林蛙油对运动训练小鼠肝脏保护作用研究

张平，高迪，杜鹃，杨敬研，崔柏青

（1.吉林医药学院军事体育教学部，吉林吉林 132013；2.吉林医药学院预防医学，吉林吉林 132013；3.吉林医药学院营养与食品卫生教研室，吉林吉林 132013）

林蛙油是一种营养保健价值极高的药食两用食物，含有多种营养成分及保健功能因子[1]。现代医学研究表明，林蛙油具有调节血脂、耐缺氧作用、耐寒和抗疲劳作用[2-6]。长时间大强度运动会引起机体肝脏组织自由基增多，对肝细胞造成损伤，影响运动能力[7]。林蛙油对运动过程中抗自由基氧化功能的影响研究报道较少。本研究通过观察林蛙油对运动小鼠肝脏组织自由基代谢和超微结构的影响，为林蛙油进一步的开发利用提供科学依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 林蛙油

吉林市市售，-20℃冰箱保存备用。按成人60 kg体重计，按日摄入量6 g的1倍、5倍和10倍设计。加水将林蛙油泡发12 h后，盖上保鲜膜放入锅内蒸15 min，冷却，匀浆，制成所需浓度，冰箱内保存备用。

1.1.2 实验动物

ICR雄性小鼠，20 g～22 g，65只。由吉林大学基础医学院实验动物中心提供，适应性饲养一周后进行实验。

1.1.3 主要仪器

TD-5A离心机：湖南凯达湖南凯达科学仪器有限公司；JD－XSC小鼠恒温游泳池：上海继德教学实验器械厂；722分光光度计：上海欣茂仪器有限公司；透射电子显微镜：日本JEM－1200EX；LKB超薄切片机：日本；九阳料理机：九阳股份有限公司。

1.1.4 主要试剂

超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）测试盒：南京建成生物技术研究所。

1.2 方法

1.2.1 实验分组

将小鼠按体重随机分为5组，为安静组、运动组、林蛙油低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组13只小鼠，其中安静组和运动组灌胃蒸馏水，林蛙油各组给予对应的林蛙油匀浆液灌胃，每组灌胃剂量为0.4 mL。每周称重1次，调节林蛙油灌胃剂量。

1.2.2 小鼠运动模型的建立

运动组进行4周的游泳训练，水深不低于40 cm，水温（25±1）℃，每周训练6 d，休息 1 d，每次灌胃 30 min后进行游泳训练。第1周每天游泳30 min，以后每周运动时间递增15 min。第4周后最后1 d灌胃30 min后，各组进行无负重力竭性游泳，记录游泳时间。游泳至力竭判断标准为：小鼠沉入水中8 s不能自主浮上水面，且放在平面上无法完成翻正反射，记录小鼠自游泳开始至沉入水中8 s不能浮起时间。

1.2.3 超氧化物歧化酶活性（SOD）和丙二醛（MDA）含量测定

于第4周最后1 d，各组力竭运动后，眼球取血，断头处死，取肝脏组织，4℃预冷，生理盐水洗净，用滤纸吸去肝脏组织表面水分，制成100g/L的匀浆液，3500 r/min，离心10 min，取上清液，4℃冰箱保存备用。超氧化物歧化酶活性（SOD）、丙二醛（MDA）含量测定均采用南京建成生物工程研究所提供的试剂盒，测试方法严格按照试剂盒内说明书进行。

1.2.4 透射电镜标本制备

各组随机取小鼠3只，乌拉坦麻醉，固定在解剖台上，开腹暴露肝脏，取肝脏右叶，将其切成1 mm×1 mm×1 mm组织块，放在2.5%戊二醛4%多聚甲醛固定液中，1%锇酸后固定，梯度丙酮脱水，Epon812包埋，LKM超超薄切片机切片，透射电子显微镜JEM－1200EX进行观察照相。

1.3 统计学处理

实验数据以±s表示，用SPSS10.0统计软件进行统计处理，各组间差异采用SNK检验。

2 结果

2.1 不同剂量林蛙油对运动训练小鼠游泳至力竭时间的影响

不同剂量林蛙油对运动训练小鼠游泳至力竭时间的影响，见表1。

表1 不同剂量林蛙油对运动训练小鼠游泳至力竭时间的影响（±s）n=10Table 1 Effect on exhaustive swimming time of athletic training mice with different dosages of oviductus ranae

