角柱花石油醚部位化学成分研究

潘成学，魏俊杰，王彩芳，武天坤

(1.郑州大学 药学院，河南 郑州450001;2.郑州人民医院 药剂科，河南 郑州450003)

0 引言

角柱花(Ceratostigma Plumbaginoides Bunge)是白花丹科(蓝雪科)角柱花属植物，别名蓝雪花、七星箭，我国特产.民间用于治疗肿瘤、白血病、跌打损伤、脘腹疼痛、风湿、创伤、腮腺炎等疾病，具有行气活血止痛、抗菌、解痉，镇痛等作用［1］.白花丹科补血草属和角柱花属植物常药用.其中有许多种类都可入药，补血草属植物的根含各种黄酮，如杨梅树皮甙(Myricetrin)、四羟基黄酮(Tetrahydroxyflavone)等，许多种类是闻名的鞣料植物和染料植物;角柱花属等多含矶松素(Plumbagin，又名蓝雪醌、白花丹素).由于角柱花化学成分的系统性研究国内外少有文献报道，为了进一步开发利用中药资源、寻找活性成分，建立角柱花的药材品质评价标准，为临床用药安全和新药研发提供科学依据，笔者在对角柱花生药学特征进行研究的基础上，对角柱花化学成分进行了研究.

1 实验部分

1.1 材料、仪器和试剂

角柱花药材采自河南省济源市太行山区.主要的实验仪器包括安灵三用紫外仪(上海康华生化仪器制造厂);DPX-400型超导核磁共振谱仪(400 MHz)(瑞士布鲁克(Bruker)公司);Waters Q-TOF Micro质谱仪(美国沃特斯(Waters)公司);JHBE-100A型中试型闪式提取器(河南金鼐科技发展有限公司);RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);KQ-500DE型数控超波声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);薄层色谱硅胶和柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂);Sephadex-LH20(GE公司)及 MCI GEL柱填料(YMC公司).试剂规格均为分析纯或色谱纯.

1.2 醇浸膏的制备

将角柱花药材10.5 kg用95%的乙醇(8倍量)浸泡0.5 h，用JHBE-100A型中试型闪式提取器提取三次，每次3 min，用纱布过滤，合并滤液，减压浓缩回收溶剂至最小体积得总浸膏1 058.9 g.

1.3 不同极性部位的制备

将角柱花的乙醇提取物的总浸膏(1 058.9 g)加水(6 000 mL)分散成混悬液，分成3份依次转移到3个分液漏斗中，加入同等量的石油醚(2 000 mL)后进行混悬，静置分层，分出石油醚层，然后再分别用石油醚萃取数次(直至萃取的石油醚液在薄层板上点样、展开、显色后主斑点不明显为止)，合并萃取液，减压浓缩回收溶剂至最小体积得石油醚部位165.0 g.同样方法用乙酸乙酯、正丁醇分别萃取并减压浓缩至最小体积得乙酸乙酯部位 185.2 g、正丁醇部位 240.5 g.

1.4 石油醚部位的分离纯化过程

对石油醚部位采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、MCI柱色谱(CHP 20P)等一系列方法进行分离纯化，从石油醚部位中分离鉴定出5种化合物.

将石油醚部位过硅胶柱(0.075～0.150 mm)，依次用石油醚和乙酸乙酯体积比为40∶1，30∶1，20∶1，15∶1，10∶1，5∶1，1∶1、乙酸乙酯、甲醇洗脱，按25 mL一份收集，经薄层色谱检测，合并相同的洗脱液.对石油醚部位浸膏采用硅胶柱色谱、MCI、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、重结晶等一系列方法进行分离纯化，共鉴定出5种化合物.

2 结构鉴定

化合物Ⅰ：橘黄色针晶.三氯化铁－铁氰化钾显色为浅绿色.1H-NMR(400 MHz，CDOD3)δ：2.12(3H，s，2-CH3)，6.81(1H，s，H-3)，7.21(1H，m，H-6)，7.54(1H，dd，J=8.0，8.0 Hz，H-7)，7.62(1H，t，J=8.0，1.2 Hz，H-8)，11.96(1H，s，OH).13C-NMR(100 MHz，CDOD3)δ：16.4(2-CH3)，185.8(C-1)，151.0(C-2)，136.4(C-3)，191.7(C-4)，162.2(C-5)，124.8(C-6)，137.3(C-7)，119.9(C-8)，133.5(C-9)，116.3(C-10).将化合物的光谱数据与文献［2］报道对照数据一致，确认其结构为蓝雪醌(plumbagin).结构式见图1(a).

化合物Ⅱ：白色粉末(石油醚和乙酸乙酯体积比为10∶1).易溶于甲醇，乙酸乙酯等.用石油醚和乙酸乙酯体积比为10∶1的溶液作为展开剂进行薄层色谱展板Rf值=0.5，紫外灯254 nm荧光下显暗斑，碘显色明显，磷钼酸微显色.1H-NMR(CD3OD，400 MHz)δ：0.99(12H，d，J=6.8 Hz，3H-10，3H-10’，3H-11，3H-11’)，2.03(2H，m，H-9，9’)，4.07(4H，d，J=6.4 Hz，2H-8，2H-8’)，7.61(2H，dd，J=5.6，3.2 Hz，H － 4，5)，7.73(2H，dd，J=5.6，3.2 Hz，H-3，6).碳谱数据13CNMR(CD3OD，100 MHz)δ：171.8(C-1’，1’’)，136.2(C-4，5)，134.9(C-1，2)，132.4(C-3，6)，75.4(C-2’，2’’)，31.5(C-3’，3’’)，22.1(C-4’，5’，4’’，5’’).将化合物的光谱数据与文献［3］报道对照数据一致，确定该化合物为邻苯二甲酸二异丁酯(dis(2-methylpropyl)ester).结构式见图1(b).

