EDTA-K2抗凝致血小板降低数值观察

牛安琳

(河南省安阳市第三人民医院检验科 河南安阳 455000)

乙二胺四乙酸二钾(EDTA—K2)抗凝对血细胞形态影响很小,特别适用于全血细胞分析,根据国际血液学标准委员会(tCSH)1993年文件建议,血细胞计数宜用EDTA盐[1]。但近年来发现EDTA-K2抗凝导致假性血小板减少临床上并不少见,我们对此进行了研究,现汇报如下。

1 临床资料

(1)标本来源:选取2011年1～6月门诊健康体检人员200例,其中男性110例,女性90例,年龄在22～58岁。(2)仪器:SYSMEX XE-5000血细胞分析仪,OLYMPUS显微镜。(3)方法:首先用常规方法检测EDTA-k2抗凝静脉血,按要求采集静脉血于EDTA-K2真空抗凝管内至2mL刻度处,检验科收到标本后,于室温5min内在自动旋转式混匀器上混匀,上机检测血小板,及EDTA-K2抗凝血标本分别放置30min、90min、2h、6h后各测定3次。同时采手指血按操作规程进行手工计数(按照全国临床检验操作规程进行计数[2]),用计数池直接计数。(4)统计学方法:使用SPSS 10.0统计软件包进行统计分析,计量资料用均数±标准差(±s)表示,采用t检验处理数据。

2 结果

按照检测方法对EDTA-K2抗凝血标本进行5min、30min、90min、2h、6h检测血小板并与手工计数标准进行对比,具体见表1。

3 讨论

血小板在体内主要参与止血与血栓形成,在止血血栓的病理生理过程中起着重要的作用,血小板的数量异常或功能缺陷是出血性疾病或血栓性疾病的重要原因,因此血小板数量的检测是临床常用的检验项目之一,它的计数准确性对指导临床诊断和治疗的重要指标,临床非常重要,是临床上最常用的检测项目之一[3]。EDTA抗凝原理是与血液中的凝血因子Ⅳ(钙离子)结合成螯合物,使其失去凝血作用,从而阻止血液凝固。EDTA-K2抗凝性强,可抑制血小板原发性凝聚,使离体后的血小板离散成为单个颗粒,而对血小板计数的影响较小,有较好的稳定性[4];因其对血细胞形态影响很小,特别适用于全血细胞分析,已被ICSH认定并在临床广泛使用。

表1 检测结果比较(±s)

表1 检测结果比较(±s)

注:人工计数法与抗凝血放置5min、2h、6h血小板检测比较,P＜0.05,有显著差异性

计数方法 检测值人工计数 222±54抗凝血放置时间5min 151±35 30min 218±53 90min 216±52 2h 199±46 6h 175±40

EDTA导致假性血小板减少原因很多:(1)依赖性假性血小板减少(PTCP)与血小板表面存在某种隐匿性抗原有关[4]。EDTA可引起血小板糖膜(GP)发生改变,使隐匿性抗原暴露,某些病人血浆中存在的某种自身抗体与这种抗原结合后的抗原抗体复合物激活了细胞膜中的磷酯酶,使血小板膜水解并释放AA、ADP、5-TH、胶原、凝血酶原等血小板活性物质。从而不同程度的活化血小板纤维蛋白原受体(FIR-B),促使血小板与纤维蛋白原受体结合后聚集成团,导致血小板假性减少。(2)EDTA-K2抗凝血中,血小板黏附、围绕于中性粒细胞(或偶尔黏附于单核细胞)的现象[5],系EDTA和白细胞表面的IgG或Fc片段相互作用、非特异性结合血小板表面的GPⅡb所致,虽与疾病和药物无关,这些粘附、围绕于中性粒细胞的血小板被误计为白细胞,造成血小板假性减少EDTA—K2会使血小板形态发生变化,其外膜游离端向外伸展,从而在血小板周围形成丝状伪足,伪足相互缠绕形成血小板可逆性聚集,在用阻抗法做血小板计数时,聚集体所产生的脉冲大于仪器预设的血小板脉冲值,血小板不被计入其结果内,从而使血小板数量减少。在一定时间段内,随着时间的延长,抗凝剂与血液充分溶融,松散聚集的血小板由盘状变为球状而逐步解聚,血小板计数逐步升高[6]。

[1]忠勇.准确计数血小板方法学研究进展[J].国外医学·临床生物化学与检验分册,2002,23(3):132～134.

[2]叶应妩,王毓三,申子瑜.全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006:11.

[3]丛玉隆,王昌富,乐家新.血细胞自动化分析后血涂片复审标准制定的原则与步骤[J].中华检验医学杂志,2008,31(7):732～735.

[4]孙杨,丘江.抗凝剂乙二胺四乙酸致血小板假性减少[J].检验医学与临床,2008,5(8):504.

[5]传清,吴建曾,赵锦,等.EDTA依赖性假性血小板减少症一例[J].临床血液学杂志,2006,19(4):246～247.

[6]施巍宇,郝婉莹.EDTA依赖性假性血小板减少症[J].中华检验医学杂志,2004,27(10):719.