乳腺癌人表皮生长因子受体-2基因扩增的意义

薛霜 赵跃武 许梅 宋晓霞 崔改华 孔令非

近来，乳腺癌成为女性最常见的恶性肿瘤之一，治疗多采用手术、化疗、放疗、内分泌治疗及靶向药物治疗等为主的综合治疗[1]。人表皮生长因子受体-2(HER2)在乳腺癌患者的高水平表达对临床治疗方案的选择有指导作用，尤其是针对单克隆抗体赫塞汀（Herceptin）的临床应用,而雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的表达是应用内分泌药物治疗不可或缺的重要依据，因此，我们应用免疫组织化学方法检测乳腺癌手术标本中HER2、ER和PR的表达情况，分析它们与临床病理特征的关系，并用FISH检测乳腺癌手术标本中HER2基因扩增状态，比较IHC检测与FISH 检测的一致性程度，为临床治疗选择用药提供相关依据。

课堂教学时间是有限的，课文的内容是有限的，课后的生字更是有限的，更多的还是要学生自己课外阅读，拓宽学生的阅读面，加大学生的识字量，不能局限于课文。班级可以开展组织朗读活动，如诵读儿歌或精美小短文，也可以是自己写的文章，评出一二等奖，一等奖的小朋友可在早读课的时候给小朋友们领读；班级内也可组织“谁是识字王”的活动，学生将自己一个月内在阅读的课外书中认识的字写在田字格中进行评比，看谁写的又多又好，每月选出十个“识字王”，这些“识字王”可利用自习课的时间将他们的阅读和小朋友们分享；还可以在一些节日里像六一儿童节，元旦等举行一些讲故事比赛，朗读表演……

1 资料与方法

1.1 临床资料 95例乳腺癌标本来自河南省人民医院2010年1～12月间手术切除的标本蜡块。患者年龄25～80岁，平均（51.2±6.1）岁，有腋窝淋巴结转移者50例。兔抗人单克隆抗体ER、PR、HER2及Max Vision TM试剂盒，购自福州迈新生物技术开发有限公司。HER2基因扩增检测试剂盒购自北京金菩嘉医疗科技有限公司，荧光显微镜为日本Olympas(BX41）。

取同一供试品6份（0.1 g），分别精密称定重量，按样品测定方法依法测定含氮量。结果分别为：3.0071%、3.0343%、2.9642%、2.9861%、2.9617%、3.0116%，平均值为2.9942%，RSD为1.0%（n=6），精密度结果良好。见表2。

1.2 方法

本研究结果提示,应用利培酮对精神分裂进行治疗,能有效改善患者精神症状,且不良反应轻,但可导致患者血脂异常及泌乳素水平上升。因此,在应用利培酮对精神分裂症患者进行治疗的过程中,需针对患者血脂和泌乳素实施定期的监测,加强相关危险因素方面的评估。

1.2.1 乳腺癌组织学分型及分级 按照WHO乳腺肿瘤组织学分类(2003)标准进行病理分型、分级［2］，其中浸润性导管癌84例，浸润性小叶癌11例。浸润性导管癌分为3级，其中Ⅰ级18例，Ⅱ级56例，Ⅲ级21例。

1.2.3 免疫组织化学（IHC）采用Max VisionTM法，切片经脱蜡、3%H2O2封闭后，置入pH6.0柠檬酸缓冲液中高压锅热修复，滴加一抗（室温2h），滴加二抗（37℃，20min）DAB显色、苏木精对比染色、封固。

1.2.2 荧光原位杂交（FISH） 标本固定于10%中性甲醛中，24～48h后石蜡包埋，对照HE切片，选出浸润癌实验区切片厚3μm，65℃烤片2h，二甲苯脱蜡至无水乙醇→0.21mol/L HCL浸泡20min，去离子水洗3min→2×SSC缓冲液洗5min→50℃预热的30%酸性亚硫酸钠20min→去离子水洗2min，2×SSC洗5min→37℃蛋白酶K消化8～15min→2×SSC洗5min→切片45℃干燥2～5min→10%中性甲醛固定10min，2×SSC洗5min→78℃甲酰胺中变性5min→立即分别置入-20℃70%、85%、100%乙醇中2min，自然干燥。配制10μL探针，73℃水浴变性5min后置入46℃水浴中2～5min。滴加探针至组织切片上，盖片后并封片胶封边。置入40℃杂交湿盒过夜（14～18h）。将切片置洗涤液（2×SSC，0.1%NP40）洗去多余探针，室温暗处干燥，加13μL DAPI显色液对比染色。盖玻片后荧光显微镜观察结果。

2.2 HER2基因扩增与HER2蛋白表达关系 95例乳腺癌组织标本中，FISH检测HER2基因扩增28例（29.5%），其中12例HER2(+++)中有12例HER2基因扩增（100%）；50例HER2(++)中有14例HER2基因扩增（28%）；21例HER2(+)中有2例HER2基因扩增（9.52%），其余均无扩增，HER2基因扩增在HER2表达强弱不同间差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

1.3.2 IHC结果判断 HER2表达显示细胞膜呈棕黄色，ER、PR表达显示细胞核呈棕黄色。按照美国乳腺癌HER2检测指南［3］标准，HER2阳性结果为+++（>30%浸润癌细胞的细胞膜呈完整的强着色），不确定结果为++（至少10%肿瘤细胞有完整的细胞膜着色，但染色不均匀或强度较弱）。阴性结果为-或+（任何比例的肿瘤细胞有微弱的、不完整的细胞膜着色或无着色）。ER/PR阳性认定，强度：0为阴性，1为弱阳性，2为中等阳性，3为强阳性；阳性细胞百分比：0为阴性，1为阳性细胞＜1%，2为阳性细胞1%～10%，3为阳性细胞11%～33%，4为阳性细胞34%～66%，5为阳性细胞≥67%。两项分数加起来≥3为阳性。

