反相高效液相色谱法测定复方小儿退热栓中对乙酰氨基酚含量

王 巍 ，余 翔 ，周祥敏

(1.重庆市涪陵食品药品检验所，重庆 408000;2.重庆市食品药品检验所，重庆 401121)

复方小儿退热栓由南板蓝根浸膏粉、对乙酰氨基酚、人工牛黄等成分组成，具有解热镇痛、利咽解毒、祛痰定惊的功效，对小儿发热、上呼吸道感染、支气管炎肺热咳嗽等症具有较好的疗效。该制剂的药品标准中对乙酰氨基酚的含量测定采用紫外分光光度法[1]。该方法专属性较差，不能完全排除杂质的干扰，具有一定的局限性。笔者参考相关文献[2－5]，首次采用反相高效液相色谱法测定复方小儿退热栓中对乙酰氨基酚的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)，包括四元梯度、VWD紫外可见检测器、Agilent色谱工作站、自动进样器;Sartorius－ME235S型电子天平(Max 230g;d=0.01 mg);Shimadzu UV－2501PC型紫外可见分光光度计。对乙酰氨基酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号为 100018－200408，含量100.0%);复方小儿退热栓(江西九华药业有限公司，批号为20110401，20110504，20110709);甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Agilent Eclipse XDB C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.05 mol/L醋酸铵溶液－甲醇(90∶10);流速:1.0 mL/min;检测波长:244 nm;柱温:30 ℃，进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

精密称取对乙酰氨基酚对照品20.78 mg，置20 mL量瓶中，加0.01 mol/L氢氧化钠溶液适量，振摇使溶解，用0.01 mol/L氢氧化钠溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。取本品10粒，精密称定，切成小片，精密称取复方小儿退热栓0.694 80 g(约相当于对乙酰氨基酚0.10 g)，置碘量瓶中，精密加入0.01 mol/L氢氧化钠溶液100 mL，在60℃水浴加热20 min，时时振摇，冷却至室温，置冰浴中冷却45 min，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液5 mL，置50 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。取不含对乙酰氨基酚的阴性对照品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:取2.2项下3种溶液，按拟订的色谱条件进行测定。结果阴性对照品溶液在与对照品溶液色谱峰相应保留时间位置上未出现吸收峰，说明处方中其他成分对测定无干扰。在此条件下，对乙酰氨基酚与其他组分达到基线完全分离，分离度 R大于1.5，理论板数以对乙酰氨基酚计算大于4 000。高效液相色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取对照品液 2，4，8，10，12，16，20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积积分值(Y)对对照品进样量(X)进行处理，回归方程为 Y=3 870.6 X －34.386，r=0.999 9。结果表明，对乙酰氨基酚进样量在 0.207 8 ～ 2.078 0 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验:精密进样同一对照品溶液10 μL，连续测定6次。结果对乙酰氨基酚峰面积的 RSD为0.18%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验:精密取同一批样品(批号为20110401)，依法制备6份供试品溶液，分别测定。结果的 RSD为0.27%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在 0，2，4，8，12，24 h时进样10 μL，测定对乙酰氨基酚的峰面积。结果的 RSD为0.31%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验:精密量取2.2项下已知含量的样品(批号为20110401)续滤液1 mL，共6份，分别置20 mL量瓶中，分成3组，分别精密加入对乙酰氨基酚对照品溶液(0.103 9 mg/mL)8，10，12 mL，平行2次，用流动相稀释至刻度，摇匀，即得，分别测定，用外标法计算回收率。结果见表1。

表1 对乙酰氨基酚加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取3批样品，按拟订方法测定，用高效液相色谱法(HPLC法)测定含量，按外标法计算3批样品中对乙酰氨基酚的含量，同时用紫外分光光度法(UV法)测定其含量。结果见表2。

表2 样品含量测定结果(%)

3 讨论

根据对乙酰氨基酚对照品溶液紫外扫描结果，在190～400 nm波长范围内，对乙酰氨基酚对照品溶液在203 nm和244 nm波长处有吸收峰，但因在203 nm波长处溶剂等因素的干扰较大，故检测波长选择244 nm。

紫外分光光度法测定的对乙酰氨基酚含量偏高，有可能是样品中所含杂质有一定的干扰。而高效液相色谱法灵敏度高，专属性好，有利于含量测定。

曾比较了多种不同的流动相，结果发现选用0.05 mol/L醋酸铵溶液－甲醇(90∶10)使得对乙酰氨基酚色谱峰形对称尖锐，基线平直，系统稳定，出峰保留时间、理论板数达到理想的效果。试验结果表明，本法方法操作简便，重现性好，样品回收率高，可用于复方小儿退热栓的质量控制。

[1]WS3－B－2748－97，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第十四册)[S].

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:236.

[3]曾 嵘，文 为.高效液相色谱法测定复方小儿退热栓中胆红素含量[J].医药导报，2006，25(11):1 206 － 1 207.

[4]李国强.HPLC法测定复方通感片中对乙酰氨基酚、咖啡因含量研究[J].中国当代医药，2011，18(24):42 －43，47.

[5]李莉明，彭向东，阳国平，等.HPLC－MS/MS同时测定人血浆中对乙酰氨基酚和咖啡因含量的方法学研究[J].中南药学，2010，8(6):419－422.