复方红花微乳处方药物配比的筛选研究

冯文全，季新燕，王 艳，王颖莉，刘亚明

（山西中医学院，山西太原030024）

复方红花微乳处方药物配比的筛选研究

冯文全，季新燕，王 艳，王颖莉，刘亚明

（山西中医学院，山西太原030024）

目的：将红花和利多卡因按不同比例制备成6种微乳剂，对其镇痛、活血化瘀作用药效进行实验研究，以筛选最优处方。方法：观察6个处方对醋酸致小鼠扭体反应以及对小鼠出凝血时间的影响。结果：处方6的镇痛作用较其他处方显著，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论：复方红花微乳处方最佳配比的探索研究，对于进一步将之开发为一种应用于临床的活血化瘀经皮给药制剂具有重要的意义。

红花；利多卡因；微乳

红花具有通经活血、祛瘀止痛的功效，可以改进局部组织的微循环，促进新陈代谢，治疗皮下充血肿胀。利多卡因属酰胺类局麻药，具有药效强，局麻作用维持时间长的特点，国内剂型以注射剂和胶浆剂为主。为增加药物的溶解度，提高载药量，促进药物的透皮吸收，研制了红花利多卡因复方微乳。该微乳兼顾两者的主要功效，同时具有抗炎、活血、镇痛等作用。本实验将红花和利多卡因按不同比例制备成微乳剂，对其镇痛、活血化瘀作用药效进行实验研究，以筛选最优处方。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄各半，由山西医科大学实验动物中心提供，许可证号SCXK（晋）2011-0007。

1.1.2 实验药品 红花提取物（山西华卫药业有限公司提供，批号：091009，产地：山西）；利多卡因（太原瑞和丰科贸有限公司）；冰醋酸（广东汕头西陇化工厂，分析纯）。

1.1.3 实验仪器 大功率磁力搅拌器（常州国华电器有限公司）；电热恒温鼓风干燥箱（上海跃进医疗器械有限公司）；LD5-10低速离心机（北京医用离心机厂）；SB25-120型超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）；微量移液器（上海求精生化试剂仪器有限公司）；微量滴定管等。

1.2 实验方法

1.2.1 拟筛选的微乳处方 实验采用均匀设计法设计微乳处方，以微乳中红花提取物和利多卡因在微乳中所占的百分比浓度为因素，考察这2个因素在6个不同浓度水平的药效学效果。设计2因素6水平U6（62）均匀设计表，如表1所示。

表1 微乳处方均匀设计表

根据药效实验结果筛选不同配比微乳处方，选择镇痛实验中的醋酸致小鼠扭体反应实验，活血化瘀实验中的凝血时间和出血时间3个指标进行评价。

1.2.2 空白微乳及含药微乳的制备 通过绘制伪三元相图和体外透皮实验，将油相与混合表面活性剂，用双蒸水滴定，室温搅拌，至形成澄清、透明的液液混合体系，用染色法、稀释法和电导率鉴别微乳类型。在伪三元相图O/W区域中选择适当比例的各相，搅拌下用双蒸水滴定，室温下静置，得空白微乳。

将红花提取物和利多卡因按表1所示水平，分别溶于空白微乳中，搅拌混合均匀，室温下静置，制备1～6号待测样品，外观澄清透明。在3 000 r/min下离心1 h，不分层、不浑浊即得供试载药微乳。

1.2.3 药效实验

1.2.3.1 分组及实验前准备 取昆明小鼠84只，雌雄各半，随机平均分为7组。各组小鼠用8%硫化钠腹部去毛，去毛面积不小于1.5 cm2×1.5 cm2。在去毛处，小鼠腹部涂抹药物50 μL，每天2次（给药剂量按照低于半数致死量作为外用给药剂量，通过体表面积法折算成小鼠的给药量）。

1.2.3.2 微乳对抑制醋酸致小鼠扭体反应的影响小鼠腹部经皮给药，给药剂量5 mg/（kg·d），连续给药7 d，用移液器精确给药。末次给药15 min后腹腔注射0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g。记录注射后10 min内各组小鼠的扭体次数，计算镇痛抑制率［1］。

1.2.3.3 微乳对小鼠凝血时间的影响 采用玻片法，给药剂量5 mg/（kg·d），连续给药7 d，用移液器精确给药。末次给药30 min后，眼眶静脉丛取血，将血滴在干净的载玻片上2滴，同时用秒表计时，每隔15 s用洁净的针头挑1次（沿血滴边缘某一固定部位，直挑到血滴中心）直至挑出丝状物为止，并记录时间［2］，即为全血凝固时间。另一滴血做复验。

1.2.3.4 微乳对小鼠出血时间的影响 采用断尾法，给药剂量5 mg/（kg·d），连续给药7 d，用移液器精确给药。在末次给药30 min后，小鼠置于小鼠固定器中，以毫米尺测量小鼠尾部并标记，用手术剪在距尾尖2 cm处剪断，待血液自行流出时计时，每隔15 s用滤纸吸去尾尖血滴，直至血液自然停止流出（用滤纸吸时无血迹）时为出血时间［3］。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 微乳对醋酸致小鼠扭体反应的影响

结果见表2。

表2 微乳对醋酸致小鼠扭体反应的影响 （±s）

表2 微乳对醋酸致小鼠扭体反应的影响 （±s）

注：与空白对照组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01

组别 n空白对照组 12 1号处方 12 2号处方 12 3号处方 12 4号处方 12 5号处方 12 6号处方 12剂量（mL/kg） 扭体反应 抑制率（%）- 29.1±9.7 -5.0 19.6±7.5 32.65 5.0 18.1±8.51） 37.75 5.0 23.7±5.1 18.63 5.0 17.6±13.11） 39.71 5.0 21.7±8.3 25.49 5.0 11.3±5.62） 61.27

