氧化铝对正天丸中芍药苷含量测定结果影响的探析

北京市东城区药品检验所（100027）尤立华 赵希贤

基层药检所的工作是按照药品的质量标准对辖区的抽验药品进行检验，在对不合格药品的判定过程中，除严格执行标准外，还要对各种影响因素进行试验分析，从而得出正确的判定结果。近期一份抽验检品正天丸的检测过程表明，仅仅依靠标准有时不能得出正确的结论，因为各种试剂、各种条件经常会发生变化，所以要求我们检验人员要具备各种检验标准的分析研究能力，才能得出一份合格的检验报告。

正天丸[1]是由钩藤、白芍、川芎、当归 、地黄、白芷等十五味中药组成，具有疏风活血、养血平肝、通络止痛的功效，用于外感风邪、瘀血阻络、血虚失养、肝阳上亢引起的偏头痛，紧张性头痛，神经性头痛，颈椎病型头痛，经前头痛。质量标准为国家药品标准[2]WS3-B-3169-98-（2006）。

按照质量标准进行含量测定，芍药苷含量测定值很低，且测定时样品间的重现性不好，为了得出正确的判定结果，对供试品制备过程进行分析，发现不同批号的氧化铝可严重影响检测的结果，因此在检验中，当发生不合格等情况时要求我们认真查找测定过程中的影响因素，从而得出正确的判定结论。我们以对正天丸含量测定的具体情况为例，进行具体阐述，内容如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器 岛津LC2010液相色谱仪。

1.2 试药 芍药苷对照品(批号：110736-201035)（由中国药品生物制品鉴定所提供）；层析用中性氧化铝（100～200目）（批号：F20080305，F20090804，F20110124)（国药集团化学试剂有限公司生产）；正天丸（批号：110515H）（华润三九医药股份有限公司生产）；试剂为分析纯，乙腈为色谱纯。

2 方法

2.1 正天丸质量标准含量测定方法

2.1.1 色谱条件

色谱柱：WAT045905C18（150mm×4.6mm，5μm）；流动相为乙腈-水（15：85）；检测波长为230nm；温度：30℃；流速：1.0ml/min。

2.1.2 对照品溶液制备

取芍药苷对照品，精密称定，置50ml的容量瓶中，加甲醇40ml后超声处理10分钟使其充分溶解，加甲醇至刻度，摇匀，精密量取1ml，将其置于10ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1ml含39.94μg的溶液，即得所需的对照品溶液。

2.1.3 供试品溶液制备

取本品30g，研细，取约1g，精密称定，加50%乙醇15ml，超声处理（功率200W，频率59KHZ）30分钟，用适量的50%乙醇洗涤容器和残渣，洗液并入滤液中，蒸干，残渣中加入80%甲醇5ml使之溶解，加在中性氧化铝柱（内径0.9cm，100～200目中性氧化铝4.5g）上，用80%甲醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜滤过，取续滤液即得。

2.1.4 测定法 精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪中进行测定，即得。

2.1.5 系统适应性试验

在上述色谱条件下，取对照品溶液，连续进样5次，其峰面积测量值的RSD值为1.56%。理论板数均大于5000。样品中芍药苷峰附近未见干扰峰。

2.2 本批样品含量测定结果

根据标准规定，测定结果应不少于0.5mg/g，但样品测定结果为0.06mg/g 和0.09mg/g ，结果表明两份样品含量低于标准限值近8倍，且样品间平行性不好。由于系统适应性试验符合要求，复测时对照品重现性良好，故排除仪器设备的影响；又因芍药苷含量测定多采用超声提取的方法[3][4]，未发现超声提取对芍药苷测定有重大影响，因此考虑针对氧化铝柱层析过程进行试验，以找到检测过程中芍药苷含量测定结果的影响因素。

2.3 氧化铝柱层析洗脱速度不同时样品的测定结果

一般试验时，氧化铝柱层析的洗脱速度会对含量测定结果产生影响，因此设计试验，分别采用不同的洗脱速度，层析氧化铝用量为2g进行实验，测定结果（见附表1）。

实验结果表明：洗脱速度对芍药苷含量测定结果有一定影响，但洗脱速度不同，测定结果的差别不大，不会对检测结果产生本质性的影响。

2.4 不同用量氧化铝的样品测定

氧化铝用量不同，对成分的吸附和保留程度也不同，因此采用不同用量氧化铝处理样品，比较芍药苷的测定结果，层析氧化铝的用量分别为0g，2g和4g，测定结果（见附表2）。

