梗脉通颗粒的毒理学实验研究

孙丽红，孙兆荣，卢贞（1.山东省泰安荣军医院，山东泰安71000；.泰山医学院附属医院，山东泰安71000）

梗脉通颗粒处方是山东省泰安荣军医院老年病科的协定方。方中含有三七、葛根、银杏叶、川芎、羌活等药材，具有活血化瘀、通脉活络的功效，临床主要用于脑脉瘀阻、中风偏瘫、脑供血不足、脑动脉硬化等缺血性脑病的治疗。临床应用多年，疗效显著。为方便临床用药，笔者在此方剂基础上将煎剂研制成颗粒剂[1]。为保证临床用药的安全性，笔者对梗脉通颗粒进行了毒理学研究。

1 仪器与材料

1.1 仪器

枸橼酸钠静脉采血管、普通生化类静脉采血管（广州威佳科技有限公司）；BS110S型电子天平（德国SartoriusAG公司）；Leica RM2135型切片机（德国Laica公司）；BH-2型显微镜、AU600型全自动生化分析仪（日本Olympus公司）；CEUDYN3500R型全自动血液分析仪（美国Abbot公司）。

1.2 试药

梗脉通颗粒（山东省泰安荣军医院制剂室提供，批号：100313，1g含生药1.667g），实验前用纯化水配成不同浓度的梗脉通溶液，备用；血液记数仪试剂（济南深蓝科贸有限公司）；生化试剂（北京中生生物工程技术公司）；凝血酶时间、凝血酶原时间试剂（上海太阳生物技术公司）。

1.3 动物

昆明种小鼠30只，♀♂兼半，体重18～22g；Wistar大鼠80只，6月龄，♀♂兼半，♀体重90～110g，♂体重100～120g，均由山东大学实验动物中心提供（动物使用合格证号：SCXK（鲁）20090001）。

2 方法与结果

2.1 急性毒性试验[2，3]

2.1.1 预试验 10只小鼠（♀♂兼半）ig 60%梗脉通溶液0.4mL·10g－1，观察24h小鼠的一般活动情况与死亡数。结果，小鼠无一死亡，表明均无中毒表现，故难以测定本品半数死亡剂量（LD50）。

2.1.2 最大耐受量测定 实验分为2组，即实验（60%梗脉通0.4mL·10g－1）、对照（等容生理盐水）组。每组小鼠♀♂各5只，禁食12h后称重，ig给药，每天3次，每次间隔6h，每天给生药量达120g·kg－1，连续7d。观察指标：给药前、后的体重，进食、进水情况，密切观察异常毒性症状，包括行动、神经系统反应，自主神经系统反应，死亡情况。结果，实验组24h内均未出现稀便，大便成型。7d内，2组小鼠进食、活动均无异常，各种反射正常，无一小鼠死亡，第7日断食12h再次称重，2组小鼠体重比较无显著性差异，表明小鼠ig生药量120g·kg－1时对小鼠无明显急性毒性作用。梗脉通颗粒对小鼠体重的影响见表1。

表1 梗脉通颗粒对小鼠体重的影响（±s，n＝10）Tab 1 Effects of Gengmaitong granules on body weight of mic（e±s，n＝10）

表1 梗脉通颗粒对小鼠体重的影响（±s，n＝10）Tab 1 Effects of Gengmaitong granules on body weight of mic（e±s，n＝10）

组别实验组对照组给药前体重/g 19.65±1.1319.65±1.08药后7d体重/g 22.32±1.6722.51±1.81

2.2 长期毒性试验[2，3]

2.2.1 梗脉通颗粒对大鼠一般行为活动、外观体征、形态等影响 实验分成4组，即对照（等容生理盐水）和梗脉通颗粒高、中、低剂量（35.70、7.14、3.57g·kg－1，分别相当于70kg成人临床日用量的100、20、10倍）组。ig给药，每天1次，连续90d，结束给药后进行2周的恢复性观察。观察大鼠外观体征、尿与粪便性状等，并随时记录异常变化。给药前、给药后90d内与整个恢复性观察期间，各组大鼠生长发育正常，被毛理顺光滑，眼睛明亮有神，反应机敏，呼吸平稳，饮食正常，大便无稀溏，无呕吐、无流涎，自发活动正常，未见异常表现。结果表明，长期连续90d ig梗脉通颗粒35.70、7.14、3.57g·kg－1对♀♂大鼠行为活动、外观体征等无不良影响。

