浙产何首乌根与叶中大黄素含量比较

叶其蓁，周子晔，林观样

(浙江省温州医学院附属第一医院，浙江 温州 325000)

何首乌 Polygonum multiflorum Thunb.为蓼科植物，块根与叶均可入药，浙江、江苏、湖南、贵州等全国多数省份均有产。其以根入药，具有解毒、消痈、截疟、润肠通便的功效;以叶入药，具有治疮肿、疥癣、瘰疬的功效[1]。大黄素是何首乌的主要药用成分[2]，具有广泛的生物活性，具有抗菌、抗病毒、抗炎、改善肝肾功能、免疫调节和抗肿瘤作用等[3]。生长环境对药材的主要成分构成与含量均有影响，为科学考察温州地区产野生何首乌的质量，本试验中拟以大黄素为指标进行含量测定，现报道如下。

1 仪器与试药

美国Agilent 1100系列液相色谱仪，包括四元泵、紫外检测器;UPWS超纯水器(杭州永洁达净化科技有限公司);TU－1901型紫外分光光度计(北京普析通用仪器有限公司);KQ－5000DE型数控超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。大黄素对照品(中国药品生物制品检定所，批号为756－8902);甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。药材样品采自瑞安花岩森林公园，经温州医学院附属第一医院药剂科林观样老师鉴定为蓼科何首乌 Fallopia multiflora(Thunb.)Harald.，标本保留在温州医学院附属第一医院中药房标本室。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Zorbax Ecilpse XDBC18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:甲醇－1%冰醋酸(70∶30);流速:1.5 mL/min;柱温:40 ℃;进样量:20 μL。高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.2 溶液制备

称取大黄素对照品5.0 mg，精密称定，以甲醇溶解并定容至10 mL，摇匀，配成质量浓度为500 μg/mL的溶液，作为对照品溶液。取新鲜何首乌根与叶适量，分别于10℃阴干研细，精密称取叶 10.00 g 和根 5.00 g，分别置100 mL具塞锥形瓶中，加入甲醇25 mL，精密称定，50℃超声提取30 min，冷却，再称定，以甲醇补足损失的质量，取1 mL上清液，8 000 r/min转速离心 15 min，取上清液600 μL，作为供试品溶液。

2.3 方法学考察

线性关系考察:取质量浓度为500 μg/mL的对照品溶液，用甲醇稀释为 500，200，50，10，5，1 μg/mL，按拟订的色谱条件测定，每个质量浓度重复3次。以对照品峰面积积分值为纵坐标、质量浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=24.862 X+29.723，r=0.999 5(n=6)。结果表明，大黄素质量浓度在 1.0 ～500 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取同一对照品溶液，按拟订色谱条件重复进样6次。结果大黄素峰面积积分值的 RSD为2.63%(n=6)，表明方法精密度良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液，室温下储存，分别于0，2，4，8，12，24 h 时进样，测定大黄素峰面积积分值。结果的RSD=3.07%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

重复性试验:取同一批样品各6份，配置供试品溶液，分别进样测定大黄素峰面积积分值。结果的 RSD=2.06%(n=6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验:精密称取已知含量(104.70 μg/mL)的样品各6份，分别精密加入大黄素对照品(50 μg/mL)1 mg，按供试品溶液制备方法以及拟订的色谱条件，测定大黄素峰面积，计算回收率。结果见表1。

表1 大黄素加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

精密称取阴干后何首乌根5 g(n=3)和叶10 g(n=3)样品，按2.2项下方法制备供试品溶液，精密吸取20 μL进样，测定大黄素含量。结果见表2。

表2 样品中大黄素含量测定结果(n=3)

3 讨论

笔者选择了两种流动相系统进行试验，甲醇－0.1%磷酸(70∶30)与甲醇－0.1%冰醋酸(70∶30)，结果均能达到满意的分离效果，大黄素峰均达基线分离，峰形对称，但前者出峰时间太晚，保留时间 17.5 min，故选择甲醇 －0.1%冰醋酸(70∶30)作为流动相。

制备供试品溶液的过程中，选择提取溶剂的种类和体积以及超声提取时间作为考察因素，每个因素取3个水平进行正交试验，结果用甲醇超声提取30 min为最佳提取条件。离心时间低于15 min，部分样品的上清液静置后仍会出现沉淀现象，故上清液离心时间应不小于15 min。

试验结果表明，浙产何首乌根大黄素含量为2.094 7mg/g，何首乌叶大黄素含量为0.030 3 mg/g，两个部位大黄素含量差异明显。该数据为浙产何首乌药材的质量控制提供了实验室依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:165.

[2]方红玫，朱延焱.何首乌有效成分、毒性作用和相关研究进展[J].国际药学研究杂志，2010，37(4):283 －286.

[3]丁 艳，黄志华.大黄素药理作用研究进展[J].中国药理与临床，2007，23(5):235 －238.