实验结果表明：氧化铝用量不同时，对芍药苷的测定结果有很大影响，不进行氧化铝柱层析洗脱样品即氧化铝用量为0g时，测定结果为合格。

2.5 不同批号及不同用量氧化铝样品测定结果

样品采用氧化铝柱层析的方法测定结果为不合格，而不进行氧化铝柱层析则合格，是标准有错误吗？但本药品已研发多年，且其它药品的芍药苷测定过程也有采用氧化铝柱层析的。如果本次检验不采用氧化铝处理，那么检验结果不合法，由此可见，氧化铝就成为影响含量测定结果的关键因素。考虑到是否是氧化铝本身存在差异，因此我们考察了不同批号的氧化铝对芍药苷测定结果的影响，测定结果见附表3。

实验结果表明，当采用11批号层析用氧化铝测定时，使用不同用量的氧化铝处理后的样品，含量测定结果差别不大，且均符合标准规定，即含量测定值为合格。因此采用不同批号的氧化铝测定时，芍药苷的含量测定结果有很大差异，此差异可导致检测判定结果的不同。

2.6 不同批号及不同用量氧化铝对芍药苷对照品测定结果

由于样品中含有其它成分，为排除其它成分可能对氧化铝柱层析吸附作用的干扰，同时也为了验证不同批号氧化铝对芍药苷含量测定结果的影响，设计实验，采用芍药苷对照品溶液进行氧化铝柱层析，以验证不同批号不同用量层析用氧化铝对芍药苷含量测定的影响。

精密吸取对照品溶液3ml（3ml芍药苷的含量为1.198mg），加在中性氧化铝柱（内径0.9cm，100～200目中性氧化铝）上，其余按照供试品制备项下操作，测定结果见附表4。

实验结果表明：进行氧化铝柱层析后，和实际芍药苷含量1.198mg比较，芍药苷含量均下降，且证实了三种批号层析用氧化铝处理芍药苷后，测定结果均不相同。

附表1 不同洗脱速度样品测定结果（n=2）

附表2 氧化铝不同用量样品测定结果（n=2）

附表3 不同批号及不同用量氧化铝样品测定结果（n=2）

附表4 不同批号及不同用量氧化铝对照品测定结果（n=2）（mg）

3 讨论

3.1 在过氧化铝柱层析时，相同用量的氧化铝，洗脱速度不同，对芍药苷的吸附多少不同，结果不同，应适当控制洗脱速度。

3.2 在过氧化铝柱层析时，氧化铝用量不同，也会对芍药苷含量测定的结果产生影响，但按照标准操作应能达到要求。

3.3 不同批号的柱层析氧化铝对芍药苷含量测定的结果有重要影响，可导致判定结果的错误。

在方法制定时，使用氧化铝柱层析，不仅要考虑氧化铝用量、洗脱速度、洗脱液体积，还应充分考虑到氧化铝有可能发生变化，对芍药苷测定结果产生的影响；有时一些问题如氧化铝的吸附能力、各种变化不可能完全与制定标准时一致，这就有赖于药品生产企业、检验部门及药品质量研究部门等及时发现问题、解决问题，以避免误判的发生，影响药品含量测定的结果。

3.4 在质量标准使用过程中，我们要随着各种条件的变化，针对有些原来不重要的细节要逐渐变为需受控的条件，例如本次实验中采用了三种批号的氧化铝，结果发现它们对芍药苷均有吸附作用，且吸附大小不同，这些变化了的细节作为生产厂家应该最为熟悉。

当我们每发出一份不合格报告时，为保证不错判，对于方法中容易存在问题的地方我们会与企业进行沟通，以避免误判。因此，我们也希望企业能真正对自己的药品负责，及时发现质量标准中逐渐成为判定结果影响因素的那些细节，并对标准提出修改，以便能更好地控制药品的质量。