2.2.2 梗脉通颗粒对大鼠体重的影响 每周称量1次大鼠体重，并根据体重的变化，重新计算给药量。给药前、给药后90d内与整个恢复性观察期间梗脉通颗粒高、中、低剂量组♀♂大鼠体重增长正常，与对照组比较无显著性差异。结果表明，长期连续90d ig梗脉通颗粒对大鼠体重无不良影响，停药恢复期无延迟性毒性反应。梗脉通颗粒对大鼠体重的影响见表2。

表2 梗脉通颗粒对大鼠体重的影响（±s，n＝10）Tab 2Effects of Gengmaitong granules on body weight of rats（±s，n＝10）

表2 梗脉通颗粒对大鼠体重的影响（±s，n＝10）Tab 2Effects of Gengmaitong granules on body weight of rats（±s，n＝10）

用药时间给药前1周2周3周4周5周6周7周8周9周10周11周12周90天恢复期1周恢复期2周梗脉通颗粒高剂量组对照组♀105.30±6.04117.56±7.14151.31±10.75167.95±12.78197.94±23.78232.75±20.34262.71±25.84294.56±26.04316.22±29.68333.76±31.51347.39±33.14355.23±34.54356.94±40.61365.48±38.86371.64±41.23404.12±43.26梗脉通颗粒低剂量♂♂梗脉通颗粒中剂量♀105.20±6.13113.62±6.81145.73±12.96165.20±13.82193.84±14.63227.60±24.83254.53±27.36286.36±25.64312.87±34.65326.40±33.76338.38±33.92349.62±33.63361.41±33.15366.61±33.14373.64±40.23406.25±39.87♂♂95.04±5.31111.71±7.95131.20±9.74148.21±10.14175.25±15.36202.84±19.71219.95±20.15241.45±22.16255.95±28.74267.22±23.37275.84±23.81282.31±23.96294.11±32.78286.70±20.81301.64±41.13344.12±45.26♀104.70±6.27113.65±7.68149.47±11.98166.15±14.06201.57±21.56236.51±23.74264.60±26.46289.06±27.81311.84±29.67327.38±34.13342.63±36.14350.33±34.71354.32±41.32355.04±46.51369.32±38.77402.56±40.3996.65±6.97111.05±7.13130.53±11.54150.15±8.29176.34±15.93200.11±18.17220.17±18.11236.50±19.89252.53±20.98262.72±21.28272.13±22.47280.52±22.24287.55±22.37288.92±23.63309.32±36.74352.56±47.4996.47±6.14106.81±5.71129.33±13.82144.78±12.90169.54±23.35197.80±18.21216.67±20.81239.47±24.31255.00±26.74265.80±27.90276.33±28.31284.54±30.39288.47±28.99293.53±29.12313.64±42.23356.35±49.85♀103.98±6.17113.53±7.64144.62±13.21169.01±11.84196.15±22.46225.13±25.65262.40±31.23290.00±0.18314.72±31.86330.15±33.08354.05±33.06359.31±32.08367.14±25.69376.76±41.24381.49±39.88412.31±43.5496.05±6.31106.80±7.29130.04±14.66147.27±10.52174.10±13.86195.16±16.76213.93±26.01238.77±30.09253.87±34.85270.33±28.39280.20±34.10288.31±36.08297.50±42.37288.00±41.21308.49±37.81350.31±41.54

2.2.3 血液常规、凝血系统、血液生化学指标检测结果 于给药后90d、恢复观察期末解剖前经颈静脉采血，进行血常规、白细胞分类、凝血酶时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、血液生化学指标的检测。结果，给药后第90天与恢复观察期末，梗脉通颗粒高、中、低剂量组♀♂大鼠红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、血小板（PLT）、白细胞（WBC）与淋巴细胞（LYM）、中间细胞（MID）、粒细胞（GRA）等值均在正常范围内，与对照组比较无显著性差异。梗脉通颗粒对大鼠血液常规指标的影响见表3。

±s，n＝10）Tab 3 Effects of Gengmaitong granules on blood cytology indexes of rats（表3 梗脉通颗粒对大鼠血液常规指标的影响（±s，n＝10）

