HPLC法测定孕坤通胶囊中芍药苷的含量

宋志钊 刘 元 李星宇

广西中医药研究院，广西 南宁 530022

孕坤通胶囊处方来源于广西民间经验方，主要由赤芍、千斤拔等11味中药组成，具有活血化瘀，通经活络之功效，用于血瘀证女性不孕。中医学认为女子不孕最常见原因之一是血瘀停滞，赤芍在方中起祛瘀止痛，活血通经作用。研究表明赤芍抑制血小板聚集引，改善红细胞的通透性，增加红细胞对低渗张力的抗性，有一定稳定红细胞膜结构的作用［1，2]。另外，赤芍总苷能明显延长大鼠和小鼠的凝血时间，并能延长电刺激大鼠颈总动脉血栓形成的时间。因此，摸索本方中赤芍的指标成分芍药苷的含量测定方法，可作为控制本品质量标准的指标之一。现参考《中国药典》2005年版一部［3]，测定孕坤通胶囊中芍药苷的含量。

1 仪器与试药

日本岛津LC-10ATVP高效液相色谱仪，SPD-10AVP紫外检测仪;威玛龙色谱工作站;TC-C18柱 (4.6mm×250mm，5μm);KQ-100VDB双频数控超声清洗仪。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余所用试剂均为分析纯。芍药苷对照品 (中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号110736-200526);孕坤通胶囊3批，批号为：100401、100402、100403，由南宁市冠峰制药有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Appollo C18色谱柱 (4.6mm×250mm，5mm);检测波长为230nm;流动相：甲醇 -0.05mol/L磷酸二氢钾溶液 (28：72);流速：1.0 mL·min-1;柱温为室温。理论塔板数按芍药苷峰计算不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品9.9mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成396μg/ml对照品溶液，备用。精密吸取上述对照品溶液1.0mL，置10mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得 (39.6μg·mL-1)。

2.3 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物20粒，精密称定，研细，混匀，取约0.5g，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇 20ml，超声处理 30分钟 (频率45kHz、功率90W)，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 标准曲线及线性范围考察 精密称取芍药苷对照品9.9mg，置25ml量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成396μg/ml对照品溶液，备用。分别精密吸取0.25、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml，分别置 10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，进样10ul，测定。以芍药苷对照品进样量μg为横坐标 (X)，峰面积积分值为纵坐标 (Y)绘制标准曲线，得回归方程为：Y=6.94×105X+1.43×104，r=0.9997。结果表明：芍药苷进样量在0.099 ～1.584μg之间与峰面积积分值呈线性关系。

2.5 精密度试验 分别吸取同一供试品溶液 (100401)，进样5次，依次测定，即得。测得供试品RSD为0.42%。

2.6 重复性试验 取同一批号 (100401)样品，按供试品溶液制备方法制备6份，分别进样，测定，即得。结果测得芍药苷为0.835mg/粒，RSD=0.48%(n=6)。表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液分别于0，4，8，12，16h进行测定，即得。结果供试品中槲皮苷含量的RSD为0.47%，表明供试品溶液在16h内保持稳定。

表1 加样回收试验测量结果 (n=6)

2.8 加样回收试验 取已测知含量 (0.835mg/粒，批号100401)的供试品0.25g，精密称定，精密加入396μg/ml芍药苷对照品溶液1.2ml，按供试液制备项下的方法制备。结果芍药苷平均回收率为98.2%，RSD为1.25%(n=6)，结果见表1。

2.9 样品测定 按供试液的制备及检测方法，测定3批孕坤通胶囊中芍药苷含量 (mg/粒)分别为 0.846、0.732、0.798 。

3 讨论

3.1 对芍药苷对照品溶液进行紫外扫描，其结果在230nm处有最大吸收，故确定检测波长为230nm。参照《中国药典》2005年版一部里有关芍药苷含量测定方法，以甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相，考察多个比例，最后确定甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液 (28：72)的比例较为适合。

3.2 采用超声处理30min、加热回流1h、索氏提取2h进行提取方法考察，结果三者提取结果相差不大，但超声处理更简便、快捷，故采用超声处理法。采用甲醇、水、50%甲醇作提取溶剂进行考察，用甲醇提取所得含量比高，且杂质较少，故采用甲醇作为提取溶剂。以超声处理15min、30min、45min，进行提取时间考察，超声处理15min，测得结果较低，超声处理30min、45min，两者无明显差别，故超声处理时间定为30min。

［1]刘超，王静，杨军.赤芍总甙活血化瘀作用的研究 ［J].中药材，2000，23(9)：557-560.

［2]赵春景，王芳，赫飞.赤芍对乙肝黄疸患者红细胞通透性的影响［J].中医药研究，1999，15(5)：42-43.

［3]国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部)［S].2005：109.