不同的存放温度及时间下网织红细胞计数结果的分析

盘国雄 梁燕媚 谢中兴

不同的存放温度及时间下网织红细胞计数结果的分析

盘国雄 梁燕媚 谢中兴

目的探讨血液标本存放温度和存放时间对网织红细胞计数结果的影响。方法对80例健康成人标本按六个不同时间段进行网织红细胞计数的测定，得出测定结果。结果网织红细胞计数结果随着标本的存放温度和时间不同测定结果降低各异。结论血液标本的存放温度和时间对网织红细胞计数结果影响较大，在临床检验工作中应引起重视。

网织红细胞;活体染色;温度;时间

影响网织红细胞计数结果的因素很多，包括染液的性质，染色的温度、时间及标本的存放条件和时间等。尤其是标本的存放温度和时间对网织红细胞计数结果影响较大。为了探讨标本不同的存放条件和存放时间对网织红细胞计数结果造成的影响，笔者采集了80名健康成人静脉血。对同一人份静脉抗凝血分别在4℃、室温(22℃～28℃)和37℃条件下存放2 h、4 h、8 h、24 h、48 h，然后分别用新亚甲蓝加醇溶液进行活体染色［1］。在油镜下计数1000个红细胞中网织红细胞数，分析标本在不同的保存条件下对网织红细胞计数结果的影响。

1 材料与方法

1.1 材料来源80名健康成人静脉抗凝血，用EDTA-Na2抗凝。

1.2 对同一人抽取静脉抗凝血分三份，根据标本不同的存放条件和存放时间情况，先对标本进行室温平行后再检测。

2 结果

2.1 实验结果(表1)。

表1 不同存放温度和时间网织红细胞计数结果(±s，%)

表1 不同存放温度和时间网织红细胞计数结果(±s，%)

温度时间(h) 2 4 8±0.16 4℃1.24±0.191.17±0.241.13±0.250.94±0.140.66±0.18 37℃1.26±0.251.05±0.220.82±0.170.49±0.12 8 2448室温1.21±0.271.16±0.320.93±0.180.67±0.150.3 0.23±0.13

在室温(22-28℃)条件下存放8 h内与4℃条件下存放24 h内网织红细胞计数结果无显著差异(P＞0.05)。置于37℃条件下超过8 h网织红细胞结果偏低，涂片沉渣多，背景脏，无网状结构网织红细胞。无论置于何种条件下的标本都会随着时间的延长而致网织红细胞结果逐渐偏低。因此作网织红细胞计数应在2 h内进行其效果最佳，而37℃条件下存放应不超过4 h。

2.2 三种温度条件下的相应时间点的计数结果比较，在2 h、4 h内各组的计数结果差异无统计学意义(P＞0.05)，其他相同时间点的计数结果均有差异(P＜0.05)。37℃试验组中最小值位于24 h和48 h，在相同的时间点中与室温及4℃条件下结果存在显著性差异(P＜0.05)，37℃存放24 h、48 h时计数结果明显低于室温及4℃条件下的计数结果(见表1)。

3 讨论

网织红细胞检测是临床上多种血液疾病的参考指标，例如对慢性贫血和缺铁性贫血的鉴别有一定的价值［2］，白血病患者网织红细胞较正常人偏低［3］等。网织红细胞是一种尚未完全成熟的红细胞，胞浆内尚存在嗜碱性的RNA物质与新亚甲蓝活体染色后呈蓝色的网状及点状结构。网织红细胞计数结果数量的变化能间接反映骨髓的造血功能，根据有关文献报告，在正常生理情况下，骨髓释放到外周血中的网织红细胞成熟时间需2 d，在本试验中可见部分网织红细胞其胞质中的RNA在37℃条件下存放1 d后即消失。由此可见其胞质中的RNA随着网织红细胞成熟的时间推移即逐渐消失，尤其是标本保存在接近人体温度的37℃环境中放置的时间趆长其RNA消失的速度趆快。标本置于37℃条件下4 h内其网织红细胞计数结果并未见明显下降，但在放置8 h后网织红细胞计数结果降低较快，放置时间超过24 h后网织红细胞计数结果则降低明显，由此可见在37℃条件下存放时间超过8 h的血液标本已不适合作网织红细胞计数。而在室温与4℃条件下存放的标本在8 h内网织红细胞计数结果未见明显异常，可见随着保存温度的降低其保存时间越长。特别是在4℃条件下其保存时间更长，保存时间超过24 h后其网织红细胞计数结果也未见明显下降，其原因是网织红细胞在低温环境中其细胞代谢减慢，因此RNA消失较慢。因此日常工作中作网织红细胞计数检测应在2 h内进行其效果最佳，在37℃条件下存放应不超过4 h，在室温条件下存放不应超过8 h，而在4℃条件下保存期最长，但也不能超过24 h。综上实验结果，笔者认为对于一些不能及时检测的标本应保存在4℃条件下，并在24 h内检测完毕为宜。

［1］秦德柱，关国坤，王凤仁.网织红细胞染色方法的改进．中华医学研究杂志，2003，3(1):72．

［2］褚静英，陆玉霞，羽晓瑜，等.抗凝剂对网织红细胞检测的影响．中国医药导报，2009，6(19):115-116．

［3］邱丽君，高瑞香，许颖彬.急性白血病化疗患者未成熟网织红细胞指数的临床观察．中国医学检验杂志，2005，6(1):34-35．

ObjectiveTo explor the storage time of blood specimen that influence the Reticulocyte Count results.MethodsDetect the Reticulocyte Count of blood specimen which from 80 healthy adults on five different period，and get results.ResultsIt appeared different declining Reticulocyte Count results depend on different storage temperature and time ConclusionThe storage temperature and time of blood specimen was biggish influence to the Reticulocyte Count results，which in the clinical inspec-tion work should be taken seriously．

Reticulocyte;Living dyeing;Temperature;Time

526060肇庆市第二人民医院

1.3试剂制取染液(新亚甲蓝加醇溶液):第I组溶液-取0.9%生理盐水80 ml与30 g/L枸橼酸钠20 ml，混匀，称取1.2 g新亚甲蓝溶于其中，过滤备用;第Ⅱ组溶液-异丙醇乙醇溶液按1:1混合，新制备的醇溶液备用。将第I和Ⅱ组溶液按9:1混合，充分混匀，置棕色瓶内［1］备用。

1.4 方法将置于4℃、室温和37℃条件下摆放2 h，4 h，8 h，24 h，48 h后的静脉抗凝血分别加入试管中(染液及静脉抗凝血按1:1混合)在37℃条件下与新亚甲蓝加醇溶液进行活体染色10 min，然后分别取各支试管内的混悬液推成薄片待干，在红细胞分布均匀的区域内油镜下计数1000个红细胞中网织红细胞的数量。每个样本重复2次，取其平均值。

1.5 统计学方法应用SPSS16.0统计软件分析处理，各组间网织红细胞计数结果的总体比较采用方差分析，以P＜0.05上个月统计学意义。