±s，n＝10）Tab 3 Effects of Gengmaitong granules on blood cytology indexes of rats（表3 梗脉通颗粒对大鼠血液常规指标的影响（±s，n＝10）

时间用药90d后停药2周后组别对照组梗脉通颗粒高剂量梗脉通颗粒中剂量梗脉通颗粒低剂量对照组梗脉通颗粒高剂量梗脉通颗粒中剂量梗脉通颗粒低剂量R BC/1012·L－1 7.24±0.447.38±0.867.31±0.577.34±0.627.22±0.447.34±0.817.56±0.547.89±0.52H b/g·L－1 155.9±4.2157.5±4.1156.3±3.7156.1±4.2156.3±4.2157.1±3.1158.4±2.7161.1±3.8PLT/109·L－1 766.5±89.2745.4±47.7729.6±32.7758.5±41.7763.5±69.3743.3±46.8731.6±31.3757.5±40.9W BC/109·L－1 10.35±2.6611.02±2.1411.25±1.1710.68±2.0310.84±2.7611.12±2.1411.26±1.0710.71±2.03LYM/109·L－1 6.48±3.126.87±3.246.95±3.196.54±3.116.56±3.026.91±3.246.94±3.396.58±2.91M ID/109·L－1 0.94±0.370.89±0.270.97±0.190.97±0.210.93±0.470.92±0.270.96±0.180.98±1.15G R A/109·L－1 2.93±1.563.26±1.143.33±1.743.17±1.153.50±1.263.29±1.243.36±1.643.15±1.15

用药90d后，梗脉通颗粒高、中、低剂量组大鼠TT、PT与对照组比较显著延长（P＜0.01或P＜0.05）。恢复期梗脉通颗粒高、中、低剂量组大鼠TT、PT均在正常范围内，与对照组比较无显著性差异。梗脉通颗粒对大鼠凝血时间的影响见表4。

表4 梗脉通颗粒对大鼠凝血时间的影响（±s）Tab 4 Effects of Gengmaitong granules on coagulation time of rats（±s）

表4 梗脉通颗粒对大鼠凝血时间的影响（±s）Tab 4 Effects of Gengmaitong granules on coagulation time of rats（±s）

与对照组比较：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.control group：＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

PT 13.12±1.1317.12±1.5415.13±7.2114.17±2.46组别对照组梗脉通颗粒高剂量组梗脉通颗粒中剂量组梗脉通颗粒低剂量组用药90d后T T 26.91±22.8145.89±17.74＊＊39.56±11.74＊＊34.24±13.34＊PT 12.44±2.6431.16±9.64＊＊27.63±8.41＊＊19.87±2.38＊停药2周后T T 27.23±4.8730.93±12.3425.17±10.5424.31±11.14

用药90d与停药2周后，梗脉通颗粒高、中、低剂量组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆红素（T-Bil）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、葡萄糖（GLU）、总胆固醇（CHO）等血液生化学指标与对照组比较无显著性差异。梗脉通颗粒对大鼠血液生化学的影响分别见表5、表6。

表5 梗脉通颗粒对大鼠血液ALT、AST、ALP、GLU、BUN影响（±s）Tab 5 Effects of Gengmaitong granules on ALT，AST，ALP，GLU and BUN of rats（±s）

表5 梗脉通颗粒对大鼠血液ALT、AST、ALP、GLU、BUN影响（±s）Tab 5 Effects of Gengmaitong granules on ALT，AST，ALP，GLU and BUN of rats（±s）

用药时间90d后停药2周后A LT/U·L－1 56.64±13.2159.86±13.4856.67±9.0753.56±9.4350.62±12.5063.57±14.2160.25±8.8155.62±12.84A ST/U·L－1 226.7±38.20246.6±32.10233.7±27.64207.1±33.70102.37±15.54148.57±32.41133.37±19.14133.12±18.76A LP/U·L－1 124.40±41.70159.20±39.90147.80±76.50125.50±53.20204.69±67.87184.67±84.20194.75±73.84171.83±67.42G LU/mmo l·L－1 5.35±1.266.11±0.925.36±1.355.44±1.314.61±1.065.19±0.695.21±1.364.57±0.98BU N/mmo l·L－1 9.43±1.2910.59±1.0910.93±1.679.03±1.188.44±1.548.07±1.139.21±1.179.12±1.18组别对照组梗脉通颗粒高剂量组梗脉通颗粒中剂量组梗脉通颗粒低剂量组对照组梗脉通颗粒高剂量组梗脉通颗粒中剂量组梗脉通颗粒低剂量组

