化学发光法与酶联免疫吸附法检测血清抗结核抗体的比较研究

阳幼荣 吴雪琼 张俊仙 梁 艳 王 兰

解放军第309医院全军结核病研究所 军队结核病防治重点实验室，北京 100091

据全国第五次结核病流行病学抽样调查结果显示，目前我国结核病疫情仍非常严重，每年新发病例约为130万，占全球发病总数的14.3%[1]。结核分枝杆菌在感染并增殖的过程中会激活人体的免疫系统，使机体产生相应的抗体，因此，检测血清中特异性抗体水平可反应受检者感染情况[2]。酶联免疫吸附试验（ELISA）是应用最为广泛的一种血清学检测手段[3-5]，但由于普通ELISA法普遍采用TMB进行显色，其检测灵敏度一般在“ng”水平，对于特异性抗体水平低的血清标本检测效果不佳。理论上说，采用更为灵敏的化学发光检测方法会提高检测的灵敏度。为比较化学发光免疫分析（chemiluminescence immunoassay，CLIA）与ELISA法对结核病辅助诊断效果，本文以360例不同来源的血清作为检测对象对两种不同的试剂盒进行对比评价，比较二者在结核病实验室检测中的检测效果情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

健康人血清标本来自于本院2011年8～9月经体检无疾病的健康人群，共100例；活动性肺结核患者血清标本来源为本院结核科2011年5～9月经过临床确诊并住院患者的首次采血血清标本，共260例。

1.2 检测仪器

恒温孵育箱、DM-3全自动洗板机、KPS-KM型微孔板发光分析仪。

1.3 检测试剂及方法

化学发光法检测试剂盒和酶联免疫法检测试剂盒分别由北京科美东雅生物技术有限公司和北京万泰生物药业股份有限公司提供。检测操作严格按试剂盒说明书进行。

1.4 统计学方法

应用SPSS 10.0统计学软件进行数据分析，计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两种试剂盒对血清标本的检测结果见表1。由表1可见，活动性肺结核组中，化学发光检测试剂盒的阳性符合率为 71.2%（185/260），ELISA检测试剂盒的阳性符合率为58.5%（152/260），两者差异有统计学意义（χ2=9.18，P ＜ 0.05）；健康人群组检测中，两者的阴性符合率分别为89.0%（89/100）和 93.0%（93/100），差异无统计学意义（χ2=0.98， P ＞ 0.05）。

3 讨论

结核分枝杆菌感染人体后，机体内会产生针对结核分枝杆菌的抗体，利用血清学方法检测体内抗结核抗体是发现结核病的有效手段。胶金体法虽具有操作简便、快速、成本低廉等优点，但其灵敏度较低，只适用于定性检测。经典酶联免疫吸附试验（ELISA）应用范围较为广泛，还可用于半定量检测，但对于低抗体水平标本表现欠佳。化学发光法对于标本的检测限达到了0.06 ng/mL[6]灵敏度，远高于传统ELISA法1 ng/mL的灵敏度，该方法在其他疾病检测领域己见相关报道，且具有较高的灵敏度[7-8]，但国内尚未见其用于结核抗体检测方面的报道。由于发学发光法检测灵敏度高，本试验中应用CLIA法检测试剂盒检测活动性肺结核患者血清中抗结核抗体的阳性标本检出率显著高于普通ELISA法，对于普通ELISA法检测中的“灰区”部分可进行有效区分，达到提高灵敏度的目的，且CLIA法在明显提升阳性标本检出率的同时，假阳性率升高不明显。在本实验中CLIA法检测试剂盒较普通ELISA法检测试剂盒在阳性检出率提高了12.69%的同时，假阳性发生率只提高了4.0%，提示其适合用于结核病的实验室检测。

表1 两种试剂盒检测血清标本中抗结核抗体情况

[1]卫生部.我国结核病人数全球第二[N].公益时报.2011-03-22.

[2]Xueqiong W，Yourong Y，Junxian Z，et al.Comparison of antibody responses to seventeen antigens from mycobacterium tuberculosis[J].Clinica Chimica Acta，2010，411（19-20）：1520-1528.

[3]王林，张国平.应用ELISA法检测无偿献血者梅毒结果分析[J].中国现代药物应用，2010，4，（23）：233.

[4]李芳秋，周万青，史利宁，等.检测抗烟曲霉分泌蛋白抗体的ELISA法及其诊断价值[J].临床检验杂志， 2010，28（02）：107-109.

[5]王文，王锦红，缪晓辉，等.ELISA方法检测肝癌血清标志物的应用[J].中国生物制品学杂志，2010，23（3）：307-309.

[6]肖勤.化学发光免疫分析新进展[J].分析试验室，2011，30（1）：111-122.

[7]张卫国，吴国球.自动化学发光免疫分析法测定血清T3、T4和TSH的评价[J].现代医学，2005，33（2）：111-113.

[8]Odawara F，Abe H，Kohno T，et al.A highly sensitive chemiluminescent reverse transcriptase assay for human immunodeficiency virus[J].J Virol Methods，2002，106（1）：115-124.