黄柏化学成分研究

李行诺，翟文丰，周孟宇，沈培强，葛志伟，颜继忠

（1.浙江工业大学 药学院，浙江 杭州310032；2.正大青春宝药业有限公司，浙江 杭州310023；3.浙江大学 药学院，浙江 杭州310058）

黄柏为芸香科植物黄皮树PhellodendronchineseSchneid的干燥树皮，性苦、寒，具有清热燥湿、泻火除蒸和解毒疗疮的功效［1］.现代药理学表明黄柏具有较强的广谱抗菌性，对葡萄球菌有较强的抑制作用，同时具有抗溃疡、降压、抗心律失常等作用［2］.为进一步研究其化学成分，现利用硅胶柱色谱，反相中压制备色谱仪，制备液相色谱等分离手段，从黄柏中分离得到6个化合物，通过波谱数据鉴定了其结构，分别为异阔果芸香碱（Ⅰ），γ－花椒碱（Ⅱ），茵芋碱（Ⅲ），铁屎米酮（Ⅳ），阿魏酸（Ⅴ），5－O－阿魏酰基奎宁酸（Ⅵ）.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

美国Agilent 1100制备型高效液相色谱仪（色谱柱为ZORBAX SB－C18，21.2×250mm，7μm），HP chemstations处理软件（安捷伦科技有限公司，美国）；Waters 2695分析型高效液相色谱仪；BRUKER AVANCE－III型磁共振波谱仪（TMS为内标，瑞士 Bruker公司）；Mill－Q 超纯水器（Mllipore公司）；柱色谱硅胶（100—200目）和薄层色谱硅胶均为青岛海洋化工厂产品.甲醇为色谱纯，购自德国Merck公司，其他溶剂均为分析纯.黄柏药材取自杭州正大青春宝药业有限公司，由楚楚博士鉴定为PhellodendronchineseSchneid，留样保存于浙江工业大学药学院.

1.2 提取与分离

黄柏干燥树皮4.0kg，经70%的乙醇溶液回流提取两次，每次2h，合并提取液，减压浓缩得稠浸膏.所得浸膏用去离子水溶解，过滤，分别用石油醚，乙酸乙酯，正丁醇萃取.各部分分别经硅胶柱色谱层析，再经过高效制备液相色谱纯化，流速8mL／min，甲醇－水梯度洗脱.乙酸乙酯部分以石油醚－乙酸乙酯（20∶1～1∶1）洗脱，浓缩洗液，经制备高效液相色谱（甲醇－水为流动相）分离、纯化得化合物化合物Ⅳ（20mg），Ⅴ（132mg）.正丁醇部分以二氯甲烷－甲醇（30∶1～1∶1）洗脱，浓缩洗脱液，经制备高效液相色谱（甲醇－水为流动相）分离、纯化得化合物Ⅰ（50mg），化合物Ⅱ（20mg），化合物Ⅲ（22mg），化合物Ⅵ（45mg）.化合物Ⅰ－Ⅵ结构为

2 结构鉴定

化合物Ⅰ淡黄色固体.1H－NMR（CDCl3，500 MHz）δ：8.35（1H，br.d，J＝7.5Hz，H－5），7.53（1H，br.t，J＝7.5Hz，H－7），7.30（1H，br.t，J＝7.5Hz，H－6），7.26（1H，br.t，J＝7.5Hz，H－8），4.81（1H，t，J＝8.5Hz，H－11），3.65（3H，s，N－C H—3），3.22（2H，d，J＝8.5Hz，H－10），1.35（3H，s，H－14），1.26（3H，s，H－13）；13C－NMR （CDCl3，125MHz）δ：173.6（C－4），161.6（C－2），138.6（C－1），131.0（C－7），126.4（C－9），126.2（C－6），123.2（C－5），114.1（C－8），99.6（C－3），92.0（C－11），71.5（C－12），31.3（N－C—H3），27.6（C－10），25.6（C－13），24.5（C－14）.其波谱数据与文献报道的异阔果芸香碱［3－4］一致，故鉴定该化合物为异阔果芸香碱.

化合物Ⅱ无色晶体.1H－NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.66（1H，d，J＝2.5Hz，H－2），7.58（1H，dd，J＝1.0，8.5Hz，H－5），7.20（1H，dd，J＝7.5，8.5Hz，H－6），7.11（1H，d，J＝2.5Hz，H－3），7.00（1H，br.d，J＝7.5Hz，H－7），4.31（3H，s，4－OC H—3），3.95（3H，s，8－OC H—3）；13C－NMR（CD3OD，125 MHz）δ：164.3（C－1a），158.4（C－4），155.2（C－8），144.9（C－2），137.9（C－8a），124.5（C－6），120.5（C－4a），115.1（C－5），109.1（C－7），106.1（C－3），104.8（C－3a），59.8（C4－O C—H3），56.2（C8－O C—H3）.其波谱数据与文献报道的γ－花椒碱［5－6］基本一致，故鉴定该化合物为γ－花椒碱.