表6 梗脉通颗粒对大鼠血液TP、ALB、CHO、Cr、T-Bil的影响（±s）Tab 6Effects of Gengmaitong granules on TP，ALB，CHO，Cr and T-Bil of rats（±s）

表6 梗脉通颗粒对大鼠血液TP、ALB、CHO、Cr、T-Bil的影响（±s）Tab 6Effects of Gengmaitong granules on TP，ALB，CHO，Cr and T-Bil of rats（±s）

时间用药90d后停药2周后T P/g·L－1 98.07±11.92106.43±7.54107.26±10.2597.38±4.6983.92±9.5988.42±5.3892.42±11.8686.85±7.19A LB/g·L－1 41.55±4.4842.31±5.1342.15±3.4743.03±3.8038.07±3.3542.01±1.9541.42±3.6338.31±3.61CH O/mmo l·L－1 2.02±0.612.17±0.331.97±0.421.92±0.511.91±0.681.87±0.322.01±0.281.65±0.23Cr/μmo l·L－1 79.93±14.3571.07±10.3770.19±7.9772.94±6.2379.01±10.6286.51±13.4587.37±8.9389.36±17.27T-Bi l/μg·d L－1 5.86±1.517.43±1.458.28±4.616.06±2.351.89±0.732.51±1.052.45±0.952.48±0.98组别对照组梗脉通颗粒高剂量组梗脉通颗粒中剂量组梗脉通颗粒低剂量组对照组梗脉通颗粒高剂量组梗脉通颗粒中剂量组梗脉通颗粒低剂量组

2.2.4 系统解剖与脏器指数检查 用药90d后各组分别解剖12只大鼠，♀♂兼半；其余大鼠于停药2周后作同样处理。对各系统组织脏器进行肉眼观察，以实质性脏器重量除以体重得脏器指数，并进行病理组织学检查。结合行为活动、外观体征的观察结果，以自身与组间对比分析，评价该药物的蓄积性毒性，确定毒性反应的靶器官、可逆程度，确定受试药品有无延迟性毒性反应。结果，用药90d与停药2周后，各组♀♂大鼠各组织脏器色泽、形态、大小、位置关系均正常，脏器间无粘连，脏器表面及消化管内膜均无瘀血、充血、出血点、水肿、溃疡，胸腔、腹腔、心包腔均无积液等组织病理学改变。各组大鼠脑、心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、胸腺、睾丸、附睾（或子宫、卵巢）脏器指数均在正常值范围内。梗脉通颗粒对雄性、雌性大鼠脏器指数的影响分别见表7、表8。

表7 梗脉通颗粒对雄性大鼠脏器指数的影响（±s）Tab 7 Effects of Gengmaitong granules on organ index of male rats（±s）

表7 梗脉通颗粒对雄性大鼠脏器指数的影响（±s）Tab 7 Effects of Gengmaitong granules on organ index of male rats（±s）

时间 脏器 对照组 梗脉通颗粒高剂量组梗脉通颗粒中剂量组梗脉通颗粒低剂量组用药90d后心肝脾肺肾肾上腺胸腺睾丸附睾停药2周后脑心肝脾肺肾肾上腺胸腺睾丸附睾脑0.299±0.0093.131±0.3920.191±0.0270.559±0.1130.536±0.0410.017±0.0020.053±0.0120.767±0.0730.381±0.0390.461±0.0430.29±0.0043.12±0.1580.20±0.0100.68±0.0350.53±0.0410.01±0.0010.08±0.0120.88±0.0450.34±0.0150.44±0.0220.239±0.0053.095±0.2360.168±0.0080.538±0.0610.693±0.0100.017±0.0010.051±0.0040.782±0.0560.386±0.0170.421±0.0210.301±0.0403.116±0.2210.188±0.0130.532±0.0530.695±0.0100.017±0.0010.063±0.0090.826±0.0410.346±0.0090.414±0.0120.315±0.0183.423±0.1640.237±0.0310.586±0.0770.547±0.0510.019±0.0020.064±0.0110.934±0.0610.396±0.0420.474±0.0350.29±0.0033.02±0.1480.19±0.0080.53±0.0430.54±0.0510.01±0.0010.05±0.0070.81±0.0240.32±0.0340.41±0.0120.307±0.0103.215±0.2380.211±0.0210.573±0.0610.505±0.0220.017±0.0020.057±0.0080.845±0.0440.349±0.0170.462±0.0490.317±0.0523.043±0.2790.179±0.0610.658±0.0660.505±0.0220.016±0.0030.103±0.0730.851±0.0520.343±0.0380.425±0.022

