HPLC法测定蒙成药斯日道格扎特巴中盐酸小檗碱的含量

王丽娟 张凤有 师永晶

(内蒙古锡盟药品检验所，内蒙古 锡林浩特 026000)

蒙成药斯日道格扎特巴是由诃子、黄柏、连翘、木鳖子(制)、天竺黄、红花、苦地丁、白糖8味药组成的复方制剂，具治协日痞病功效。为有效控制其成品质量，本文建立起对处方中君药黄柏中成分盐酸小檗碱作为定量分析的指标成分。高效液相色谱法具有灵敏、准确、分离度好等优点，实验表明该方法操作简便，专属性强，重现性好，可作为斯日道格扎特巴中盐酸小檗碱的含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器:岛津LC－2010A HT型高效液相色谱仪，BP121－S型电子天平(d=0.1mg)，BP211－D型电子天平(d=0.01mg)，AS20500A型超声振荡器，岛津UV－1700型紫外分光光度计。

1.2 试剂与试药:盐酸小檗碱对照品(批号:110713－200609)中国药品生物制品检定所;乙腈、甲醇为色谱纯;水为高纯水;其它试剂均为分析纯。

1.3 样品:由内蒙古锡林郭勒盟苏尼特左旗蒙医院提供。

2 色谱条件

色谱柱:色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，本实验研究采用 kromasil 100－C18柱(250 ×4.6mm 5μm)，柱号606191;流动相:水 －乙腈(55:45，每 100mL含KH2PO40.34g，十二烷基磺酸钠0.17g)为流动相 ;流速:1mL·min－1;柱温:40℃，检测波长:345nm，进样量均为10μl。

3 方法和结果

3.1 对照品溶液的制备:精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1mL含40μg的溶液，即得。

3.2 供试品溶液的制备:取本品细粉约0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸－甲醇(1→100)溶液25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率300W，频率50KHz)30min，放冷，再称定重量，用盐酸－甲醇(1→100)溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。

3.3 测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

3.4 专属性考察:阴性对照试验:按对照品、供试品制备方法制备供试品溶液和对照品溶液，另取按处方比例并以相同工艺制备的缺黄柏的阴性对照，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液，分别精密吸取对照品、阴性对照溶液、供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪，测得结果为阴性对照色谱图中，在与盐酸小檗碱对照品以及供试品色谱相应的保留时间处无色谱峰出现。表明处方中其它组份对盐酸小檗碱测定无干扰。色谱图见图1、图2、图3。

图1 对照品色谱图

图2 供试品色谱图

图3 阴性对照品色谱图

3.5 线性关系考察:精密称取盐酸小檗碱对照品10.39mg，置25mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述对照品溶液各 0.4、0.6、0.8 、1.0、1.2、1.4 mL分别置10mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，各取10μl进样，按上述色谱条件测定，以峰面积对进样量进行回归分析，结果盐酸小檗碱在0.16624～0.58184μg范围内呈良好的线性关系。回归方程为Y=3898962x－909.93r=0.9996

3.6 精密度试验:取同一批供试品6份，各约0.5g，精密称定，分别按对照品、供试品的制备及测定法的方法操作，测定每份供试品含量，结果平均含量为 1.548mgμg－1，RSD=1.27%。

3.7 稳定性试验:取同一份供试品溶液，按供试品溶液的制备项下方法制备，按上述色谱条件测定，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h 进样测定峰面积，结果 RSD=1.34%，表明盐酸小檗碱在24h内的峰面积积分值基本稳定不变。

3.8 加样回收试验:取同一批供试品9份，各约0.25g，精密称定，按对照品、供试品制备方法操作，其中3份分别精密加入盐酸小檗碱对照品溶液(0.3912mg·mL－1)0.5mL，另3份分别精密加入上述盐酸小檗碱对照品溶液1.0mL，其余3份分别精密加入上述盐酸小檗碱对照品溶液1.5mL，分别按含量测定法项下方法操作，测定每份含量，计算回收率，结果见表1。

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果

3.9 样品含量测定:取样品 3批(批号 20090305，20090303，20090317)按对照品、供试品制备方法及测定法项下的方法处理并测定，3批样品的测定结果见表2。

表2 样品中盐酸小檗碱含量测定结果

4 讨论

4.1 本文考察了不同流动相系统，由于样品成份复杂，相互干扰比较严重，经反复调整试验，最终确定流动相为水－乙腈(55:45，每100mL含 KH2PO40.34g，十二烷基磺酸钠0.17g)，样品中盐酸小檗碱峰分离度达到2.0以上，理论板数较高，结果比较理想。

4.2 在样品制备考察时，对溶媒，提取时间等均进行了比较实验，最终确定以盐酸－甲醇(1→100)溶液为提取溶媒，超声处理30min效果较好。

［1］国家药典委员会，中华人民共和国药典［S］.一部北京:化学工业出版社.2005:214－215