金标快速法与ELISA法检测HBV的对比分析

周积满

(泸溪县人民医院 湖南湘西 416100)

病毒性肝炎在临床具有较强感染力、发病率较高,对人类健康造成严重威胁的传染性疾病,其中危害最大的是乙型肝炎(HBV),全球HBV表面携带者至2002年止,据WHO初步估计有4亿以上,其中约有1.3亿发生在我国,且母婴传播所造成的感染约占30%～50%[1]。在对乙肝预后进行预测、流行病学调查、献血人员筛查、公共环境卫生、乙型肝炎免疫水平等实验室检测中,乙型肝炎表面抗原(HBaAg)、e抗原(HBeAg)、抗心抗体(抗-HBc)、表面抗体(抗-HBs)、e抗体(抗-HBe)等实用项目检测的方法较为重要。本次研究选择我院体检某校新生为对象,分别采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和金标快速法对HBV进行检测,就临床结果进行回顾性分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

本次研究对象4600例,行3～5mL静脉血采集,将血清分离,初筛应用反向被动血球凝集试验(RPHA)的方法,将HBsAg阳性的血清对乙肝HBaAg、抗-HBs、抗-HBc、HBeAg、抗-HBe分别用ELISA和金标法平行进行检测,随机分为ELISA法组200例,金标快速法组200例,2组对象在年龄、性别、病性、病程及HBeAg检测方面比较无统计学差异(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 金标快速检测法 血清(血浆)与乙肝抗体(抗原)内的相应抗原(抗体)特异性结合以金、银、硒等为标志物,依据双抗原(抗体)夹心原理,对该抗体(抗原)在经组织化学的呈色反应之后进行定性检测。先从冰箱中在试验前取出测试条,常温1～2h放置后使用,依次在试验前将HBV五项指标测试条的一端在盛有血清标本的试管中插入约5s,后取出在白纸上放置,对弱阳性结果等待10～15min行判断,对强阳性结果在2min内即可观察,最迟不宜超过20min。结果判定:若有一条红色线先后在测试条中段出现,则为阳性,若无红色线出现为测试条失效或试验失败。

1.2.2 ELISA法 HBsAg目前国内最常用的免疫测定方法为ELISA试验,应用多克隆或单克隆抗体,针对HBaAg的α决定簇,为双抗体夹心模式,可行0.5ng/mL以下的测定。乙型肝炎在早期诊断指标为血清中检出HBsAg,除急性期外,在发生HBV感染后,大部分人无临床表现。但HBsAg可在血中检出,这类人群为HBsAg携带者。 HBV感染的标志为血清HBaAg。

1.3 统计学方法

采用SPSS13.0统计学软件,计数资料行χ2检验,P<0.05差异有统计学意义(P<0.05)。

2 结果

ELISA法与金标快速法平行检测HBV结果,经RPHA法初筛,200份为HBsAg阳性血清,对其分别使用ELISA法与金标快速测试法对乙肝五项进行平行检测,结果无明显差异(P>0.05),见表1。HBV五项指标2种方法检测结果的总符合率分别为98.5%、99.5%、99%、96%、96.5%。以ELISA为常规方法对金标快速测试法进行验证,则金标法分别为99.5%、100%、98.5%、94.5%、95%敏感性。特异性分别为84.5%、99.5%、96.5%、96%、96%。

表1 HBV采用ELISA与金标快速法检查结果比较(n)

3 讨论

慢性乙型肝炎在我国为高度流行区,在我国人口中,HBsAg阳性者占8.83%,远远超出世界水平,HBV变异株近年来有研究出现使患者HBV感染复制状况更难诊断,常有漏诊发生[2]。荧光定量PCR为一项实时检测技术,操作通过完全闭管式进行,使扩增产物的污染大大减少,并使检测的特异性提高,扩增产物或通过电脑自动读数来行精确定量,使检测的灵敏度提高,避免了普通PCR检测方法的缺点[3]。因Fprobe的加入,FQ-PCR更加提高了产物荧光定量检测的特异性,并可得出定量结果,减少了实验步骤,并使操作进一步简化,使自动化的程度增加[4～5]。

胶体金标记抗体检测细菌表面抗原是1997年有学者曾报道的方法[6],在多种病原微生物中成为重要的检测手须,本次研究采用金标快速法对HBV五项进行检查,并和ELISA行平行试验,总符合较高,且2种方法检测结果无明显差异性,与ELISA法比较,金标快速法更方便、简单、准确、快速,在对乙肝病毒五项指标快速测定中较为适用,无需温育、洗涤、终止等相对复杂的步骤,对仪器设备要求不高,可通过肉眼在15min后读出结果,可将此方法用于健康查体、大规模流行病学调查中,特别是在各种内窥镜检查的术前和健康人群的筛查,故在HBV五项指标快速测定中,金标快速法为较理想的方法,快速、使用简单、准确性高,值得广泛推广应用。

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[4]李敬忠,谭淑珍,呈燕.荧光定量聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒DNA[J].中华微生物和免疫学杂志,2001,21(6):690～692.

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