河南地区食管鳞癌与HPV16、18关系的研究

刘新胜 郭文涛 赵国强

(1.郑州大学基础医学院 郑州 450001; 2.漯河医学高等专科线学校 河南漯河 462002)

人乳头瘤病毒(HPV)目前已分离鉴定出118型。2003年的一项流行病学分类研究定义了15种高危型HPV(如HPV16、HPVl8)和12种低危型(如HPV6、HPV11)。大量研究已经明确它是引起宫颈乳头瘤样病变、宫颈癌的一个独立危险因素。1982年Syrjanen[1]首次提出HPV感染与食管癌可能具有密切关系,之后多有报道,但因研究结果不尽一致,如崔金环等[2]在140例食管癌组织中未检出任何基因型别的HPV,丁广成等发现HPV16在食管鳞癌中有较高检出率(84%);董忠生等在30例食管癌新鲜组织和对应石蜡固定组织HPV检出率为84%和53%,曹邦伟等使用Meta分析1982年至2009年关于HPV感染与食管癌关联的病例对照研究发现,HPV高危型别(16与18型)的感染与食管癌的发生依然显示出明显的易感关联。河南地区为食管癌的高发区,本研究应用导流杂交技术,对57例河南地区食管鳞癌组织及癌旁组织标本进行了高危型HPV检测,进一步了解HPV感染与食管癌的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

57例食管癌手术切除标本取自漯河医学高等专科学校第三附属医院、郑州大学医学院第一附属医院、第二附属医院(2009年6月至2010年7月),其中男35例,女22例;年龄42～79岁,平均(58.41±7.63)岁。病理组织学证实57例食管癌均为鳞状细胞癌,其中Ⅰ级15例,Ⅱ级20例,Ⅲ级22例;合并有淋巴结转移27例,手术清扫的食管周围淋巴结中发现癌转移;无淋巴结转移30例,食管周围淋巴结中未发现癌转移。浸润深度分2组,浅层组9例,肿瘤浸润深度在黏膜层、黏膜下层或浅肌层;深层组48例,肿瘤浸润深度在深肌层或纤维膜层。所有病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。所有标本均在手术切除后2h内收集。

1.2 方法

快速导流杂交法检测HPV基因型试剂盒为中国凯普生物化学有限公司产品,采用快速导流杂交法检测16、18两种HPV基因型,将上述样本按常规方法DNA提取,PCR扩增,快速导流杂交,显色后,对样本进行结果判断,具体操作按照试剂盒说明书进行。

1.3 数据处理

采用配对χ2检验(chi-square test),检验水准取α=0.05,数据处理采用SPSS 13.0统计软件处理。

2 结果

2.1 高危型HPV(HPV16、18)在食管磷癌组织中扩增结果

高危型HPV(HPV16、18)在食管鳞癌组织中的阳性率为56.14%(32/57)。男女患者高危型HPV阳性率为57.14%(20/35)和54.55%(12/22),差异无统计学意义,χ2＝0.04,P>0.05;淋巴结转移组感染率77.78%(21/27)明显高于无淋巴结转移组36.67%(11/30),差异显著,χ2=9.75,P<0.01(表1);总体上,HPV16阳性率(36.84%,21/57)明显高于HPV18(19.30%,11/57),差异有统计学意义,χ2＝4.34,P<0.05;同样,淋巴结转移组,HPV16阳性率(55.56%,15/27)明显高于HPV18(22.22%,6/27),差异有统计学意义,χ2＝6.31,P<0.05;相反,无淋巴结转移组,HPV16阳性率(20.00%,6/30)和HPV18阳性率(16.67%,5/30)之间差异无统计学意义,χ2＝0.11,P>0.05;HPV在I、II、III级分化程度中的阳性率为60%(9/15)、50%(10/20)、59.09%(13/22),差异无统计学意义,χ2＝0.47,P>0.05(表2);同样,HPV表达与患者年龄、性别及浸润程度均无相关性,P均>0.05。

