HPLC法测定蒙药毛浩日查干颗粒剂二苯乙烯苷含量

孟克巴牙尔 韩图雅

(1.内蒙古自治区国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 010020;2.内蒙古医学院蒙医学院2009级硕士研究生，内蒙古 呼和浩特 010059)

本品主要由手掌参、黄精、玉竹、何首乌、广枣5味药材组成。具有补肾壮阳、滋补强身，用于肾寒、肾虚、精血不足、筋骨酸痛、年迈体虚等。收载卫生部药品标准蒙成分册［1］。

1 仪器、试剂及样品

1100型高效液相色谱仪(美国Agilentg公司制造);NC－2000色谱工作站(大连中北公司);TG332A型1/10万光电天平(湘仪制造);AS2060B型超声清洗仪(上海科学仪器公司制造)。

甲醇、乙腈:色谱纯，由美国 Tedai公司生产;磷酸、乙醇为分析纯;水为三蒸水。二苯乙烯苷由中国药品生物制品检定所提供。毛浩日查干－5颗粒剂由内蒙古复旦蒙耀科技有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 耐用性试验及色谱条件:Agilent XDB－C8柱 (150×4.6 mm，5μm)、非罗门 Kromasil C18柱(200 × 4.6 mm，5μm);流动相:乙腈 － 水(24:86)、甲醇 － 水(20:60);流速:1mL·min－1;测定波长320nm;柱温30℃。以上条件均可基线分离样品中二苯乙烯苷，分离度大于1.2。试验采用用Kromasil C18柱;流动相为乙腈－甲醇－水(40:10:150)［2］。

2.2 测定溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备:精密称取二苯乙烯苷对照品适量0.75mg，置10mL量瓶内，加甲醇溶解，配制成浓度为0.075mg·mL－1的溶液(棕色量瓶内保存)。

2.2.2 供试品溶液的制备:取本品(粉碎，研细，过100目筛)100mg，精密称重，置50mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10mL，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，静止，用0.45μm滤膜滤过，即的。

2.2.3 专属性试验:依照样品制备方法制备不含何首乌的毛浩日查干－5颗粒剂阴性制剂，依照色谱条件测定，阴性对照品在二苯乙烯苷保留时间内无干扰峰出现，表明其它药材对二苯乙烯苷的测定无干扰。

图1 标准品

图2 样品

2.3 线性关系考察:精密吸取对照品溶液1mL置10mL量瓶内为A溶液，精密量取A溶液1mL同法稀释10倍为B溶液。吸取 B 溶液 2.5、5μL，A 溶液 1、2、4、8μL 按色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品含量为横坐标，绘制标准曲线，作回归分析。回归方程:Y=Y=11149927χ －20038，r=0.9999。二苯乙烯苷在 0.0075 ～0.12μ范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验:精密吸取同一供试品溶液10μL，连续进样5次，测定二苯乙烯苷峰面积平均为1256732±8972，二苯乙烯苷峰面积的RSD为0.71%。

2.5 稳定性试验:取同一供试品溶液10μL，分别于样品制备后第0、2、4、8h测定二苯乙烯苷峰面积，二苯乙烯苷峰面积的RSD为0.72%。样品溶液在8h内稳定。

2.6 重复性试验:取同批次样品，按2.2项下的方法制备样品 5 份。测定结果平均 0.65 mg·g－1，RSD 为1.7%

2.7 回收率试验:取已知二苯乙烯苷含量的毛浩日查干－5颗粒剂，置10mL容量瓶内，分别精密加入二苯乙烯苷对照品溶液(0.075mg·mL－1)，加甲醇至刻度，溶液转入置50mL具塞锥形瓶中，按供试品方法制备，提取，过滤。按色谱条件测定，计算回收率，平均回收率为99.26%;RSD=1.8%。

表1 毛浩日查干－5颗粒剂二苯乙烯苷回收率测定

2.8 样品测定:分别吸取对照品溶液与样品溶液10μL，依上述色谱条件测定5批样品二苯乙烯苷含量，测定结果分别为 0.65、0.56、0.74、0.48、0.83 mg·g－1，二苯乙烯苷平均含量分别为0.65mg·g－1(n=3)，样品中二苯乙烯苷含量在 0.48 ～0.83mg·g－1之间，批次之间含量差异较大。

3 讨论

本试验对样品溶液制备方法进行系统性研究。分别考察超声、回流、浸泡提取方法，超声处理方法操作简便、省时，更可取。对乙醇、甲醇、乙腈提取溶剂考察，三者对二苯乙烯苷溶出率并无明显差异;本文采用甲醇提取。提取时间测定，样品超声处理30min后二苯乙烯苷含量不再增加。

对流动相考察表明，乙腈－水(24:86)、甲醇－水(20:60)均可基线分离样品中二苯乙烯苷，分离度大于1.2，但分离度变异较大。采用乙腈－甲醇－水(40:10:150)分离效果更为理想。色谱柱适用性研究表明，Agilent XDB－C8柱 (150 ×4.6 mm，5μm)、非罗门 Kromasil C18柱(200 ×4.6 mm，5μm)均可适用本试验测定，本文采用非罗门Kromasil C18柱(200×4.6 mm，5μm)。测定结果表明，5批样品中二苯乙烯苷含量差异较大，可能与颗粒剂制备有关。采用HPLC法测定毛浩日查干－5颗粒剂指标性成分，可作为该药质量控制的方法之一。该方法重现性好，操作简便、灵敏、准确、可靠。

［1］国家药典委员会.卫生部药品标准蒙药分册［S］.1998，127

［2］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.中国医药出版社，2010，164