HPLC测定翼梗五味子中五味子酯甲的含量

丁蓓蒂 陈 浩 刘 航

四川省乐山市食品药品检验所，四川 乐山 614000

木兰科植物翼梗五味子Schisandra henryi Clarke，分布于我国长江以南各省区。为《四川省中药材标准》2010年版“西五味子”来源之一，有收敛固涩、益气生津、补肾宁心等功效。根据文献报道及药效学研究结果，翼梗五味子中含有五味子酯甲、去氧五味子素、五味子乙素、五味子甲素等成分。为此，本文采用高效液相色谱法对翼梗五味子中五味子酯甲进行了含量测定研究，为进一步建立五味子药材质量标准提供依据。

1 仪器与试药

美国Agilent1100液相色谱仪;五味子酯甲对照品为中国药品生物制品检定所提供 (批号1529-201001，含量测定用);翼梗五味子购自乐山市中药材公司 (样1-2号)、乐山市龙马药业 (样3-4号)、成都中药材市场 (样5-6号);四氢呋喃为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱 Diamonsil C18(250×4.6mm)4μm;流动相四氢呋喃 -水 (40：60)，检测波长为254nm，柱温为35℃，流速为1.0ml/min。对照品及样品的HPLC图见图1。

2.2 供试品溶液的制备 取样品粉末 (过三号筛)约 1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理 (功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 线性范围的考察

精密称取五味子酯甲对照品11.48mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液;精密量取贮备液 0.1、0.5、1.0、2.5、5.0，置 10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液及贮备液各10μl，注入高效液相色谱仪分别进行测定。以进样量 (μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为 Y=1187.7x-13.646，r=0.9999，结果表明五味子酯甲在 0.04592 ～4.592μg与峰面积线性关系良好。

2.4 精密度试验 精密量吸取五味子酯甲对照品溶液10μl，连续进样 5次，结果五味子酯甲峰面积的 RSD为 0.25%。

2.5 稳定性试验 精密量吸取供试品溶液20μl，分别于0，4，8，12，24h按上述色谱条件进样测定，计算RSD为0.58%。结果表明供试品溶液中五味子酯甲在24h内稳定。

2.6 重复性试验 精密称取翼梗五味子药材同批号样品6份，每份约1.0g，按前述供试品制备方法及色谱条件进行五味子酯甲含量测定，测得五味子酯甲平均含量 (按干燥品计算) 为0.0612%，RSD为1.82%。

2.7 回收率试验

精密吸取浓度为0.459mg/ml的对照品溶液1.0ml，共6份，分别置50ml锥形瓶中，水浴上挥干甲醇。取已知含量的样品 (1号样品，HPLC法测定含量为0.0612%)6份，每份约0.8g，共6份，精密称定，置上述圆底烧瓶中，按拟定方法进行供试品溶液制备和五味子酯甲含量测定(按干燥品计算)，结果见表1。

表1 回收率测定结果

以上试验结果表明，该方法准确度良好。

2.8 样品测定

按正文含量测定方法测定6批样品中五味子酯甲含量，结果见表2。

表2 样品的含量测定结果

3 讨论

3.1 色谱条件的选择

3.1.1 测定波长的选择

采用甲醇作溶剂制备五味子酯甲对照品溶液，在200～500nm波长下扫描其光谱图，结果在254nm波长处有最大吸收，故测定波长选定为254nm。

3.1.2 流动相的选择

采用流动相四氢呋喃-水 (40：60)对本品供试品溶液进行系统适用性考察，结果在该流动相下，本品五味子酯甲峰形对称，理论板数6000，分离度符合要求。因此选定四氢呋喃-水 (40：60)作为测定流动相。

3.2 提取方法及时间的考察

取本品粉末1.0g，4份为一组，精密称定，置锥形瓶中，每组分别精密加入甲醇25ml、乙醇25ml，称定重量，分别超声处理30min、45min、60min、90min或水浴上加热回流30min、45min、60min、90min，放冷，再称定重量，用所加溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。进样量20μl，按上述选定的色谱条件实验，结果表明：甲醇提取效果优于乙醇，采用超声处理30min与其余方法无明显差异，因此选定超声处理30min为本品提取方法。

3.3 本实验建立的翼梗五味子药材中测定五味子酯甲的高效液相色谱法，具操作性、稳定性及代表性。测定了翼梗五味子多批次药材中五味子酯甲含量，为五味子药材质量控制提供了依据。

［1]国家药典委员会.中国药典［S].一部.北京：化学工业出版社，2005：210.

［2]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志［M].第二十四卷.北京：科学出版社，1983：129-134.

［3]肖培根.新编中药志［M].第三卷.北京：化学工业出版社，2002：284-291.