如表2所示，与空白对照组比较，1～6号处方都能抑制醋酸所致小鼠腹部疼痛，减少扭体反应发生。与空白对照组比较，2号、4号、6号处方扭体反应次数降低，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。扭体实验中6号处方效果优于其他各组。

2.2 微乳对小鼠凝血时间的影响

结果见表3。

表3 微乳对小鼠凝血时间的影响 （±s）

表3 微乳对小鼠凝血时间的影响 （±s）

注：与空白对照组比较，1）P＜0.05

组别 n空白对照组 12 1号处方 12 2号处方 12 3号处方 12 4号处方 12 5号处方 12 6号处方 12剂量（mL/kg） 凝血时间（min）-7.8±1.6 5.0 11.9±4.21）5.0 10.9±4.91）5.0 8.7±3.3 5.0 8.6±3.5 5.0 8.8±2.8 5.0 12.1±4.61）

如表3所示，与空白对照组比较，1～6号处方都能延长小鼠全血凝血时间。与空白对照组比较，1、2和6号处方凝血时间延长，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

2.3 微乳对小鼠出血时间的影响

结果见表4。如表4所示，与空白对照组比较，1～6号处方都可以延长小鼠出血时间的作用，而6号处方可显著延长小鼠出血时间，差异有统计学意义（P＜0.01）。提示红花利多卡因微乳具有抑制小鼠血小板和毛细血管功能。

表4 微乳对小鼠出血时间的影响 （±s）

表4 微乳对小鼠出血时间的影响 （±s）

注：与空白对照组比较，1）P＜0.01

组别 n空白对照组 12 1号处方 12 2号处方 12 3号处方 12 4号处方 12 5号处方 12 6号处方 12剂量（mL/kg） 出血时间（min）-21.9±5.7 5.0 23.3±4.4 5.0 21.5±5.5 5.0 21.8±10.1 5.0 25.5±9.3 5.0 22.1±6.3 5.0 32.1±7.81）

3 讨 论

中药红花具有活血祛瘀、通经止痛的作用，有临床报道外用红花治疗血脉不畅、血滞血瘀导致的褥疮等疗效显著［4］。还有人用2%盐酸利多卡因和75%乙醇红花提取液制得利多卡因红花醇液，用于减轻静脉穿刺带给病人都痛苦，取得了显著的效果［5］。红花具有活血化瘀作用，利多卡因作为局部麻醉药，具有较好的穿透力。本实验将红花提取物和利多卡因组方，按照不同的比例进行配比，制备微乳制剂对其药效进行考察。实验结果表明，从镇痛作用、凝血时间和出血时间均表现出第6组较其他组及空白对照组作用显著。

目前，关于微乳制备的文献已经有很多，但是直接联系临床开发中西药结合微乳制备的较少［6］，如王棋文等［7］制备的炎毒热清（AEE）微乳是将阿司匹林和丁香酚组方的微乳制剂。本研究将红花提取物和利多卡因组方，并进行了微乳处方最佳配比的摸索，对于进一步开发一种应用于临床的活血化瘀经皮给药制剂具有重要的意义。

［1］曹斌，刘元，宋志钊，等.消肿止痛酊的药效学研究［J］.中国实验方剂学杂志，2009，15（9）：83-85.

［2］李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科技出版社，2006：684-687.

［3］侯小涛，慕丽群，周江煜，等.伊血安颗粒的主要药效学实验研究［J］.中国实验方剂学杂志，2010，16（1）：109-112.

［4］金银芝.红花酒精制备及药效分析［J］.时珍国医国药，1999，8（1）：22.

［5］韦玉芳，谢红，卢泳棠，等.利多卡因红花醇液外涂减轻病人静脉穿刺疼痛的临床研究［J］.中医药临床杂志，2006，18（4）：399-400.

［6］任玉寿，刘晓明，刘必旺，等.决明子微乳胶囊治疗脂肪肝的临床观察研究［J］.山西中医学院学报，2011，12（6）：31-32.

［7］王棋文.炎毒热清毒理学及药效学初步评价［D］.兰州：甘肃农业大学，2009：6.

Screening on Medicine Ratio of Safflower Microemulsion Prescription

Feng Wenquan，Ji Xinyan，Wang Yan，Wang Yingli，Liu Yaming
（Shanxi College of TCM，Taiyuan Shanxi 030024）

Objective：Six kinds of microemulsion were prepared according to different proportion of safflower and lidocaine.Then optimum prescription was screened out according to analgesic effect and stasis-eliminating effect of prescription.Methods：Effects of 6 kinds of microemulsion on acetic acid-induced writhing response of mice as well as bleeding time and clotting time of mice were observed.Results：Analgesic effect of the sixth prescription was better than that of other prescriptions（P＜0.01）.Conclusion：Exploration on optimal matching of safflower-lidocaine was conducted in this experiment，and it provides value to develop transdermal drug delivery preparations of promoting blood circulation and removing blood stasis.

safflower；lidocaine；microemulsion

R285

A

1671-0258（2012）04-0021-03

太原市科技平台建设项目（2012-3-PT-F-125）；山西省科技攻关项目（2011091014）；山西中医学院校级课题（2011JC007）

冯文全，男，硕士研究生，从事方药配伍研究

刘亚明，男，教授，博士生导师，E-mail：liuyaming66@yahoo.com.cn

2012-04-11