高效液相色谱法测定盐酸可乐定脉冲释药微丸胶囊的含量＊

杨宗发，江尚飞，张荣发，胡娟娟

(重庆医药高等专科学校，重庆 400030)

盐酸可乐定具有降压、镇痛、止泻等药理作用。盐酸可乐定脉冲释药微丸胶囊可按预定的模式迅速而短暂地释放定量的药物，并且能迅速停止释放。高血压等病因发作具有节律性，不需长时间维持体内恒定药物浓度，采用脉冲给药不仅疗效很好，而且降低了药品的不良反应。盐酸可乐定的含量测定常采用高效液相色谱法[1]、毛细管电泳法[2]、离子对萃取－分光光度法[3]、气相色谱法[4]等方法。笔者采用C8色谱柱检测盐酸可乐定脉冲释药微丸胶囊中可乐定的含量，为建立其质量标准提供参考，现报道如下。

1 仪器与试药

Shimadzu LC－10AT型高效液相色谱仪，SPD－10A型紫外检测器;HS3120型超声波提取仪(天津市恒奥科技发展有限公司);AUX220型双量程分析天平(日本岛津)。盐酸可乐定脉冲微丸胶囊 (自制，100 μg/粒，批号分别为 20100312，20100316，20100322);盐酸可乐定对照品(批号为10071－199905，中国药品生物制品检定所);甲醇为色谱纯，水为纯化水，磷酸、辛烷磺酸钠、氢氧化钠为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Diamonsil C8柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.22%辛烷磺酸钠－甲醇－磷酸(500∶500∶1，用1 mol/L氢氧化钠溶液或磷酸调pH至3.0);流速:1.0 mL/min;检测波长:220 nm;进样量:20 μL。在此条件下，盐酸可乐定保留时间为13.257 min，峰理论板数为 16 902.695，拖尾因子为 1.095，分离度为22.937，满足2010年版《中国药典(二部)》规定要求。

2.2 溶液制备

取样品20粒，去胶囊壳，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸可乐定10 μg)，置100 mL量瓶中，加流动相适量，超声处理(功率280 W，频率60 kHz)10 min使盐酸可乐定溶解，加流动相稀释至刻度，用0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。精密称定盐酸可乐定对照品10.24 mg，加流动相溶解并稀释至100 mL，摇匀，从中再吸取1 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。取盐酸可乐定对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1 mL中约含80 ng的溶液，即得对照品溶液。按脉冲微丸胶囊处方制备不含盐酸可乐定的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验:精密量取盐酸可乐定对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各20 μL，分别注入色谱仪。色谱图见图1。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱主峰相应位置上有相同的色谱峰，而阴性对照品溶液在此保留时间处无干扰。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取对照品贮备液(1.024 μg/mL)1，2，4，8，12 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。按上述色谱条件，分别精密吸取上述溶液20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积(A)对盐酸可乐定质量浓度(C)绘制标准曲线，得回归方程 A=28.995 7 C －0.573 1，r=0.999 2(n=5)。结果表明，盐酸可乐定质量浓度在10.24～122.88 μg/L范围内与峰面积呈良好线性关系。

重复性试验:取样品(批号为20100312)适量，依法制备供试品溶液，分别制备6份，按拟订的色谱条件进行测定。结果盐酸可乐定的平均标示百分含量为99.44%，RSD为0.78%。

稳定性试验:取同一供试品溶液，于室温(20～25℃)下放置，在 0，1，3，5，7，9，11 h 时分别进样测定。结果盐酸可乐定峰面积的 RSD为0.46%(n=7)，表明供试品溶液在11 h内稳定。

加样回收试验:精密称取空白辅料9份，分别精密加入盐酸可乐定对照品贮备液 (1.024 μg/mL)2.0，8.0，10.0 mL，每种质量浓度平行3份;按拟订的方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸可乐定加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取3批样品各20粒，依法制备供试品溶液，精密量取20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图;另取盐酸可乐定对照品适量，精密称定，加流动相溶解并定量稀释制成每1 mL约含80 ng的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算。结果批号为20100312，20100316，20100322的样品每片中盐酸可乐定的平均百分标示含量分别为 100.4%(RSD=0.71%)，99.5%(RSD=0.62%)和99.6%(RSD=10.32%)。

3 讨论

在190～400 nm波长范围内紫外扫描，发现盐酸可乐定最大吸收波长为220 nm，而空白辅料最大吸收波长为198 nm，两者之间紫外吸收光谱有重叠干扰现象，显然无法选择紫外分光光度法测定供试品含量，只能选择高效液相色谱法测定供试品的含量。

考察流动相不同比例时盐酸可乐定的出峰情况，结果发现文中流动相的保留时间较理想，柱效高，出峰峰形好，故选择了此流动相。

采用C8色谱柱、高效液相色谱法测定盐酸可乐定脉冲释药微丸胶囊中盐酸可乐定的含量，样品预处理简单，测定结果准确，重复性好，因此可作为本制剂含量的控制方法。

[1]杨继斌，汤晓枢.HPLC测定珍菊降压片中盐酸可乐定的含量[J].药物分析杂志，2006，26(12):1 854 －1 856.

[2]高苏亚，李 华，曹晓芹.区带毛细管电泳法测定珍菊降压片有效成分的含量[J].时珍国医国药，2008，19(11):2 656 －2 657.

[3]魏世超，徐丽君，贺国芳，等.可乐保林片中盐酸可乐定含量测定[J].医药导报，2002，21(9):583 －584.

[4]杨雪梅，陈显瑶.血浆中盐酸可乐定的气相色谱测定法[J].药物分析杂志，1994，14(2):24－26.