山西不同产地野生酸枣叶总黄酮的含量测定

白 莉，杜晨晖，闫 艳，张朔生，孟 欣，张 峰

（山西中医学院，山西太原030024）

山西不同产地野生酸枣叶总黄酮的含量测定

白 莉，杜晨晖，闫 艳，张朔生，孟 欣，张 峰

（山西中医学院，山西太原030024）

目的：测定山西不同产地野生酸枣叶中总黄酮的含量，为酸枣叶资源的开发利用提供科学依据。方法：采用紫外可见分光光度法在波长510 nm处测定山西省9个不同产地的酸枣叶样品中总黄酮的含量。结果：山西介休产的酸枣叶中总黄酮含量最高，其次为阳泉、五台、太谷等。结论：不同产地酸枣叶中总黄酮含量存在一定差异，应注意生长环境对药材质量的影响。

山西；酸枣叶；总黄酮；含量测定

酸枣叶为鼠李科植物酸枣［Ziziphus jujuba Mil1.var.spinosa（Bunge）Huex H.F.Chou］的叶子。民间广泛将其加工成茶叶，具有利尿、促进胆酸合成、消炎等多种保健功能［1-2］。据报道，酸枣叶提取物有明显的镇静、安神作用［3］，芦丁等黄酮类成分是其主要化学成分［4-5］。

本课题组前期研究表明，山西省不同产地酸枣叶中芦丁的含量均随季节的变化而基本呈U字形趋势，其中以5月份含量最高［6-7］。为了进一步研究酸枣叶中芦丁与总黄酮含量关系，本文采用紫外分光光度法测定酸枣叶中总黄酮的含量，考察山西九个不同产地5月份的酸枣叶中总黄酮的含量。本实验为酸枣叶的质量评价提供一定的研究基础，并为酸枣叶的深入开发提供科学依据。

1 实验材料

1.1 实验仪器

数显恒温水浴锅（菏泽市石油化工学仪器设备厂，型号：HH-S2S）；十万分之一电子天平（梅特勒公司）；紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司，UV-1600）。

1.2 实验药品

芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0080-9705）；试剂均为分析纯。酸枣叶样品均采自山西省各地区（每个产地采样不少于1 kg），经中药鉴定教研室裴香萍副教授鉴定为鼠李科植物酸枣［Ziziphus jujuba Mil1.Var.Spinosa（Bunge）Huex H.F.Chou］的叶子。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品适量，置于5 mL的容量瓶中加70%的乙醇溶液定容至刻度，摇匀，得浓度为2 mg/mL的芦丁对照品储备液。

2.2 供试品溶液的制备

取酸枣叶粉末约0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，加入70%乙醇100 mL，加热回流提取2 h，过滤，滤液蒸干，加70%的乙醇定容至10 mL，摇匀，得供试品溶液。

2.3 方法学考察

2.3.1 波长选择 精密吸取对照品溶液0.5 mL置比色管中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.3 mL，放置6 min；加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，再放置5 min；加4%氢氧化钠溶液4 mL；加70%乙醇定容至10 mL，放置15 min，在400 nm～800 nm波长处扫描，对照品在510 nm处有最大吸收。

2.3.2 线性关系考察 分别精密量取0.15 mL、0.2 mL、0.25 mL、0.3 mL、0.35 mL 的 2 mg/mL 的芦丁对照品溶液置于10 mL具塞试管中，先加5%亚硝酸钠溶液0.3 mL摇匀，放置6 min；加10%硝酸铝溶液0.3 mL，摇匀，再放置5 min；加4%氢氧化钠溶液4 mL；各加70%乙醇定容至10 mL，放置15 min，在波长510 nm处测定各试管中溶液的吸光度。以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=10.865X-0.016 5，r=0.999 4。结果表明芦丁在0.03 mg/mL～0.07 mg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.3.3 精密度试验 精密量取同一浓度的芦丁标准品（2 mg/mL）溶液 0.25 mL，平行 5份，分别置于具塞刻度试管中。按“2.3.2”项下的方法进行测定，记录吸光度值，并计算其RSD（n=5）值为2.83%。表明仪器精密度好。

2.3.4 稳定性试验 取同一供试品溶液（闻喜5月产），按“2.3.2”项下的方法分别在 0 min、20 min、40 min、60 min、80 min 进行测定，记录吸光度值，计算RSD为2.77%。表明供试品溶液在显色80 min内稳定性较好。