表8 梗脉通颗粒对雌性大鼠脏器指数的影响（±s）Tab 8Effects of Gengmaitong granules on organ index of female rats（±s）

表8 梗脉通颗粒对雌性大鼠脏器指数的影响（±s）Tab 8Effects of Gengmaitong granules on organ index of female rats（±s）

脏器用药时间用药90d后心肝脾肺肾肾上腺胸腺子宫卵巢停药2周后脑心肝脾肺肾肾上腺胸腺子宫卵巢脑对照组0.35±0.0474.00±0.5210.29±0.0480.61±0.1080.62±0.0700.02±0.0020.09±0.0080.13±0.0130.04±0.0050.56±0.0290.39±0.0443.89±0.1670.28±0.0150.50±0.0310.59±0.0450.02±0.0020.06±0.0090.18±0.0130.04±0.0090.51±0.038梗脉通颗粒高剂量组0.366±0.0064.031±0.2560.290±0.0120.632±0.0490.614±0.0350.022±0.0010.072±0.0100.118±0.0060.040±0.0030.520±0.0250.359±0.0113.753±0.1640.263±0.0270.701±0.0390.606±0.0170.021±0.0010.073±0.0040.103±0.0020.047±0.0060.497±0.033梗脉通颗粒中剂量组0.37±0.0084.06±0.2780.32±0.0340.73±0.0790.63±0.0330.02±0.0020.07±0.0090.12±0.0070.04±0.0060.55±0.0250.37±0.0283.77±0.4250.21±0.0910.69±0.0530.64±0.0850.02±0.0020.07±0.0070.10±0.0220.04±0.0060.51±0.032梗脉通颗粒低剂量组0.348±0.0273.783±0.1910.270±0.0280.713±0.0720.639±0.0430.022±0.0020.077±0.0090.122±0.0080.058±0.0240.426±0.0120.363±0.0233.722±0.2890.236±0.0330.562±0.0480.578±0.0520.021±0.0010.069±0.0130.109±0.0110.047±0.0070.491±0.026

由表7、表8可知，长期连续ig 35.70、7.14、3.57g·kg－1梗脉通颗粒对♀♂大鼠脏器指数、脏器外观形态无不良反应，也无延迟性毒性反应。

3 讨论

本研究表明，急性毒性实验给予小鼠本品生药量120g·kg－1，相当于成人剂量的336倍（本品成人每天服用生药量25g，25/70＝0.357g·kg－1，120/0.357＝336），用药后未见急性毒性反应。长期毒性实验给予大鼠本品生药量35.70、7.140、3.57g·kg－1（分别相当于临床日剂量的100倍、20倍、10倍），用药期间除凝血因子外，对大鼠的生长发育、血液学和血液生化学指标、脏器系数及组织病理学检查均未见影响。

给药90d后，梗脉通颗粒高、中、低剂量组♀♂大鼠TT、PT明显延长，应为梗脉通颗粒中的活血化瘀中药成分所引起。

本研究提示该药对实质性器官无明显毒性作用，但其可明显延长凝血时间，在临床应用中当引起重视。

[1] 孙兆荣，武夏明，刘逢芹，等.正交试验优选酮通颗粒成型工艺[J].中国药房，2009，20（12）：907.

[2]《中药、天然药物急性毒性试验技术指导原则》课题研究组.中药、天然药物急性毒性试验技术指导原则[M].北京：国家食品药品监督管理局药品评价中心，2005.

[3] 熊 灏，赵 鹏，李 彬，等.藏虫草胶囊毒理学安全性评价[J].中国药房，2011，22（15）：1367.