PTEN和p53在宫颈浸润癌和癌前病变组织中的表达及意义

商素洁 邱建敏 商华

PTEN(phosphatase and tension homologue deleted on chromosome ten)是新发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因［1］。近几年来，其在上皮性肿瘤尤其是肺、消化道肿瘤、子宫内膜癌中的研究越来越多，但在宫颈癌中的研究较少。PTEN基因与宫颈癌的关系密切，故检测宫颈癌PTEN的表达有助于其诊断和预后的评估。突变型p53在恶性肿瘤中常呈过度表达，研究认为p53的突变可通过PTEN的缺失或下降导致癌变。本研究拟通过免疫组织化学方法检测慢性宫颈炎、CIN和浸润性宫颈鳞癌组织中PTEN的表达，同时检测宫颈癌P53的表达，进一步阐明PTEN基因的缺失和p53的过度表达与宫颈癌的发生、发展的关系，为宫颈癌的早期诊断与治疗、防止复发、改善预后提供理论依据。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选择2000年1月至2006年12月在河北医科大学第三医院病理科保存的石蜡包埋宫颈病变组织110例，包括慢性宫颈炎组织30例，宫颈上皮内瘤变CINⅠ、Ⅱ、Ⅲ级组织分别为25例、15例、10例，浸润性宫颈鳞癌组织30例(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期各10例)，患者年龄25～73岁，平均年龄35．5岁，患者取标本前均未接受放、化疗及免疫治疗，所有组织标本均由两名病理医师诊断。宫颈癌的临床分期采用国际妇产科联盟(FIGO)2000年修订的临床分期。

1．2 实验方法 小鼠抗人PTEN单克隆抗体、p53单克隆抗体，通用型PV-6000二步法免疫组化检测试剂盒和DAB显色试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司，应用二步法免疫组化方法，按说明书操作。

1．3 免疫组化结果判定 PTEN及p53阳性染色位于细胞核，呈淡黄色至棕黄色颗粒。根据染色强度及阳性细胞数量将阳性表达分为3级:(1)弱阳性(+):阳性细胞比例＜10%或显色强度为淡黄色;(2)强阳性(+++):阳性细胞比例＞60%，多数细胞呈棕黄色;(3)中度阳性(++):阳性细胞比例及显色强度介于弱阳性与强阳性之间。阴性即染色强度与背景无明显差别。

1．4 统计学分析 应用SPSS13．0统计软件，计数资料采用χ2检验及Fisher确切概率法检验，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 PTEN在不同宫颈组织中的表达 在上述组织中，PTEN阳性表达率依次分别为 100%、92．00%、73．33%、40．00%、36．67%。上述组织中，PTEN阳性表达率逐渐下降，差异有统计学意义(P＜0．05)。CINⅡ、CINⅢ、浸润性宫颈鳞癌组分别和慢性宫颈炎组比较，差异有统计学意义(P＜0．05);CINⅢ、浸润性宫颈鳞癌组分别与CINⅠ组比较，差异有统计学意义(P＜0．01);CINⅡ组与浸润性宫颈鳞癌组比较，差异有统计学意义(P＜0．05);CINⅢ组与浸润性宫颈鳞癌组比较，差异无统计学意义(P ＞0．05)。见表1。

表1 PTEN在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、浸润性宫颈鳞癌组织中的表达 例

2．2 临床病理分期与PTEN及p53表达的关系 PTEN的表达与宫颈鳞癌病理分期有关(P＜0．05)，30例宫颈癌p53表达阳性17例，占56．67%。PTEN基因表达缺失有19例，占63．33%。见表 2。

表2 临床病理分期与PTEN及p53表达的关系

2．3 宫颈癌中PTEN与p53的关系 p53阳性的17例中PTEN下降或缺失24例，占70．83%;而 p53阴性的13例中PTEN下降或缺失8例，占61．54%;两者比较差异无统计学意义(P ＞0．05)。

3 讨论

宫颈癌是最常见的女性生殖系统肿瘤，我国每年新增宫颈癌患者13．51万左右，仅次于乳腺癌。PTEN是1997年被发现并克隆的抑癌基因，定位于人类染色体10q23．3，是继p53之后发现的第二个突变率较高的抑癌基因，异常表达于胶质细胞瘤、前列腺癌、乳癌、内膜样癌等［2，3］，目前国内外对 PTEN 在宫颈癌中的相关性研究较少，且结果不一［4，5］，本研究应用免疫组化方法对110例宫颈病变组织进行检测PTEN、p53蛋白表达，进一步探讨其在宫颈鳞癌及宫颈病变组织中的表达及意义。