2.3.5 重复性试验 取同一样品（闻喜5月产）平行6份，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.2”项下的方法进行测定，记录吸光度值，平均含量为43.62 mg/g，计算含量的RSD值为2.69%。表明本实验方法重复性好。

2.3.6 加样回收率试验 取已知总黄酮含量的同批样品（闻喜5月产）6份，每份0.1 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.2”项下的方法进行测定，记录吸光度值，计算含量的RSD值为2.30%，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果

2.4 样品测定

取不同产地5月份采收时期的样品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，“2.3.2”按项下的方法进行测定，记录吸光度值，外标两点法计算样品中总黄酮的浓度并计算其含量。测定结果见图1。

图1 不同产地野生酸枣叶总黄酮含量

3 讨论

3.1 提取溶剂的选择

实验曾对甲醇、70%乙醇、乙醇等不同溶剂提取效率进行了考察。研究表明以70%乙醇提取的黄酮含量最高，且叶绿素较少，避免了对后续测定工作的影响，故选用70%乙醇为提取试剂。

3.2 提取方法的选择

实验采用了超声、渗漉、回流提取3种方法。结果表明，超声提取的含量比回流和渗漉的低，渗漉提取叶绿素较多，故选择回流提取作为提取方法。

3.3 样品含量测定

由图2可以看出，山西不同产地酸枣叶中总黄酮含量以介休市的最高，这与酸枣叶中芦丁的含量测定结果一致［6］。从整体上看，山西晋中地区酸枣叶中总黄酮的含量较高，而晋南和晋东南地区酸枣叶中总黄酮的含量相对较低，造成这些差异的原因可能是海拔高度、气候等多方面因素所致。

通过本实验测定不同产地总黄酮含量与前期测定的芦丁含量进行对比分析，研究表明晋中、晋南和晋东南地区酸枣叶总黄酮的含量与芦丁含量基本成正相关。因此，可以选择芦丁和总黄酮的含量两个指标作为酸枣叶质量控制指标。本实验结果显示，不同产地酸枣叶中总黄酮含量有差异，提示应注意生长环境对中药材质量的影响。

［1］吴树勋，张建新，徐涛，等.酸枣（仁、叶、肉）与酸枣皂苷A对中枢神经系统作用的实验研究［J］.中国中药杂志，1993，18（11）：685-687.

［2］王身艳，刘清飞，秦明珠.酸枣仁、叶、肉、根的研究进展［J］.中成药，2000，22（11）：794-796.

［3］赵新华，伊丽楠.酸枣叶提取物对中枢神经系统作用的实验研究［J］.时珍国医国药，2009，20（2）：463-464.

［4］刘寿山.重要研究文献摘要（第2卷）［M］.北京：科学出版社，1986：817.

［5］李兰芳，赵淑云.不同生长期酸枣叶中总黄酮和芦丁的含量测定［J］.中国中药杂志，1992，17（2）：81-82.

［6］张东坡，刘必旺，赵换，等.加味酸枣仁汤对肝郁小鼠的镇静催眠作用［J］.山西中医学院学报，2008，9（16）：15-17.

［7］裴香萍，杜晨晖，闫艳，等.HPLC-UV测定不同产地及不同采收期酸枣叶中芦丁的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2011，17（21）：65-67.

Determination of Total Flavoids in Leaves of Ziziphus Jujuba Gathered From Different Areas in Shanxi Province

Bai Li，Du Chenhui，Yan Yan，Zhang Shuosheng，Meng Xin，Zhang Feng
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：To compare the content of total flavoids in leaves of Ziziphus Jujuba gathered from different areas of Shanxi province.Method：The content of total flavonoids in leaves of Ziziphus Jujuba was determined by UV spectrophtomotry at the wavelength of 510 nm.Results：Content of total flavoids was highest in leaves of Ziziphus Jujube from Jiexiu，followed by those from Yangquan，Wutai，Taigu，etc.Conclusion：The content of total flaviods in leaves of Ziziphus Jujube from various areas is different，and attention should be paid to effects of environment on herbs.

Shanxi；the leaves of Ziziphus Jujuba；total flavonoids；determination of content

R285.5

A

1671-0258（2012）04-0032-03

山西省卫生厅科技攻关青年项目（20100124）；山西省普通高等本科学校大学生创新性实验项目（2011）

白莉，女，硕士，从事中药炮制及中药新药研究

张朔生，男，教授，硕士生导师，从事中药炮制及中药新药的研究

2012-04-13