表1 不同剂量林蛙油对运动训练小鼠游泳至力竭时间的影响（±s）n=10Table 1 Effect on exhaustive swimming time of athletic training mice with different dosages of oviductus ranae

注：*p＜0.05，**p＜0.01。

组别 力竭时间/min对照组 95.90±8.41运动组 111.00±10.36低剂量组 111.40±7.24中剂量组 286.80±59.01**高剂量组 243.50±48.65**

由表1可知，游泳训练能显著延长小鼠力竭性游泳时间。游泳训练的同时补充林蛙油，可使力竭性游泳时间进一步显著延长。林蛙油各剂量组小鼠游泳时间中剂量组最高，各剂量组与训练运动组比较，中、高剂量组有显著差异（p＜0.01）。

2.2 不同剂量林蛙油对运动训练小鼠肝脏SOD活性和MDA含量的影响

不同剂量林蛙油对运动训练小鼠肝脏SOD活性和MDA含量的影响，见表2。

表2 林蛙油对运动训练小鼠肝脏SOD活性和MDA含量的影响（±s）n=10Table 2 Effect on SOD activity and MDA amount in liver of athletic training mice with different dosages of oviductus ranae

表2 林蛙油对运动训练小鼠肝脏SOD活性和MDA含量的影响（±s）n=10Table 2 Effect on SOD activity and MDA amount in liver of athletic training mice with different dosages of oviductus ranae

注：*p＜0.05，**p＜0.01。

组别SOD/（U/mgrpot）MDA/（nmoL/mgrpot）对照组 11.48±0.86 3.86±1.00运动组 9.26±0.97** 3.91±0.78低剂量组 10.22±0.86* 3.50±0.58中剂量组 11.13±0.42** 3.37±0.53高剂量组 10.80±77** 3.35±0.44

表2显示，运动组与对照组比较，SOD活性显著降低，有显著差异（p＜0.01）。运动组与林蛙油各剂量组比较，SOD活性显著降低，其中低剂量组（p＜0.05），中、高剂量组（p＜0.01）。MDA的含量运动组最高，林蛙油各剂量组有下降趋势，与运动组相比，无显著异。

2.3 林蛙油对运动训练小鼠肝脏组织超微结构的影响

对照组肝细胞核呈圆形，核膜完整，核内常染色质多，胞质内可见较丰富排列整齐的粗面内质网和结构完整的线粒体，糖原颗粒分布均匀（见图1～图2）。游泳组核仁可见，胞质内粗面内质网减少，轻度扩张，线粒体减少呈致密状，胞质基质高度空化，细胞器局

3 讨论

运动性疲劳是由运动而引起的运动能力和身体功能暂时下降现象。力竭是指肌肉或器官完全不可能维持运动的特殊疲劳现象。随着对自由基研究的深入，自由基生成的增加是导致疲劳的重要因素之一。在正常生理情况下，机体保持低水平自由基，剧烈运动会使自由基生成量增多，是诱发疲劳的原因之一[7－8]。力竭运动作为一种生理应激，使机体肝脏产生的自由基增多已被许多实验证实[9－12]，MDA作为脂质过氧化反应产物之一，其含量能间接反映机体内自由基的产生情况和机体组织细胞的脂质过氧化程度。SOD能有部消失，糖原颗粒减少（见图3～图4）。林蛙油组与运动组有相同情况的变化，但损伤程度明显较运动组轻（见图 5～图 6）。效清除自由基，阻止脂质过氧化，保持机体细胞免受运动性损伤。本实验结果表明，小鼠补充林蛙油后，SOD活性增加，MDA的含量下降，有明显的抗自由基氧化的功能，可阻止细胞膜的脂质过氧化，提高小鼠运动训练的运动能力，延缓运动疲劳的发生。

许多学者研究发现，经过急性力竭或剧烈运动后，体内产生过多的自由基对肝脏造成损伤。表现为线粒体肿胀，空泡化，膜与嵴溶解，有基质电子密度不均匀现象；内质网断裂、减少、变形、扭曲，规则分布消失；糖原分布减少；细胞核出现不规则的变化，电子密度明显变异[9－12]。本研究结果表明，小鼠力竭运动后，也有相似的结构变化，补充林蛙油可使肝细胞损伤减轻。这可能是林蛙油能提高肝脏细胞SOD活性和降低MDA含量，有利于自由基的清除。表明林蛙油具有保护肝脏细胞正常结构，增强机体防御体系的功能，进而防止运动性损伤及提高运动能力，也为林蛙油的深度开发提供参考。

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