化合物Ⅲ浅黄色晶体.1H－NMR（CD3OD，500MHz）δ：8.02（1H，d，J＝9.0Hz，H－5），7.74（1H，d，J＝2.5Hz，H－2），7.35（1H，d，J＝9.0Hz，H－6），7.30（1H，d，J＝2.5Hz，H－3），4.46（3H，s，4－O C—H3），4.00（3H，s，8－O C—H3），3.92（3H，s，7－O C—H3）；13C－NMR（CD3OD，125MHz）δ：166.1（C－1a），159.2（C－4），153.8（C－7），144.4（C－2），143.2（C－2），142.0（C－8），141.6（C－8a），119.6（C－5），115.9（C－4a），113.5（C－6），106.3（C－3），105.7（C－4a），103.4（C－3a），60.3（C8－O C—H3），58.7（C4－O C—H3），55.8（C7－O C—H3）.其波谱数据与文献报道的茵芋碱［5－6］一致，故鉴定该化合物为茵芋碱.

化合物Ⅳ浅黄色晶体.1H－NMR（DMSO－d6，500MHz）δ：8.83（1H，d，J＝5.0Hz，H－2），8.51（1H，d，J＝8.0Hz，H－8），8.38（1H，br.d，J＝7.5Hz，H－11），8.30（1H，d，J＝5.0Hz，H－1），8.14（1H，d，J＝9.5Hz，H－5），7.77（1H，br.dd，J＝7.5，8.0Hz，H－9），7.60（1H，br.t，J＝7.5Hz，H－10），7.00（1H，d，J＝9.5Hz，H－4）；13C－NMR（DMSO－d6，125MHz）δ：159.5（C－6），146.4（C－2），140.4（C－4），139.2（C－7a），136.2（C－3a），131.9（C－11c），131.4（C－9），129.9（C－11b），129.1（C－5），126.2（C－10），124.6（C－11a），124.1（C－11），117.8（C－8），116.7（C－1）其波谱数据与文献报道的铁屎米酮［7］一致，故鉴定该化合物为铁屎米酮.

化合物Ⅴ白色粉末状晶体.1H－NMR（CD3OD，500MHz）δ：7.58（1H，d，J＝15.5Hz，H－7），7.16（1H，d，J＝2.0Hz，H－2），7.06（1H，dd，J＝2.0，8.0Hz，H－6），6.81（1H，d，J＝8.0Hz，H－5），6.30（1H，d，J＝15.5Hz，H－8），3.88（3H，s，3－O C—H3）；13C－NMR（CD3OD，125MHz）δ：170.9（C－9），150.4（C－3），149.3（C－4），146.9（C－7），127.8（C－1），123.9（C－6），116.4（C－5），115.9（C－8），111.7（C－2），56.5（－O C—H3）），其波谱数据与文献报道的阿魏酸［8］一致，故鉴定该化合物为阿魏酸.

化合物Ⅵ黄色晶体.1H－NMR （CD3OD，500MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.9Hz，H－7），7.12（1H，d，J＝1.6Hz，H－2），7.03（1H，dd，J＝1.6，8.2Hz，H－6），6.82（1H，d，J＝8.2Hz，H－5），6.36（1H，d，J＝15.9Hz，H－8），5.38（1H，m，H－10），4.16（1H，m，H－14），3.84（3H，s，3－O C—H3），3.73（1H，dd，J＝3.0，9.8Hz，H－15），1.95～2.05（4H，m，H－11，13）；13C－NMR（CD3OD，125MHz）δ：180.3（C12－C—OOH），168.8（C－9），150.3（C－3），149.1（C－4），146.5（C－7），127.5（C－1），123.9（C－6），116.5（C－5），115.7（C－8），111.7（C－2），77.5（C－12），74.7（C－15），72.7（C－14），72.5（C－10），56.6（C3－O C—H3），40.3（C－11），38.8（C－13）.其波谱数据与文献报道的5－O－阿魏酰基奎宁酸［9］一致，故鉴定该化合物为5－O－阿魏酰基奎宁酸.

3 结 论

研究了黄柏乙醇提取物中的化学成分，采用硅胶柱色谱，结合反相中压色谱和制备液相从提取物中分离得到了6个化合物，通过NMR光谱数据鉴定其结构，这6个化合物分别为异阔果芸香碱，γ－花椒碱，茵芋碱，铁屎米酮，阿魏酸，5－O－阿魏酰基奎宁酸，其中异阔果芸香碱是首次从该属植物中分离得到，为完善黄柏化学组分信息库和药效研究提供物质基础.

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