不同产地刺玫果中总黄酮含量的测定

王领弟，李艳荣，潘海峰，张晓峰

(河北省中药研究与开发重点实验室，承德医学院中药研究所，河北承德 067000)

刺玫果系蔷薇科蔷薇属植物山刺玫(Rosa Davurica Pall)的成熟果实，又名野蔷薇果，广泛分布于我国东北及内蒙、山西等省[1]。刺玫果中的主要成分为黄酮类、有机酸、香豆素类等[2]，其中总黄酮类物质具有预防和治疗高血脂、血栓所导致的心脑血管疾病的功效[3-4]。为更好地开展刺玫果的质量标准研究，本研究建立了紫外分光光度法检测不同产地刺玫果中总黄酮含量的方法，以期为刺玫果的质量评价提供依据。

1 仪器与试药

HP-8453紫外-可见分光光度仪，美国惠普公司;梅特勒-托利多AG-245电子分析天平，德国梅特勒公司。芦丁对照品(批号:100080-200707)，中国药品生物制品检定所;10批刺玫果药材，由本所赵春颖副研究员鉴定为蔷薇科蔷薇属植物山刺玫的成熟果实，样品来源及收集时间见表1;其余试剂均为分析纯。

表1 刺玫果药材来源

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg置50ml量瓶中，加乙醇适量超声溶解，冷却后加乙醇至刻度，摇匀。精密量取上述溶液20ml置50ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即为对照品溶液(每1ml含无水芦丁0.2mg)。

2.2 供试品溶液的制备 精密称定刺玫果药材粉末1g，置索氏提取器中，加三氯甲烷加热回流提取至提取液无色，弃去三氯甲烷，药渣挥去三氯甲烷;药渣加甲醇继续提取至无色，将提取液蒸干，残渣加75%乙醇溶解，转移至25ml量瓶中，加75%乙醇至刻度，摇匀，即为供试品储备液。

2.3 标准曲线的制备 分别精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml置25ml量瓶中，加水至6ml;加5%亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6min;加10%硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6min;加氢氧化钠试液10ml，再加水至刻度，摇匀，放置15min。以相应试剂为空白，采用紫外-可见分光光度法于波长510nm处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，浓度C(mg/ml)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=12.602X-0.0216，r=0.9996，线性范围为8-48mg/L，见附图。

附图 芦丁对照品标准曲线

2.4 精密度试验 精密吸取6份对照品溶液各3ml，分别置于25ml量瓶中，按2.3的方法自“6ml”起操作，测定吸光度，RSD=0.25%，表明本方法精密度良好。

2.5 重复性试验 取药材粉末(S2)6份，按2.2的方法制备供试品溶液，滤过，精密量取10ml，置25ml量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml置25ml量瓶中，按2.3的方法自“加水至6ml”起操作，测定吸光度，并计算含量，6份药材样品中总黄酮含量分别为3.20%、3.18%、3.17%、3.15%、3.19% 和3.16%，RSD=0.59%，说 明 本 方法重复性良好。

2.6 稳定性试验 取同一批药材粉末(S2)，按2.2的方法制备供试品储备液，滤过，精密量取10ml，置25ml量瓶，加水稀释至刻度，摇匀;精密量取2ml置25ml量瓶中，按2.3的方法自“加水至6ml”起操作。分别于显色后放置15min、30min、45min和60min测定吸光度，结果RSD为0.86%，表明供试品溶液在显色后1h内稳定性良好。

2.7 回收率试验 在已知含量的刺玫果药材(S2)中，加入一定量的芦丁对照品，按2.2的方法制备供试品溶液，测定吸光度，计算回收率。结果见表2，平均回收率为99.96%，RSD为2.5%。

表2 加样回收率试验结果

2.8 样品含量测定 分别取10批刺玫果药材各1g，按2.2的方法制备供试品储备液。取供试品储备液，滤过，精密量取续滤液10ml，置25ml量瓶，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml置25ml量瓶中，按2.3的方法自“加水至6ml”起操作，测定吸光度，计算总黄酮含量，结果见表3。

表3 不同产地刺玫果药材的总黄酮含量(n=3)

3 讨论

本研究总黄酮含量测定结果显示，不同产地刺玫果药材的总黄酮含量差异较明显。各产地总黄酮含量以东北所产含量最高，山西所产含量最低，内蒙古产三批药材中含量相差较小。可见不同产地，因不同的生长环境、湿度、温度等因素对刺玫果中总黄酮的含量有较大影响。

目前，刺玫果作为一种天然保健食品及保健药品日益受到重视和得到广泛开发，市场上已出现以该果汁为主研制的保健食品及保健饮料[1]。本研究以不同产地刺玫果中总黄酮的含量为检测指标，可为刺玫果的开发与利用提供科学的理论依据，同时也可为刺玫果高效液相色谱法分析及有效成分的含量测定等更深入的研究奠定基础。

[1]于晓瑾，于祥龙.正交试验法优选刺玫果总黄酮成分提取工艺[J].黑龙江中医药，2010,(1):44-45.

[2]程东岩，王隶书，范艳君，等.刺玫果总黄酮纯化工艺研究[J].时珍国医国药，2011，22(3):664-665.

[3]张远.刺玫果提取物对心血管系统的作用[J].中草药1985，16(1):20-24.

[4]韩慧民.刺玫果总黄酮对心血管系统的药理作用[J].中草药，1987，18(1):23-25.