培养法检测MP结果和临床诊断结果比较(n)

2.2 实时FQ-PCR法检测结果将实时FQ-PCR法同小儿肺炎支原体肺炎临床诊断进行比较，其对小儿肺炎支原体肺炎诊断的灵敏度、特异度分别为76.6%、91.1%，PPV、NPV分别为92.5%和73.2%，假阳性率、假阴性率分别为8.9%、23.4%，诊断符合率为82.6%，见表2。

表2 实时FQ-PCR法检测MP结果和临床诊断结果比较(n)

2.3 快速培养法与实时FQ-PCR法联合检测结果将快速培养法与实时FQ-PCR法联合检测同小儿肺炎支原体肺炎临床诊断进行比较，其对小儿肺炎支原体肺炎诊断的灵敏度、特异度分别为93.8%、86.7%，阳性预测值(PPV)、阴性预测值(NPV)分别为90.9%、90.7%，假阳性率、假阴性率分别为13.3%、6.2%，诊断符合率为90.8%，见表3。

表3 快速培养法与实时FQ-PCR法联合检测和临床诊断结果比较(n)

2.4 三种检测结果比较快速培养法与实时FQPCR法诊断肺炎支原体肺炎的灵敏度、阳性预测值、假阴性率及诊断符合率差异无统计学意义(P＞0.05);实时FQ-PCR法诊断肺炎支原体肺炎的特异度明显高于快速培养法，假阳性率明显低于快速培养法，差异有统计学意义(P＜0.05)。而两者联合检测的灵敏度、阴性预测值及诊断符合率均高于快速培养法和实时FQ-PCR法，假阴性率均明显低于快速培养法和实时FQ-PCR法，差异均有统计学意义(P＜0.05);并且两者联合检测的特异度明显高于快速培养法(P＜0.05)。快速培养法与实时FQPCR法受原理及试剂等诸多因素的影响，检测MP结果不完全一致(一致率76.1%)，见表4。

表4 快速培养法与实时FQ-PCR法检测MP结果的符合率

3 讨论

近几年来，MP感染所致的呼吸道疾病逐年增多，多发生于儿童，临床表现多种多样，病情轻重不等，病程长，易反复，肺外并发症较多见［1］。因其对常用抗生素不敏感，经验用药易延误病情，增加患儿痛苦和加重经济负担。因此早期诊断对临床的治疗尤为重要。目前，临床上用于MP感染早期检测的实验室方法最常见的是快速培养法与实时FQ-PCR法。

快速培养法是近年发展起来的一种直接检测MP病原体的实验室方法，具有简便，快速，敏感的优点［2］。该方法在发病初期也能检测得到MP，因其培养液中含有高营养成分和快速生长因子，标本中只需含有极少量的病原体即可迅速增殖，能在12～24小时得出结果［4.8］。但是快速培养法的特异性不是很高，在本研究的特异度为76.7%。实时FQPCR法近几年应用于MP感染的早期检测，是一种体外扩增特异DNA片段的新技术，它可以在短时间内使极微量的核酸片断扩增至数百万个拷贝，具有特异性强、灵敏度高和简便快捷的优点。David等报道实时FQ-PCR法检测MP的灵敏度为60%，特异度为96.7%［5］，与本研究的结果一致。但其主要的缺点是单一的实时FQ-PCR法不足以诊断MP感染［6，7］。

本研究显示两种方法检测MP一致率为76.1%，有52例结果不一致，分析原因如下:①可能与快速培养法使用的培养液有关，标本中的真菌也能在培养液中生长引起假阳性［4］;②尽管PCR技术不断改善，但仅靠这一种方法诊断MP感染是不够的［6，7］，并且易受标本来源和试剂特异性的影响;③快速培养法只有在MP存活的情况下才能够检出，而PCR法并不依赖这一点。快速培养法与实时FQ-PCR法联合检测灵敏度达93.8%，PPV和NPV分别达90.9%和90.7%，诊断符合率达90.8%，假阴性率低至6.2%，说明在MP感染的早期诊断时，需要联合使用两种方法，取长补短，从而提高检测的准确性。

总之，快速培养法和实时FQ-PCR法检测MP各有其特点，如能将两种方法结合用于MP感染的早期检测，不但有利于疾病的诊断，而且可以有效的避免漏检，提高检测的准确性，为临床医生提供快速可靠的检验依据。

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Control study of rapid culture method and real-time of FQ-PCR method for detecting myco-plasma pneumoniae

ZHOU Yan1，SHEN Xu-xia2(1.Women and Children Center Hospital of Chengdu，Chengdu 610016，China;2.The Fifth People's Hospital of Chengdu，Chengdu 611130，China)

ObjectiveTo explore the rapid culture method and real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction(FQ-PCR)，to detect the similarities and differences of the Mycoplasma pneumoniae(MP).Methodscollecting 218 cases of suspected Mycoplasma pneumoniae throat swabs and rapid culture method and real-time of FQ-PCR method detection of Mycoplasma pneumoniae in our hospital from January to December in 2011.ResultsThe sensitivity，positive predictive value，y false negative rate and diagnosis in line with the rate of Rapid culture method and real-time of FQ-PCR had no significant differences(P＞0.05);the specificity of real-time of FQ-PCR was higher than rapid culture method，the false positive rate was significantly lower than the rapid culture method，the difference was statistically significant(P＜0.05);sensitivity，negative predictive value and diagnostic coincidence rate of the joint detection was respectively 93.8%，90.7%and 90.8%，higher than the rapid culture method and real-time of FQ-PCR method(P＜0.05);false negative rate was 6.2%，significantly lower than the rapid culture method and real-time FQ-PCR method(P＜0.05);the specificity of the joint detection was 86.7%，significantly higher than rapid culture method(P＜0.05).ConclusionThe sensitivity of the two methods has no significant difference，the specificity of real-time of FQ-PCR method is better than rapid culture method.The joint detection of these two methods can improve the Mycoplasma pneumoniae infection detection rate，reduce experimental error and improve detection accuracy.

Mycoplasma pneumoniae;Rapid culture method;Real-time of FQ-PCR method

R375.2;R349.82

A

1672-6170(2012)05-0094-03

2012-04-28;

2012-07-19)