1.3.1 FISH结果判断 试剂盒中混合了两种DNA探针，一是标记为绿色荧光的17号染色体着丝粒，另一是标记为橙红色荧光的HER2基因，细胞核由DAPI染成蓝色。所检标本中75%以上癌细胞核中都有杂交信号。计数时选择DAPI染色均一，细胞核边界完整，无重叠的细胞，随机计数30个细胞，红色信号的总数与绿色信号的总数比值大于2.2时，为HER2基因扩增，红色信号为众多信号连接成簇时可不用计算，即为基因扩增。若比值介于1.8～2.2，再增加计数细胞，比值小于1.8则无HER2基因扩增。17号染色体信号状况，根据信号的数目分为单体、双体和多体（着丝粒信号数＞2）。

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2.1 HER-2、ER、PR在乳腺癌组织中的表达 乳腺癌组织中HER-2、ER、PR表达率分别为87.4%、61.1%、54.7%，与不同年龄组、组织分级、病理类型、腋窝淋巴结是否转移间表达差异均无统计学意义（P>0.05）；与肿瘤大小间的差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 HER2基因扩增与乳腺癌临床病理参数的关系 84例浸润性导管癌中有28例（33.3%）有HER2基因扩增，11例浸润性小叶癌中无HER2基因扩增，HER2基因扩增在浸润性乳腺癌病理类型间差异有统计学意义（P<0.05）；HER2基因扩增与ER和PR的IHC表达间的差异有统计学意义（P<0.05）；HER2基因扩增在浸润性导管癌的组织学分级及有无腋窝淋巴结转移间差异无统计学意义（P>0.05），见表2。

2 结果

1.4 统计学方法 采用R软件（2.11.0版）的Pearsonχ2检验（Pearson's Chi-squared test），P<0.05为差异有统计学意义。

表1 HER-2、ER、PR表达与临床病理特征的关系（例）

1.3 结果判定

根据三维模型分析结果，在变压器本体抽真空期间，等效于在箱壁内侧时间-101Kpa的载荷，在假定箱壁边沿不发生位移的情况下，套管底座箱盖所受应力最大值为116.77Mpa，其最大变形量可达到1.6403mm；即在变压器抽真空期间，油箱顶部的钢板会向变压器油箱内侧方向最大产生1.6403mm的形变量(在套管安装固定的圆周范围内，由于现场条件可能产生不同的形变量，最大形变量计算为1.6403mm)。

表2 FISH检测HER2与临床病理参数的关系

3 讨论

HER2属于酪氨酸激酶受体家族成员，是人类原癌基因。研究表明，在乳腺癌患者中，有25%～30%的患者会有HER-2蛋白的表达，而这其中有90%～95%HER2基因扩增[4]。1998年美国FDA认证了第一个治疗乳腺癌的分子靶向药物赫赛汀，基于HER2在乳腺癌诊断及治疗中重要的指导意义，采用最准确、合理的方法来检测HER2表达状态就尤为重要了。IHC和FISH为目前经美国FDA批准并且在临床上广泛应用检测HER2的两种方法，IHC是检测HER2受体蛋白表达的情况，而FISH是检测HER2基因的扩增情况。

本研究比较河南省乳腺癌患者IHC和FISH检测HER2状态的一致性。研究结果显示，两种方法统计学上差异无统计学意义，但是IHC检测HER2蛋白表达状态不同时，两者一致性有差别：对于IHC检测HER2蛋白（+++），FISH阳性率为100%，（+～++）的患者FISH阳性率仅为9.52%和28%，而（-）表达的患者阳性率为0，这显示了IHC结果为（+++）的患者，两种检测方法一致性较高，可以直接作为诊断的依据。

HER2基因扩增在乳腺癌组织学类型间有明显差别，84例浸润性导管癌中HER2基因扩增28例（33.3%），11例浸润性小叶癌中无HER2基因扩增；IHC检测浸润性导管癌中HER2蛋白阳性表达75例（89.3%），浸润性小叶癌中HER2蛋白阳性表达8例（72.7%），说明IHC检测HER2蛋白阳性状态与乳腺癌病理类型无相关性[5]。这两种检测结果有差别，可能与检测方法的准确程度以及IHC判读标准的差别有关。本研究结果中HER2基因扩增率在乳腺癌患者组织学分级I、II、III中的表达率分别为22.2%、35.7%、19.1%，差异无统计学意义[6]，分析可能与我们所选病例中组织学分级II级浸润性癌所占比例高有关系。

本研究结果发现，ER、PR蛋白均阴性表达时，HER2基因扩增率较高，提示ER、PR和HER2信号转导通路上存在某些关联，当ER表达降低时HER2表达增强[7]，从而抑制了内分泌的调节。

综上所述，免疫组化检测可作为HER2表达状态的初筛，对于IHC检测为（++）的患者，可以重点的进行FISH的检测，对于（-）和（+）的患者，可以选择性地进行FISH检测，指导乳腺癌的分子靶向治疗。

[1]王鹏.保乳手术治疗早期乳腺癌86例疗效观察[J].当代医学，2012,18（9）：107-108.

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