HPLC法测定川黄醒脑口服液中黄芪甲甙的含量

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黄芪(Radix astragali)是多年生草本豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranceus（Fisch.）Bge. var. mongholicus(Bge.)Hsiao或膜夹黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.)Bge.的干燥根[1]。含有多种化学成分，如皂苷类、黄酮类、多糖类等，黄芪甲苷(AS I)为黄芪中10多种皂甙的主要成分，为黄芪制剂质量检定的指标成分，结构为三萜皂甙。其中皂苷类是黄芪的主要活性成分，具有降血压、镇静、镇痛等作用。目前，关于黄芪皂苷的定量测定多采用比色法、薄层扫描法、HPLC-UV法、HPLC-示差折光检测器法。

川黄醒脑口服液是由黄芪、川芎、当归等五味药材组成的纯中药复方制剂，具有益气活血、化瘀通络之功效，主要用于脑梗塞急性期的治疗[2]。本文采用高效液相色谱法对其中的主要成分黄芪中的黄芪甲甙进行了定量测定，实验表明，测定方法回收率及精密度都较好，实验结果准确可靠。

1 仪器与试药

1.1 仪器 日本岛津液相色谱仪，LC-6A泵，SIL-6A自动进样器，SPD-6AV紫外检测器及C-R3A数据处理装置。

1.2 药品 黄芪甲甙对照品，购自中国药品生物制品检定所(批号110781-200512；规格：20 mg，供含量测定用）；川黄醒脑口服液:沈阳市康元制药厂生产。

1.3 试剂：甲醇和乙腈均为色谱纯，水为双蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 实验方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱：YWG-C18柱（4.6mm×250mm)，流动相：乙腈:水（1:2），磷酸调pH值=3；流速：0.8ml/m i n；检测波长：2 0 5 n m；灵敏度：0.1AUFS。在该色谱条件下，黄芪甲甙的保留时间约为18分钟。[3～5]

2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲甙对照品适量，加甲醇溶解并定容至每1ml含0.5mg的溶液作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 精密量取样品20ml，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用水洗涤2次，每次15ml，弃去水液，正丁醇溶液用无水硫酸钠脱水，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解并转移至2ml的量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 阴性对照样品溶液的制备 取不含黄芪药材的处方其他药材，按相同工艺制得阴性对照样品，再按上述供试品溶液制备方法，制得阴性对照样品溶液。

2.5 线性关系考察 分别精密吸取标准品溶液5、10、15、20、25ul，按上述色谱条件测定，以峰面积的对数为纵坐标，黄芪甲苷进样量的对数为横坐标，绘制标准曲线，结果表明，黄芪甲苷在2.5～12.5ug范围内线性关系良好，其线性回归方程为Y=1.0097X+5.9010，r =0.9998。

2.6 精密度实验 分别精密吸取黄芪甲甙标准溶液15ul，按色谱条件连续进样5次，测定峰面积，结果RSD为1.78%（n=5）,精密度良好。

2.7 加样回收率试验 精密称取已测黄芪甲甙含量的川黄醒脑口服液样品20ml，5份（已知含量为34.0ug/ml）。分别精密加入黄芪甲甙对照品，按样品测定项下供试品溶液制备方法操作，进样测定，计算平均回收率为95.32%，RSD=1.69%，结果见附表。

2.8 稳定性实验 样品溶液在室温放置，每隔0.5h测定一次，共测定4次，测定峰面积，计算黄芪甲苷的含量(ug/ml)，分别是0.0341、0.0349、0.0345、0.0342，RSD为1.04%，证明样品溶液中黄芪甲甙含量至少在2h内稳定。

2.9 重复性试验 分别平行取同一批号样品6份，依法处理后，进样10ul测定，计算黄芪甲甙的含量，平均值为34ug/ml，RSD=1.98%。

3 讨论

3.1 黄芪中有十几种皂甙，以黄芪甲甙含量最高，为主要有效成分，我们参照中国药典（95版）的提取方法，有效的去除了其他皂甙的干扰。

3.2 测定波长的选择 黄芪甲甙在紫外区仅在200nm左右有末端吸收，因此在200～210nm范围内选择测定波长，实验表明，波长越长，噪音越小，但灵敏度也随之降低，综合这两个因素，我们选205nm为测定波长。

附表 加样回收率试验结果