跌打伤科酒质量标准分析与研究

周燕双 黄惠莲

跌打伤科酒收载于卫生部《药品标准》中药成方制剂第十九册，是由徐长卿、泽兰、两面针、九节茶等组成的酒剂，具有活血散瘀，消肿止痛作用。主要用于跌打损伤，积瘀肿痛，筋骨扭伤[1]。原标准中只有九节茶的薄层色谱鉴别，根据国家药典委员会关于提高国家药品行动计划的要求，对原质量标准进行提高，分析与研究，本实验按此要求作了一些探索，采用薄层色谱法和高效液相色谱法对跌打伤科酒进行更好的质量监控。

1 仪器与药品

高效液相色谱仪:Agilent1100，DAD检测器;色谱柱:Diamonsil(钻石)C18(250 mm×4.6 mm×5 m);电子天秤:Sartorius-CPA225D型号;超声波清洗器:KQ-500DE型;成像系统:CMAG REPROSTARⅡ型号;硅胶G板(青岛海洋化工研究所);甲醇:色谱纯，Merck KGaA;水为超纯水;其余试剂均为分析纯;两面针对照药材(中国药品生物制品检定所，批号:121014-201003)、熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110742-200518)、丹皮酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号:110708-200505)。跌打伤科酒及阴性对照(广州王老吉药业股份有限公司提供)。

2 实验方法与结果

2.1 泽兰、两面针薄层色谱鉴别

2.1.1 阴性对照溶液的制备 按跌打伤科酒处方配制分别缺泽兰、两面针药材的样品，按供试品溶液的制备方法，取同样比例的量，制备各自的阴性对照溶液。

2.1.2 泽兰的薄层色谱鉴别 取供试品及阴性对照样品各25 ml，加乙酸乙酯提取2次，10 ml/次，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，分别作为供试品溶液及阴性对照品溶液。再取熊果酸对照品，加乙醇制成每毫升含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验[2]，吸取上述溶液各6 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯－冰醋酸(12∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照品在相应位置上无斑点。结果见图1。

图1 泽兰薄层色谱图

2.1.3 两面针的薄层鉴别 取供试品及阴性对照样品各10 ml，浓缩至1 ml，再加水10 ml稀释，用氨水调 pH 值至9，用二氯甲烷提取二次，10 ml/次，合并提取液，蒸干，残渣加乙醇1 ml，使溶解，分别作为供试品溶液及阴性对照溶液。取对照药材粉末0.5 g，加乙醇30 ml，超声提取40 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶液，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各6 μl，分别用条状点样于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲醇(18∶2∶0.4)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照液在相应位置上无荧光斑点。见图2。

图2 两面针薄层色谱图

2.2 徐长卿含量测定

2.2.1 检测波长选择 采用Agilent1100高效液相色谱仪，DAD检测器，配制丹皮酚对照品溶液及跌打伤科酒(缺徐长卿)阴性对照溶液，在200～400 nm波长范围内进行光谱扫描。扫描结果丹皮酚对照品溶液在274 nm处有最大吸收波长，跌打伤科酒(缺徐长卿)阴性对照溶液，在274 nm处无吸收波长。选定274 nm为检测波长，结果见图3～4。

图3 丹皮酚光谱图图4 跌打伤科酒(缺徐长卿)阴性光谱图

2.2.2 色谱条件 色谱柱:Diamonsil(钻石)C18(250 mm×4.6 mm ×5 μm);流动相:甲醇-水(43 ∶57);检测波长;274 nm;进样量:10 μl;柱温:35℃。理论板数按丹皮酚峰计算应不低于 3000[3]。

2.2.3 溶液制备

2.2.3.1 对照品溶液的制备 取丹皮酚对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 ml含15 μg的溶液，即得。

2.2.3.2 供试品溶液的制备 精密量取跌打伤科酒25 ml，蒸干，残渣加甲醇溶解并定容至5 ml，摇匀，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

2.2.3.3 阴性对照品溶液的制备 按跌打伤科酒处方配制缺徐长卿药材的样品，按供试品溶液的制备方法，取同样比例的量，制备徐长卿的阴性对照溶液。

2.2.4 专属性考察 按制定的色谱条件，将丹皮酚对照品溶液、供试品溶液、缺徐长卿的阴性对照溶液，进行液相色谱分析，结果阴性对照无干扰。结果见图5。图5:从上至下①丹皮酚对照品;②供试品溶液;③徐长卿阴性对照溶液

图6

2.2.5 线性关系考察 精密称取丹皮酚对照品适量，加甲醇配制成每 1 ml含丹皮酚 1.9266、3.8530、7.7063、15.4125、30.8250、61.6500、123.3000 g 的溶液。分别吸取 10 μl，进行液相色谱分析，计算回归方程为:Y=50.837X-2.9426，R=0.9996。说明丹皮酚在1.93～123.30 g之间呈良好的线性关系。

2.2.6 精密度试验 精密吸取对照品溶液10 μl，连续进样5次，进行色谱分析，测定丹皮酚峰面积，并计算峰面积的RSD=0.54%。说明所建立方法的精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 取供试品溶液，精密吸取10 μl，进行色谱分析，分别在 0、2、4、8、12、24 小时测定，并计算含量，得相对标准偏差，RSD=2.65%。说明制备的供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批号的样品6份，按供试品制备方法制备供试品溶液，按制定色谱条件依法测定，并计算含量。RSD=1.45%，说明该方法重复性良好。

2.2.9 加样回收率试验 精密量取已知含量的跌打伤科酒6份，精密加入一定量的丹皮酚对照品溶液，按制定的方法进行操作与分析，测定丹皮酚的含量，计算加样回收率，回收率为98.44%，RSD=1.22%，该方法准确度较高，结果见表1。

表1 跌打伤科酒加样回收率试验测定结果

2.2.10 样品测定 根据所制定的供试品提取方法及色谱条件对跌打伤科酒三批进行分析与计算，结果见表2。

表2 样品测定结果

3 讨论

3.1 丹皮酚是该制剂中药材徐长卿主要成分之一。鉴于丹皮酚在中药材及其制剂中含量均不高，加之中药成分的复杂性，故取样量较大，但含量稳定性好，高效液相色谱法应是中药材及其制剂中丹皮酚首选的分离分析方法。

3.2 增加泽兰和两面针的薄层色谱的定型鉴别，徐长卿的高效液相定量含量测定，更好更全面的控制跌打伤科酒的质量。

[1]中华人民共和国卫生部药品标准－中药成方制剂(第19册)，1998:226.

[2]国家药典委员会.中国药典(2005年版).一部.北京:化学工业出版社，2005:233，附录Ⅵ B，Ⅵ D.

[3]郭汉文，侯峰，任传波.HPLC法测定定坤宁丸中丹皮酚的含量，中国药事，2007，21(9):736.