目前研究认为，PTEN在慢性宫颈炎组织和正常宫颈组织中的表达没有明显区别。王喜梅等［6］对24例慢性宫颈炎组织进行研究，PTEN阳性表达率为79．2%。CIN是与宫颈浸润癌密切相关的一组癌前病变，它反映宫颈癌发生、发展中的连续过程，但并不是所有的CIN均会发展为宫颈癌。如何能及早发现对人类威胁较高的CIN是宫颈癌早期预防的关键。本研究结果表明，在慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ和CINⅢ组织中，PTEN阳性表达率逐渐下降(100%、92．00%、73．33%、40．00%)，并且慢性宫颈炎组分别和CINⅡ、CINⅢ组比较差异有统计学意义(P＜0．05)，而CINⅡ组和CINⅢ组比较差异无统计学意义(P＞0．05)，说明在宫颈上皮内瘤变形成过程中，PTEN改变扮演了重要角色，而且PTEN改变是发生在宫颈上皮内瘤变形成过程的早期过程。

本结果表明，与慢性宫颈炎组织相比，浸润性宫颈鳞癌组织中PTEN阳性表达率明显下降，提示PTEN改变与宫颈癌的发生、发展有关。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ组中发现均有PTEN表达缺失，CINⅠ组发生率较低，可能说明PTEN的缺失在癌前病变早期阶段就已开始，故可能是肿瘤发生的早期阶段。本研究还发现，PTEN的表达缺失率随宫颈CIN级别的增高而增高，在CINⅠ中缺失率仅为8．0%，而CINⅡ、CINⅢ组的缺失率分别为26，67%和60%，其中CINⅡ、CINⅢ组的缺失率与慢性宫颈炎组织比较差异有显著性意义，说明PTEN改变发生在宫颈癌变过程的早期，PTEN有望作为宫颈鳞癌早期筛查的指标。

野生型p53突变失去抑制肿瘤的作用，从而导致肿瘤发生的事实已较为肯定，本研究宫颈癌中p53过表达为56．67%，明显高于慢性宫颈炎的4．7%，表明突变P53蛋白在促进宫颈粘膜上皮细胞恶性转化过程中起一定作用。这一结果与许多研究结果［7］一致，提示在临床检测P53蛋白的表达可以用于预测宫颈癌和辅助诊断宫颈癌。本研究中，p53阳性的宫颈癌中PTEN缺失为70．83%，而p53阴性PTEN的缺失占61．54%，两者比较差异无统计学意义(P＞0．05)，说明p53的致癌途径除了引起PTEN的改变外，还有许多其他通路。因此说明PTEN在宫颈鳞状细胞癌的早期发生、发展中起重要作用。PTEN的失活和p53的过表达是宫颈鳞状细胞癌进展和转移的重要环节，两种蛋白联合检测有助于临床预测和诊断宫颈癌。

1 Steck PA，Pershouse MA，Jasser SA，et al．Identifica-tion of a candidate tumor suppressor gene，MMAC1，at chromosome 10q23．3 that is mutated in multiple advanced cancers．Nat Genet，1997，15:356-362．

2 Tsugawa K，Jones MK，Sugimachi K，et al．Biological role of phosphatase PTEN in cancer and tissue injury healing．Front Biosci，2002，7:245．

3 Mutter GI，Lin MC，Fitzgerdd JT，et al．Altered PTEN expression as a diagnostic marker for the earliest endometrial pre-cancers．Natl cancer Inst，2002，92:924．

4 Myers MP，Pass I，Batty IH，et al．The lipid phoshatase activity of PTEN is critical for its tamor suppressor function．Proc Natl Acad Sci USA，1998，95:113513-13518．

5 Yaginuma Y，Yamashita T，Ishiya T，et al．Abnormal structure and expression of PTEN/MMAC1 gene in human uterine cancers．Mol Carcinog，2000，27:110-116．

6 王喜梅，刘逢吉，孙雷，等．PTEN和survivin在 宫颈腺癌中的表达及其与HPV16/18感染的关系，2006，26:847-849．

7 赵温利，温培娥，崔树龄，等．人乳头状癌病毒感染、P53基因突变与宫颈癌的相关性研究．山东医科大学学报，1998，36:1-4．