HPLC-ELSD法测定排石胶囊中熊果酸的含量

徐富柱 程 龙

江苏省南京同仁堂药业有限责任公司，江苏 南京 210012

排石胶囊的处方来源于中国药典品种排石颗粒，由连钱草、车前子、木通、徐长卿、甘草、滑石等十味药组成。该方具有清热利水，通淋排石的功效，用于下焦湿热所致的石淋，症见腰腹疼痛、排尿不畅或伴有血尿，或泌尿系结石见上述证候者。原标准中采用分光光度法测定总黄酮的含量，缺乏专属性。本研究改用HPLC-ELSD法测定君药连钱草中熊果酸的含量，以更好的控制药品质量。

1 仪器与试药

Waters2695型液相色谱仪，Alltech-2000型蒸发光散射检测器，Empower工作站，空气发生器 (北京，中兴汇利)，Millipore-Q纯水器，梅特勒百万分之一电子天平。

甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为双蒸水。熊果酸对照品购自中国生物制品检定所，批号为110742-200314。排石胶囊 (自制)。缺味阴性样品：按处方分别配成相应的缺味处方药，模拟制剂工艺，加相应辅料制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：汉邦 Lichrospher5-C18柱 (4.6mm×250mm，5μm);流动相：甲醇 -水 -冰醋酸 (83∶17∶0.1); 流速：1.0ml/min，柱温：35℃;进样量：20uL;ELSD检测器参数：漂移管温度：72℃，气体流速：1.9L/min。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取熊果酸对照品约16.0mg，置25ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成浓度为0.64mg/ml的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

精密称取本品装量差异项下内容物细粉5.0g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，称定重量，超声处理30min(功率250W，频率50KHz)，取出，放冷，称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液25ml，蒸至适量，残渣甲醇溶解转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，用微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备

取缺连钱草药材的制剂5.0g，精密称定，同供试品溶液方法制备阴性对照溶液并测定。结果阴性无干扰，见图1～3。

图1 熊果酸

图2 排石胶囊

图3 阴性对照

2.3 系统适应性与专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各进样20uL，按2.1项下色谱条件测定，色谱图见图1-3。以熊果酸计，理论塔板数应不低于5000。

2.4 线性关系考察

取对照品溶液 (浓度为0.64mg/ml)分别进样10ul，15ul，20ul，25ul，30ul，35ul，按 2.1 项下色谱条件测定，记录峰面积。以进样量的常用对数为横坐标，以峰面积的常用对数为纵坐标，绘制标准曲线，得熊果酸的回归方程为 lgA=1.41lgC+5.15，r=0.9991(n=6)，结果表明熊果酸在6.400μg-22.400μg范围内呈良好线性关系。

2.5 精密度试验

取对照品溶液按2.1项下色谱条件连续进样5次，按已确定的色谱条件重复进样5次，测定峰面积积分值，计算RSD为3.5%。

2.6 稳定性试验

取供试品溶液，在室温放置0，2，4，8，12，24小时后分别进样，按2.1项下色谱条件测定。结果表明，样品溶液在24小时内基本稳定，样品峰面积的RSD为0.98%。

2.7 重复性试验

取同一批号样品，精密称取6份，制成供试品溶液，按2.1项下测定，熊果酸的平均含量为1.83mg/g，RSD为1.64%，表明重复性良好。

2.8 加样回收率试验

取已知含量的制剂六份 (含量为1.83mg/g)2g，精密称定，精密加入熊果酸对照品溶液 (3.80 mg/ml)1ml，挥干，照供试品溶液的制备方法制得溶液，测定，计算回收率，熊果酸的平均回收率为98.7%，RSD为2.10%，见表1。

表1 加样回收率测定结果

2.9 样品含量测定

取三批样品，按供试品溶液的制备方法制备成供试品溶液，测定样品含量，结果见表2。

表2 3批样品含量测定结果

4 讨论

4.1 连钱草具有利湿通淋、清热解毒、散瘀消肿的功效，临床上用于治疗热淋、石淋、湿热黄疸等疾病，是排石胶囊处方中的君药。本法采用高效液相色谱法测定连钱草中熊果酸的含量，能较好的控制该制剂质量。

4.2 曾对样品提取溶剂进行考察，分别选用甲醇、三氯甲烷、乙醚作为溶剂，按供试品制备方法制备样品，依色谱条件进样，计算含量。结果表明甲醇提取率高，提取杂质少，故优选甲醇作为提取溶剂。

［1]高磊，石蔷.HPLC测定遇上愈伤接骨胶囊中熊果酸的含量［J].中成药，2008，30(2);287-289.