IL12B基因多态性与卵巢癌的相关性研究

胡月子，张 冉

（1.湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410013；2.湖南中医药大学第二附属医院，湖南 长沙 410005）

卵巢癌是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一，其发病率高达1.4%，仅次于子宫颈癌而列居第二位，但其死亡率却占各种妇科肿瘤的首位，且随着年龄的增长发病率增加[1]，严重威胁了广大女性患者的生命和生活质量。卵巢位于盆腔深部，临床肿瘤发病比较隐匿，病变早期无症状，缺乏特异性早期发病指征，大多数患者在就诊时已为晚期，治疗后复发率高达70%，五年存活率仅约25%[2]，并且易于转移而广泛散播，其发病的确切原因迄今尚不明确。因此，研究卵巢癌的病因及预防措施，寻找早期诊断方法，并给予有效的综合治疗，是提高卵巢癌患者五年存活率、降低复发率和死亡率的关键。

IL-12是由一条35kDa的p35和40kDa的p40两个亚基组成的具有生物学活性的异二聚体促炎因子，且在体内外都能抑制多种恶性肿瘤的生殖与转移。现已证实IL-12 p40亚基基因(IL12B)上有部分启动子、内含子及3'非编码区(3'UTR)存在基因多态性[3,4]。最近的体外实验发现3'UTR的单核苷酸基因多态性(SNP)与IL-12分泌增加有关[5]。许多学者对IL12B多态性与恶性肿瘤患病风险的关系进行了分子流行病学研究，包括非霍奇金淋巴瘤[6]，肝癌[7]，肺癌[8]，胃癌[9]及其他恶性肿瘤[10-12]，但其与卵巢癌患病风险的关系却研究甚少。本研究采用PCR-RFLP法对92例卵巢癌患者及38例非卵巢癌患者卵巢组织中IL12B rs3212227基因(3'UTR A>C)进行多态性研究，为卵巢癌的基因诊断及防治提供新途径。

1 材料与方法

1.1 研究对象

病例组卵巢癌患者92例，经术后病理检查确诊。对照组38例，经病理检查为正常卵巢组织。所有组织标本均购自湖南省肿瘤医院。

1.2 基因型测定及SNP的选择

按照Invitrogen PureLinkTM基因DNA试剂盒操作程序提取所有新鲜组织标本中的全基因组DNA。以5'-GATATCTTTGCTGTATTTGTATAGTT-3'为上游引物，5'-AATATTTAAATAGCATGAAGGC-3'为下游引物，参照Promega Go Taq Colorless Master Mix试剂盒建立50μL的PCR反应体系进行扩增，其产物为118bp的基因片段。使用酚氯仿法将其纯化。纯化产物经TaqI酶切后进行电泳分离，变异型等位基因rs3212227C得到大小分别为92bp和26bp的两条片段，而野生型等位基因rs3212227A则为一条118bp的片段。

1.3 统计学分析

采用卡方检验验证多态性基因型频率结果是否符合Hardy-Weinberg平衡。用SPSS13.0软件对结果进行卡方检验，比较两组间基因型的频率分布差异，并计算OR值和95%可信区间(95%CI)以评估IL12B基因型与卵巢癌患病风险的关系。

2 结果

IL12B rs3212227基因多态性的频率在病例组和对照组中的分布均符合Hardy-Weinberg平衡(P值分别为0.627和0.36)。该基因多态性频率在病例组和对照组中的分布如表1，经过卡方检验，尚不能认为病例组和对照组的IL12B基因型频率分布有不同(P=0.086)。

表1 病例组与对照组IL12B rs3212227基因型频率分布的比较

但CC基因型和AC基因型含有变异等位基因C，故我们将三组基因型分为变异基因型组 (CC+AC)和非变异型基因组(AA)进行统计学分析，如表2。结果显示，变异基因型AC/CC组与非变异基因型AA组在病例组与对照组间的分布有显著差异，且有统计学意义(P<0.05)。说明IL12B rs3212227基因的变异使患者对卵巢癌的易感性更高，是卵巢癌的危险因素(OR为2.47；95%CI为1.05-5.84)。

表2 IL-12B rs3212227基因型组间频率分布及统计结果

3 讨论

Hardy-Weinberg平衡定律[13](Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)是群体遗传学中一条重要的基本法则，常作为某些遗传推断的基础，亦成为遗传学平衡定律。符合该遗传学平衡定律的样本则具有代表性和可比性。

本研究对湖南省女性卵巢癌的患病风险与IL-12B rs3212227基因多态性进行了研究，结果表明，IL-12B rs3212227基因的变异能提高卵巢癌的患病风险。越来越多的研究显示IL-12B基因多态性与恶性肿瘤的易感性有密切关系。Ben Chaaben A等人[14]研究了其与鼻咽癌之间的关系，研究结果显示IL-12B rs3212227变异型基因C存在于鼻咽癌患者中的频率远高于正常人(P=0.00005)，表明变异型基因C与鼻咽癌的易感性关系密切。在妇科肿瘤与IL-12基因多态性研究方面，Kordi Tamandani DM等人[15]研究发现，IL-12B rs3212227 AC+CC变异基因能型增加宫颈癌的患病风险 (OR=1.71)。我国学者Xiaojun C等人[16]对404例宫颈癌病例和404例正常中国人进行IL12B rs3212227基因型多态性研究，发现其与宫颈癌的发病风险有重要关联(OR为1.29)。但另一方面，Liu L等人[17]研究了IL-12B rs3212227基因多态性与肝癌的关系，他们将869例病例和891例正常中国人纳入研究，研究结果显示IL-12B的变异基因型人群和非变异基因型人群中卵巢癌的易感性差别不大。

基因的变异导致卵巢癌发生和发展的原因可能为：变异型IL-12编码基因阻碍了IL-12的表达，使卵巢癌患者体内IL-12水平降低。该结果与徐霞等人[18]的研究结论相同，即卵巢癌患者血清中IL-12的表达水平显著低于正常对照组。说明肿瘤在发生与发展过程中，由于IL-12编码基因的变异，使患者IL-12表达受到明显的抑制，同时也反映了卵巢癌患者的细胞免疫功能低下。低水平的IL-12没能阻断供给卵巢癌细胞的营养和氧气，不能抑制肿瘤细胞的生长与繁殖，促使卵巢癌的发展。

本研究过程中还有很多不足之处需要改进。首先，标本的数量有限，病理标本和对照标本数量不足且相差悬殊；其次，本研究缺乏对局部IL-12表达水平的检测，因此我们无法估计IL-12基因型与表型之间的关系；最后，本研究的所有标本均来自医院，大部分患者在手术前可能有行放疗或化疗，这对IL-12基因型的检测结果可能会有影响。因此，我们还有待进行大样本、多区域、多民族广泛深入的研究，将有可能为卵巢癌患病风险的预测、预防和治疗提供一条新的线索和路径。

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