TNF-α在复发性阿弗他溃疡患者唾液中的表达及临床意义

宋艾阳，梁 丽

（1.延边大学口腔系，吉林 延吉 133002；2.吉林大学第四医院口腔科，吉林 长春 130011）

TNF-α在复发性阿弗他溃疡患者唾液中的表达及临床意义

宋艾阳1，梁 丽2＊

（1.延边大学口腔系，吉林 延吉 133002；2.吉林大学第四医院口腔科，吉林 长春 130011）

目的 研究在复发性阿弗他溃疡（RAU）患者唾液中肿瘤坏死因子（TNF-α）的表达及临床意义。方法用双抗体夹心ELISA法对RAU患者38例（男21例，女17例，年龄15～56岁）唾液中TNF－α的含量进行检测，并以38例（男19例，女19例，年龄18～50岁）健康人做正常对照，对结果进行定量分析。结果38例RAU患者唾液中TNF-α的平均含量（82.86±21.63）pg／mL比健康人（55.34±17.50）pg／mL 明显升高（t＝3.877，P＜0.001）。结论TNF-α的含量在RAU患者唾液中明显高于健康对照组，说明TNF-α参与了RAU的病理过程。

肿瘤坏死因子；复发性阿弗他溃疡；唾液

（ChinJLabDiagn，2012，16：1216）

复发性阿弗他溃疡（RAU）是最常见的口腔黏膜病，患病率高达20%左右，病因不详，可能是诸多因素综合作用的结果［1］。目前认为，机体免疫功能异常是RAU发病的重要因素之一，肿瘤坏死因子（TNF-α）通过与其受体结合，参与自身免疫的炎症过程。本研究对RAU患者唾液TNF-α进行了检测，并与健康人对比，以探讨RAU的发病机制与TNF-α的关系，为临床治疗提供相关的科学依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选择2010.4.-2011.4.在吉林大学第四医院口腔科确诊的轻型RAU患者38例，男21例，女17例，年龄15-56岁，平均37岁；在本院门诊非RAU人群中选取正常对照组，男19例，女19例，年龄18-50岁，平均35岁。入选病例要求确诊为轻型RAU且处于发作期，病变状况没有明显差别，口腔中出现溃疡不超过4天，全身药物及局部未使用药物。对照组要求无复发性口腔溃疡病史。要求所有研究对象均无高血压、糖尿病、肾病、尿毒症、肝病，甲状腺功能亢进、急慢性涎腺炎或涎腺结石、牙周病，亦无其他口腔黏膜病，无头颈部放疗史，未使用过交感神经抑制药物和皮质激素等药物治疗。

1.2 样本采集

唾液样本采用静态吸引法采集，于上午8-10时进行。采集前嘱受检者用蒸馏水漱口2次，取坐位，头端正，不要有吞咽动作，让唾液自然蓄积于口底，防止痰液污染。用一次性注射器抽取1ml唾液装入已消毒的EP管，在5min内立即置－70℃冰箱中保存。

1.3 实验方法

采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测所有样本中TNF-α的含量。

1）主 要 仪 器 与 试 剂：TNF-α 标 准 液、TNF-αELISA酶标板，TNF-α抗生物素蛋白、TNF-α生物素亲和素、染色液、终止液等［美国Rapidbio（RB）公司］；BIO-RAD 酶标仪（美国）。

2）检测方法：采用双抗体夹心法将标准TNF-α液与未知质量浓度的TNF－α的标本分别与猫抗人TNF-α生物素亲和素和抗生物素蛋白发生特异性结合，加入酶标底物，出现颜色反应。450nm下测出所有标本的光密度（OD）值，由标准质量浓度的TNF-α与其OD值做标准曲线，因为颜色的深浅与TNF-α质量浓度成正比，所以通过标准曲线可测出所有标本的TNF－α质量浓度。

1.4 统计分析

2 结果

RAU组和正常对照组的TNF－α的质量浓度曲线见图1，TNF-α含量见表1。

经统计学检验，RAU组溃疡发作期患者唾液TNF-α质量浓度明显高于正常对照组，有统计学差异（t＝3.643，P＜0.001）。

图1 RAU组和正常对照组的TNF-α的质量浓度曲线

表1 RAU组和正常对照组TNF-α含量比较 （±s）

表1 RAU组和正常对照组TNF-α含量比较 （±s）

分组 例数 年龄（岁） 唾液TNF-α含量（pg／ml）38 35.82±14.37 82.86±21.63正常对照组RAU组38 34.18±11.54 55.34±17.50

3 讨论

肿瘤坏死因子（TNF）是一种具有多种生物学活性的细胞因子。根据其基因结构和来源可分为TNF-α、TNF-β。TNF-α主要是由单核巨噬细胞合成分泌的，通过与其相应受体结合，参与自身免疫的炎症过程，是介导自身免疫反应的重要效应因子之一，RAU的发病可能与之有关。

有研究证实：RAU患者的外周血中TNF-α明显升高，TNF-β无明显变化。姜军松［2］等对外周血淋巴细胞进行分析发现，RAU患者的单核细胞和淋巴细胞分泌TNF水平显著高于正常对照。作为炎症介质的TNF－α可能对这些病变中的淋巴细胞的激活和趋化起促进作用。这些现象说明TNF－α与RAU的发病有密切关系。

唾液成分和血液成分密切相关。由于唾液标本容易采集、属无创伤性检测，能反映出许多疾病状态和特点，所以利用唾液来探查病因、诊断疾病、监测健康和疾病状态、预测疾病的进展等已有很长的历史。

