HPLC法测定复方治障明眼液中大黄酚的含量

广东岭南职业技术学院(510663) 杨凤琼 罗宪堂 叶殷殷 陈桂江

广东岭南职业技术学院在研的复方治障明眼液主要由决明子、密蒙花、灯盏花等中药组成，临床用于预防和治疗白内障。为有效控制该制剂的质量，除对方中君、臣等数味药分别进行理化定性鉴别及薄层色谱鉴别外，还用HPLC法对主药决明子的有效成分大黄酚进行了含量测定，暂定复方治障明眼液中大黄酚含量不低于0.05mg/ml。本实验参考文献报道的方法[1～3]对含量进行的精密度、重复性、回收率实验均获得满意结果，为制订复方治障明眼液质量标准提供了可行的依据。

1 仪器和试药

附图1 各种溶液的HPLC谱图

附图2 大黄酚标准曲线

UltiMate3000高效液相色谱仪(德国戴安) chromeleon色谱工作站；紫外检测器；Satorius BP211D电子分析天平(Satorius Co.Ltd.Germany,d=0.01mg)； CQ-200超声清洗仪 (上海音波声电科技公司)。 大黄酚对照品(110796-200716，中国药品生物制品检定所)；复方治障明眼液(广东岭南职业技术学院实验室提供)；色谱级甲醇（Merck公司），试验所用水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法和结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取大黄酚对照品适量，加甲醇制成每毫升含大黄酚0.1502mg的对照液作为储备液。对照品色谱图及阴性对照见附图1。

2.2 供试品溶液制备 精密量取复方治障明眼液10ml，用稀盐酸调节pH3～4，加CHCl3萃取三次（15ml、10ml、10ml），在水浴上蒸干，用甲醇溶解，定容至10ml容量瓶中即得。

2.3 复方治障明眼液含量测定

2.3.1 色谱条件色谱柱：Hypersil C18（250mm×4.6mm，5µm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸-（85︰15）；柱温25℃；流速：1.0ml•min-1；检测波长：254nm；进样量：对照品溶液与供试品溶液各进10µl。

2.3.2 标准曲线的绘制及线性范围考察 精密量取2.1项下混合对照品储备液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、2.0ml各定容成10ml，0.45µm微孔滤膜过滤，分别吸取上述各溶液10µl进样，测定各浓度下的峰面积，试验结果见附表1。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制大黄酚标准曲线，得附图2。以峰面积(y)对浓度(x)进行线性回归，得回归方程y=4048.2x+6319.4，线性范围：3.004～30.04µg，相关系数γ是0.9994，表明在此范围内标准曲线线性关系好。

2.4 精密度实验 取同一对照溶液重复进样6次，每次10µl，测定大黄酚峰面积。试验结果如附表2，所测大黄酚峰面积RSD为1.4%，表明该仪器精密度良好。

附表1 大黄酚线性关系考察实验结果

附表2 大黄酚对照品精密度试验结果

附表3 含量测定重复性实验

附表4 加样回收率试验

附表5 样品含量测定表

2.5 重复性实验 照“含量测定”方法，对同一批样品，分别制备6份供试品溶液，进行HPLC测定，结果见附表3，结果表明，本方法重复性较好。

2.6 回收率实验 采用加样回收测定方法，照“含量测定”方法制备，供试品溶液进行HPLC法测定，结果见附表4，结果表明，本法的回收率高。

2.7 样品的测定 按上述测定方法，对三批复方治障明眼液样品进行大黄酚的含量测定，结果见附表5，根据上述测定结果，暂定本品大黄酚含量不少于0.05mg/ml

3 讨论

3.1 本实验根据文献报道，在254nm波长处测得最大吸收，故选择254nm作为检测波长，取得较好效果。

3.2 本实验以甲醇-0.1%磷酸(85︰15)为流动相，调节pH值为2.8，在此条件下，对照品和供试品中大黄酚出峰时间基本一致，且供试品周围无其它杂质峰干扰，峰形和分离效果均较好。实验过程中确实体会到流动相的pH值对分离效果有较大影响。因此，只有选择合适的流动相和合适的检测波长，并且确保标准曲线线性关系好，才能定量准确。

3.3 本实验建立了中药复方滴眼剂中大黄酚的HPLC方法的含量测定，该方法简单、准确、可靠，为今后生产出高效、优质的中药复方滴眼剂提供了可靠的质量保证。