表1 HPV及16、18型感染率分布

表2 食管鳞癌分化程度与HPV及16、18型的感染率

2.1 高危型HPV(HPV16、18)在癌旁组织中扩增结果

57例癌旁组织中,高危型HPV的阳性率为24.56%(14/57)。男女患者高危型HPV阳性率为22.86%(8/35)和27.27%(6/22),差异无统计学意义,χ2＝0.14,P>0.05;HPV16和HPV18阳性率为57.14%(8/57)和54.55%(6/57),差异无统计学意义,χ2＝0.33,P>0.05;同样,HPV表达与患者性别、年龄及浸润程度均无相关性,P均>0.05。

2.2 高危型HPV(HPV16、18)在食管磷癌和癌旁组织中扩增结果比较

高危型HPV在食管鳞癌组织中的检出率为56.14%(32/57),明显高于癌旁组织检出率24.56%(14/57),差异有统计学意义,χ2＝11.81,P<0.05。

3 讨论

食管鳞癌组织HPV感染率在不同地区或者同一地区研究结果差别较大(0%～84%),综合已有文献分析导致上述结果的原因除取材方法以及取材地区、种族的差异外,研究方法不一也是一个重要影响因素。主要的HPV检测方法有传统杂交法、型特异PCR、通用引物PCR、实时荧光PCR、杂交捕获法、导流杂交基因微阵列分型检测等。这些方法存在着或操作繁琐,或费时耗力,或只能进行分组鉴定而不能进行基因分型等缺点。本研究采用导流杂交方法检测HPV分型,具有其它检测方法不具备的优点:(1)快速,即在PCR扩增后产物只需30min就可得到杂交结果;(2)可分型,可一次性检测21种HPV亚型感染,既可以显示具体某种亚型HPV感染,也可以显示混合型多重感染;(3)有质控对照,可在同一张低密度基因芯片薄膜上同时完成扩增对照和杂交对照,对整个实验过程实行全面质量控制。因而本实验结果更加真实可信,有现实意义。

利用导流杂交方法对河南地区食管癌及癌旁组织样本进行HPV16、18检测,结果显示食管鳞癌高危型HPV阳性率明显高于癌旁组织(56.14%vs24.56%),提示高危型HPV16、18与该地区食管鳞癌的发生存在明显关联。与有文献所报道的安阳地区34例HPV18阳性的食管鳞癌组织检出24例HPV16阳性不同,本次研究的标本中均未检测出HPV16、18双重感染。但由于本次研究存在样本量较小,取材和检测方法单一等不足,HPV16、18双重感染与食管鳞癌的关系尚有待进一步讨论。

研究表明HPV16、18感染与食管鳞癌组织分化程度、肿瘤浸润程度、患者性别及年龄无明显相关性,提示HPV感染可能仅作为食管鳞癌发生的危险因素。

有文献[3]报道HPV16表达与淋巴结转移无相关性,与之不同,本次研究中(表1)HPV16、18在淋巴结转移组感染率明显高于无淋巴结转移组(77.78%vs36.67%),提示样本中HPV16、18可能参与了食管鳞癌的进化步骤和淋巴结转移的过程,HPV与癌细胞的转移关系有待进一步的研究。

与Li et al和刘红彦等报道相似,本研究发现河南地区食管鳞癌中HPV16总体表达率明显高于HPV18(36.84%vs19.30%),同样的情况也出现在淋巴结转移组(55.56%vs22.22%),提示HPV16与食管鳞癌发生与发展的关联程度高于HPV18。

食管鳞癌的发生受到多重因素影响,如遗传、饮食习惯、地理位置等,HPV作为环境中的生物致癌因素越来越受到人们的关注,本研究检测了河南食管鳞癌及癌旁组织高危型HPV的感染情况,这为进一步开展预防HPV感染,减低食管癌的发病率有着重要的意义,同时在治疗过程中检测HPV病毒的感染,进行干预治疗,对降低食管癌复发有着积极的临床意义。

[1]崔金环,杨光,苏锡康,等.宫颈癌和食管癌组织中人乳头状瘤病毒基因型的检测[J].肿瘤学杂志,2009,15(3):182～184.

[2]曹邦伟,于晶琳,荷欢.中国人群中HPV感染与食管癌发生关联的Meta分析[J].首都医科大学学报,2010,31(2):258～263.

[3]许春雷,千新来,周小山,等.HPV16型-E6、E7在食管鳞癌组织与非癌组织中的表达[J].癌症,2004,23(2):165～168.