化合物Ⅲ：淡黄色点状结晶.茴香醛－浓硫酸显色为桔红色，三氯化铁－铁氰化钾显色呈淡绿色.1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：7.55(1H，d，J=8.0 Hz，H-6)，7.52(1H，s，H-2)，6.95(1H，d，J=8.0Hz，H-5)，3.96(3H，s，H-9)，2.57(3H，s，H －8).13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：196.9(C-7)，150.4(C-4)，146.6(C-3)，130.2(C-1)，124.0(C-6)，113.7(C-5)，109.7(C-2)，56.1(C-9)，26.2(C-8).结合文献中化合物Ⅰ的碳谱数据及化合物香草乙酮的氢谱数据［4］，确定该化合物为香草乙酮(acetovanillone).结构式见图1(c).

化合物Ⅵ：白色针状结晶.茴香醛－浓硫酸显色为紫色斑点.1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：0.68(3H，s，CH3-18)，1.01(3H，s，CH3-19)，0.93(3H，d，CH3-21)，0.83(3H，d，CH3-26)，0.81(3H，d，CH3-27)，0.84(3H，t，CH3-29)，5.36(1H，d，H－6)为环内双键上的烯碳质子峰，3.52(1H，m，H-3)为多重峰，应为CH与O相连，并且左右都连有CH2与之耦合所致.13C-NMR(CDCl3，100 MHz)δ：37.2(C-1)，31.6(C-2)，71.8(C-3)，42.3(C-4)，140.7(C-5)，121.7(C-6)，31.9(C-7)，31.9(C-8)，50.1(C-9)，36.5(C-10)，20.0(C-11)，39.7(C-12)，42.3(C-13)，56.7(C-14)，24.3(C-15)，28.2(C-16)，56.0(C-17)，12.0(C-18)，19.4(C-19)，36.1(C-20)，18.6(C-21)，33.9(C-22)，26.0(C-23)，45.8(C-24)，29.1(C-25)，19.8(C-26)，19.0(C-27)，23.0(C-28)，11.8(C-29).将化合物的光谱数据与文献［5］报道对照数据一致，确定化合物Ⅱ为 β-谷甾醇(β-sitosterol).结构式见图1(d).

化合物Ⅴ：白色无定型粉末，磷钼酸显色呈蓝色.1H-NMR(CDCl3，400 MHz)δ：6.50(d，J=8.0，H-7)，6.24(d，J=8.0，H-6)，5.16(dd，J=15.2，7.2，H-22)，5.10(dd，J=15.2，7.2，H －23).13C － NMR(CDCl3，100 MHz)δ：34.7(C-1)，30.1(C-2)，66.4(C-3)，36.9(C-4)，82.2(C-5)，135.2(C-6)，132.3(C-7)，79.4(C-8)，51.1(C-9)，36.9(C-10)，23.4(C-11)，39.3(C-12)，44.6(C-13)，51.7(C-14)，20.6(C-15)，29.7(C-16)，56.2(C-17)，12.9(C-18)，18.2(C-19)，39.7(C-20)，20.9(C-21)，135.3(C-22)，132.3(C-23)，42.8(C-24)，33.1(C-25)，19.6(C-26)，20.0(C-27)，28.7(C-28)，17.6(C-29).将化合物的光谱数据与文献［6－7］报道对照数据一致，确定化合为6，22-dien-3-OH-5，8-epidioxy-(3β，5α，8β，22E，24R)-stigmasta.结构式见图1(e).

图1 5种化合物结构式Fig.1 The chemical structure of the five compounds

3 结论

本研究对角柱花全草95%乙醇提取物的石油醚部位进行色谱分离，从中分离得到5种化合物，确定了它们的结构，分别为为蓝雪醌，邻苯二甲酸二异丁酯，香草乙酮，β-谷甾醇，6，22-dien-3-hydroxy-5，8-epidioxy-(3β，5α，8β，22E，24R)-stigmasta.以上化合物除蓝雪醌外均为首次从角柱花中分离得到.该研究为建立角柱花的药材品质评价标准，为其进一步开发与应用研究打下了良好的基础.

［1］谭明雄，王恒山，陈振峰，等.白花丹化学成分和药理活性研究进展［J］.中草药，2007，38(2)：289 －293.

［2］RAFIULLAH M K，EMIL R.A binaphthoquinone from Diospyros Greeniwayi［J］.Phytochemistry，1998，49(8)：2501 －2503.

［3］冯卫生，李倩，郑晓珂.吊石苣苔的化学成分研究［J］.中国药学杂志，2007，42(5)：337 －338.

［4］杨序娟，黄文秀，王乃利，等.接骨木中的酚酸类化合物及其对大鼠类成骨细胞UMR106增殖及分化的影响［J］.中草药，2005，36(11)：1604 －1607.

［5］焦涛，刘超，吴春蕾，等.白花丹的化学成分研究［J］.时珍国医国药，2008，19(12)：2993 －2994.

［6］TAYYAB A M，JONGKI H，CHONG-O L，et al.Cytotoxic Sterol Derivatives from a Marine Sponge Homaxinellasp［J］.Nat.Prod.，2005，68(3)：331 －336.

［7］LOANNOU E，ABDEL-RAZIK A F，ZERVOU M，et al.5α，8α-Epidioxysterols from the gorgonian Eunicella cavolini and the ascidian Trididemnum inarmatum：Isolation and evaluation of their antiproliferative activity［J］.Steroids，2009，74(1)：73 －80.