本研究通过实验发现RAU患者唾液中TNF-α含量明显高于正常对照组（t＝3.877，P＜0.001），与Boras［3］研究结果一致，进一步说明 TNF－α参与了RAU的发病机制。唾液中TNF－α的来源可能为龈沟液血清的渗出和病损局部免疫细胞的释放。

Natah［4］采用免疫组化研究发现，RAU黏膜固有层中的TNF-α显著增多，而且分泌它的淋巴细胞、单核巨噬细胞、肥大细胞血管内皮细胞的数量也显著增多，这些细胞释放多种细胞因子如TNF－α、IL-2、IL-6等，单核巨噬细胞是分泌 TNF-α的主要细胞，而病损区的单核巨噬细胞的数量占到32%-60%。有学者认为TNF－α的释放是RAU溃疡发病的特异过程，免疫细胞细胞毒性作用释放TNF－α致上皮损害形成溃疡。

TNF-α引起溃疡发生的病理变化可能为①激活血管内皮细胞，促进血凝和血管收缩影响血管通透性，并上调内皮细胞上的细胞间粘附分子的表达，从而使中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞与血管内皮细胞表面的粘附增强，导致炎细胞浸润；②对中性粒细胞和单核细胞具有刺激作用，可增强其吞噬功能，并使之脱颗粒释放多种炎性介质，如氧自由基、细胞因子及弹性蛋白酶等，这些都是强力破坏组织的因素，可造成口腔黏膜损伤；③与其他细胞因子及炎症递质作用，引起多种损伤因子发生连锁反应。TNF-α能诱导IL-21，IL-26等的基因表达，活化磷脂酶A2（PLA2），使花生四烯酸分解，产生PAF，LTs，PGEs，TXA2等炎性递质，从而加剧炎症反应及微循环障碍；④通过灭活组织纤溶酶原激活物而抑制纤溶反应，通过增强组织因子表达下调血栓调理素而激活凝血系统，导致毛细血管微血栓形成，引起血液流变学和血流动力学改变，使口腔黏膜产生缺血性病变［5］。

免疫学研究表明，由多种系统因素所引起的RAU表现为自身免疫的特点。虽然目前还缺乏RAU是自身免疫性疾病的有力证据，但抗口腔黏膜抗体的存在和循环免疫复合物，细胞毒性作用，以及棘细胞中发现的自身抗体都说明体液免疫和自身免疫反应是RAU发病的可能因素之一。Sun［6］等研究发现左旋咪唑为一种特殊的免疫抑制剂，因其能抑制TNF－α的产生，从而抑制炎症反应，用其治疗RAU取得了较好的疗效。

本实验的关键点就在于唾液标本的存放，唾液标本的收集虽然容易，但唾液收集后因所含CO2可以逸出，pH值上升，沉淀物形成，细菌生长，从而引起唾液成分改变。因此唾液采集后通常应即时分析或立刻（最好在5min内）置于-20℃以下冰箱内保存，且禁止反复冻融。Gough［7］在实验中发现10g／L氟化钠可以抑制细菌生长，延长唾液保存时间。

［1］Femiano F，Lanza A，Buonaiuto C，et al.Guidelines for diagnosis and management of aphthous stomatitis［J］.Pediatr Infect Dis J，2007，26（8）：728.

［2］姜军松，唐晓农，杨志刚，等.复发性口疮患者肿瘤坏死因子活性水平及病因学意义探讨［J］.实用口腔医学杂志，1998，14（2）：117.

［3］Boras VV，Lukac J，Brailo V，et al.Salivary interleukin-6and tumor necrosis factor-alpha in patients with recurrent aphthous ulceration［J］.J Oral Pathol Med，2006，35（4）：241.

［4］Natah SS，Hayrinen-Immonen R，Hietanen J，et al.Immunolocalization of tumor necrosis factor-alpha expressing cells in recurrent aphthous ulcer lesions（RAU）［J］.J Oral Pathol Med，2000，29（1）：19.

［5］王 娟.肿瘤坏死因子α在大鼠脑外伤后急性胃粘膜病变中的作用［J］.世界华人消化杂志，2007，15（26）：1437.

［6］Sun A，Wang JT，Chia JS，et al.Levami sole can modulate the serum tumor necrosis factor-alpha level in patients with recurrent aphthous ulcerations［J］.J Oral Pathol Med，2006，35（2）：111.

［7］Gough H，Luke GA，Beeley JA，et al.Human salivary glucose analysis by high-performance ion–exchange chromatography and pulsed amperometric detection［J］.Arch Oral Biol，1996，41（2）：141.

The expression and clinical significance of TNF-αof saliva in patients with recurrent aphthous ulceration

SONGAiyang1，LIANGLi2＊.（1.YanbianUniversity，Yanji133002，China；2.DepartmentofStomatology，theFourthAffiliatedHospitalofJilinUniversity）

ObjectiveTo study the expression and clinical significance of tumor necrosis factorα（TNF-α）of saliva in patients with recurrent aphthous ulceration（RAU）.MethodsSalivary levels of TNF-αin 38patients（male21，female17，aged 15～56years）with RAU were determined by double-antibody sandwich ELISA，salivary of 38（male19，female19，aged18-50years）healthy individuals served as controls.ResultsThe mean salivary TNF-αlevel in RAU patients（82.86±21.63）pg／ml was significantly higher than that in the controls（55.34±17.50）pg／ml，（t＝3.877，P＜0.001）.ConclusionThe salivary TNF-αlevel in RAU patients is significantly increased，which indicates further that TNF-αmay play a very important role in the pathogenesis of RAU.

tumor necrosis factor；recurrent aphthous ulceration （RAU）；saliva

R781.5

A

1007－4287（2012）07－1216－03

＊通讯作者

2011－10－13）