HPLC法测定复方青黛胶囊中靛玉红的含量

徐 斐，胡安青

(镇江市药品检验所，江苏镇江212003)

复方青黛胶囊收载于国家药品标准［1］，处方由青黛、马齿苋、白芷、土茯苓、紫草、贯众、蒲公英、丹参、粉萆薢、白皮、乌梅、五味子(酒制)、山楂(焦)、建曲组成。具有清热解毒，化瘀消斑，祛风止痒的功能。临床用于热挟瘀、热毒炽盛证;进行期银屑病、玫瑰糠疹、药疹等治疗。但在控制产品的质量方面，原标准采用薄层扫描法测定复方青黛胶囊中靛玉红的含量，其操作过程复杂，重现性、稳定性、精密度均较高效液相色谱法差。而笔者以高效液相色谱法测定复方青黛胶囊中靛玉红含量，结果表明，方法简便，专属性强，可用于复方青黛胶囊的质量控制。

1 仪器与试药

1.1 仪器 SK250LH超声波清洗器 (上海科导超声仪器有限公司);Waters高效液相色谱仪系统(1525泵、2487紫外可见光光度检测器、Empower工作站);BP211D型电子天平(赛多利士)。

1.2 试药 靛玉红对照品(中国药品生物制品检定所，批号110717－200204);复方青黛胶囊(陕西医药控股集团XX制药有限责任公司，批号:110202，101204，100406);甲醇为色谱纯(Merck KgaA，Germany);水为纯化水，其他均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Kromasil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm);流动相［2］:甲醇 － 水(70∶30);流速:1.0 mL·min－1;检测波长:292 nm;柱温:室温。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取靛玉红对照品9.90 mg，置于100 mL量瓶中，加三氯甲烷－甲醇(1∶9)混合溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得靛玉红对照品贮备液(含靛玉红 99.0 μg·mL－1)。精密量取 1 mL，置于10 mL 量瓶中，加三氯甲烷－甲醇(1∶9)溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(含靛玉红 9.90 μg·mL－1)。

2.2.2 供试品溶液的制备［3］取本品10粒的内容物，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于4粒内容物的重量)，置具塞锥形瓶中，加乙醚20 mL，超声处理30 min，滤过，用适量的乙醚洗涤滤渣和滤器两次，合并洗涤液和滤液，再用10%氢氧化钠溶液洗涤4 次(15 mL、15 mL、15 mL、10 mL)，弃去氢氧化钠溶液，取乙醚层挥干，残渣加三氯甲烷－甲醇(1∶9)混合溶液使溶解，转移至5 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)过滤，取续滤液即得。

2.3 专属性考察 按标准处方量及制法制得不含青黛的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液，进样测定，结果阴性对照色谱在与对照品色谱相应位置上无色谱峰出现，表明阴性对照对测定结果无干扰，方法专属性良好，结果见图1(C)。

图1 靛玉红色相图 (A)靛玉红对照品;(B)供试品;(C)阴性对照

2.4 线性关系 精密吸取靛玉红贮备液 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL，分别置于10mL量瓶中，加三氯甲烷－甲醇(1∶9)混合溶液使溶解并稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件测定，分别进样10 μL，记录峰面积。以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。结果进样量在9.90～49.50 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程 Y=534.834X+0.010(r=0.999 9)。

2.5 精密度试验 取同一对照品溶液，依法操作，连续进样5次，每次10 μL。结果靛玉红对照品峰面积的 RSD为1.0%，表明精密度良好。

2.6 重现性试验 取同一样品5份，按2.2.2项下的方法制备供试品溶液，分别进样，依法测定峰面积，计算含量。结果靛玉红对照品含量的RSD为0.5%(n=5)，表明方法重现性较好。

2.7 稳定性试验 在本试验条件下，将样品溶液每隔2 h进样10 μL。靛玉红峰面积的RSD为0.7%。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批样品(110202)约相当于2粒内容物的重量，共6份。分别加入靛玉红贮备液(含靛玉红 99.00 μg·mL－1)2.0、2.5、3.0 mL，混匀，同供试品溶液制备，照样品测定方法测定，计算回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定 取3批样品，按供试品溶液制备方法制备溶液，进样10 μL，记录峰面积，按外标法计算靛玉红含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 在样品溶液制备中，我们对比了回流提取、索氏提取和超声提取等方法，以超声提取时间短，提取完全，杂质较少;提取溶液用10%氢氧化钠溶液洗涤后杂质明显减少，有利于色谱的测定。

表1 回收率试验结果(n=6)

表2 样品含量测定结果(n=3)

3.2 试验表明，本法在一定浓度的范围内线性、精密度、稳定性和回收率结果可靠，方法简便，快速，重现性好，可作为该制剂质量控制方法。

［1］国家药品监督管理局.国家药品标准新药转正标准(第63册)［S］.北京:人民卫生出版社，2009:70－72.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:185.

［3］张俊燕.RP－HPLC法测定消炎退热颗粒中靛玉红的含量［J］.药学与临床研究，2007，15(2):163 －164.