复方甘草酸单铵注射液家兔体内药代动力学研究

邵益丹，庄让笑，席建军，方红英，王福根

(浙江中医药大学附属第六医院，浙江 杭州 310014)

甘草酸是甘草的有效成分，甘草酸单铵属甘草有效成分的第2代提取物，具有较强的抗炎、保护肝细胞膜以及改善肝功能的作用[1]。复方甘草酸单铵注射液是我院的特色制剂，临床上用于治疗病毒性肝炎和各种肝脏损伤。笔者建立测定家兔体内甘草酸单铵血药浓度的反相高效液相色谱法，并对数据进行计算分析，得到其在家兔体内的药代动力学参数[1]，为复方甘草酸单铵注射液的进一步研究提供依据。

1 仪器与试药、动物

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);高速低温冷冻离心机(上海市离心机械研究所);XW-80A型漩涡混合器(上海医大仪器厂)。甘草酸单铵标准品(中国药品生物制品检定所，批号为110731-201013);甘草酸单铵(西安富捷药业有限公司，批号为20091105);甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。新西兰大耳白家兔，体重为2.0～3.0 kg，由浙江省医学科学研究院提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱:Eclipse XDB-C18柱(150mm×4.6mm，5μm);流动相:0.01 mol/L磷酸-乙腈(60∶40);柱温:30℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:252 nm。在此条件下，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液配制

精密称取甘草酸单铵0.5 g，置250 mL输液瓶中，加水60 mL溶解，根据复方甘草酸单铵注射液处方配制，调节pH至7.0，加水至100 mL，即得甘草酸单铵溶液。

2.3 血浆样品处理[2]

精密吸取0.1 mL家兔血浆，置1.5 mL尖底离心管，加入0.4 mL甲醇，漩涡振荡1 min，混合均匀，10 000 r/min离心15 min，取上清液，用氮气吹干，加流动相0.1 mL溶解，取20μL进样。

2.4 方法学考察

血浆标准曲线制备:精密称取甘草单酸铵标准品100 mg，置100 mL量瓶中，加水溶解并定容至刻度，即得标准品贮备液(质量浓度为1 000 mg/L)，将贮备液依次稀释成1 000，500，400，200，100，50，25，10，5 mg/L 的标准溶液。精密吸取标准溶液各0.1 mL，加入到0.1 mL血浆中，漩涡振荡1 min，混合均匀，按2.3项下自“加入0.4 mL甲醇”起处理后，以甘草酸单铵质量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=12.448 X-30.069，r2=0.999 6(n=9)。结果表明，甘草酸单铵质量浓度在5～1 000 mg/L范围内与峰面积线性关系良好。

回收率试验:取空白血浆0.1 mL，分别加入1 000，100，5 mg/L甘草酸单铵标准溶液0.1 mL，每个浓度平行5份，按2.3项下自“加入0.4 mL甲醇”起处理后，测定峰面积，将血样峰面积代入回归方程计算回收率。结果见表1。

表1 回收率试验结果(n=5)

精密度试验:取空白血清0.1 mL，加入质量浓度为1 000，100，5 mg/L甘草酸单铵标准溶液0.1 mL，每个浓度平行3份，依法处理后放4℃冰箱内保存。日内重复测定5次，连续测定5 d，计算日内精密度及日间精密度。结果日内 RSD分别为0.93%，2.15%和3.66%;日间 RSD分别为1.33%，3.90%和5.11%。

稳定性试验:取质量浓度为1 000，100，5 mg/L甘草酸单铵标准品溶液0.1 mL，加入到0.1 mL空白血浆中，按2.3项下自“加入0.4 mL甲醇”起处理后，分别于1，2，5，10 d进样测定。结果峰面积的 RSD分别为1.26%，2.49%，2.91%，2.56%。

2.5 血药浓度与药代动力学参数测定

取复方甘草酸单铵注射液，按50 mg/kg剂量于家兔耳缘处静脉注射，分别于 0.5，1，2，3，4，8，10，12，18，24 h 时取静脉血，30 min内分离血浆，按2.3项下自“精密吸取0.1 mL血浆”起处理，将得到的峰面积代入标准曲线计算浓度，数据用DAS药动学程序处理，求得药动力学参数[3]。

静脉注射后甘草酸单铵在体内最大血药浓度(Cmax)为(470.3±85.9)mg/L、达峰时间(Tmax)为(30.1±16.2)min，0～∞药时曲线下面积(AUC0～∞)为(95 752.4±5 781.5)mg/(L·min)，0～ t药时曲线下面积(AUC0～t)为(83861.1 ±4 518.9)mg/(L·min)，清除率(CLz)为(0.000 8±0.000 2)L/(min·kg)，表观分布容积(Vz)为(0.19±0.03)L/kg，半衰期(t1/2z)=(145.3±35.3)min。

3 讨论

笔者比较了甲醇、乙腈和三氯乙酸沉淀蛋白的效果，结果甲醇沉淀蛋白后，甘草酸单铵峰形以及保留时间比较理想。本试验建立的反相高效液相色谱法测定甘草酸单铵的血药浓度，样品处理简单，专属性高，线性范围包括了所有体内血药浓度实测数据点，高、中、低3个质量浓度水平的回收率均大于90%，日内及日间变异均小于10%，达到了生物样品测定的要求[4]。

[1]李松龙.甘草酸二铵胃内滞留漂浮型缓释片兔体内药动学[J].中国医院药学杂志，2008，28(13):1 079-1 082.

[2]孙 黎，曹惠明，沈金芳，等.静滴异甘草酸镁注射液的人体药代动力学研究[J].中国药理学通报，2005，21(11):1 348-1 351.

[3]孙曼春，方世平，王智勇，等.盐酸左氧氟沙星在健康人体内的药代动力学研究[J].中国药业，2010，19(3):5-6.

[4]付志玲，刘春芝，房敏峰，等.双丹方中丹皮对丹参药代动力学的影响[J]. 中成药，2010，20(1):127-130.