GC法测定阿奇霉素原料中三氯甲烷的残留量

宋更申 冯丽 王熳 张西如 张轶华 甄晓兰 张菁

·实验研究·

GC法测定阿奇霉素原料中三氯甲烷的残留量

宋更申 冯丽 王熳 张西如 张轶华 甄晓兰 张菁

目的建立毛细管气相色谱法测定阿奇霉素中三氯甲烷残留量的方法。方法色谱柱为DB-624石英毛细管柱，载气为氮气，柱温采用程序升温，检测器为ECD检测器，以N，N-二甲甲酰胺为溶剂。结果三氯甲烷检测浓度的线性范围为0.6～60 μg/ml，平均回收率为99.5%，定量限为0.98pg。3批样品中三氯甲烷残留量均符合规定。结论本方法简单、准确、可用于阿奇霉素原料中三氯甲烷残留量的测定。

气相色谱法;阿奇霉素;三氯甲烷

阿奇霉素(Azithromycin)是由红霉素衍生的15元大环内酯类广谱抗生素，具有优于母体化合物的生物活性和药理特性。阿奇霉素制备工艺中用到了三氯甲烷，根据《中国药典》2010年版［1］的规定，应建立三氯甲烷的测定方法，考察样品中三氯甲烷的残留量，并应符合三类溶剂残留限度要求。本文参考相关文献［2，3］介绍的方法，建立了毛细管气相色谱法测定阿奇霉素中三氯甲烷残留量的方法。可为药品标准增订残留溶剂检查项提供科学依据。

1 仪器与试药

Agilent 6890型气相色谱仪，SartoriusBP211 d型电子天平。三氯甲烷对照品和色谱纯N，N-二甲基甲酰胺均购自美国Sigma公司。阿奇霉素(国内 S公司，批号:20110601、20110602、20110603)。载气为高纯氮气(纯度大于99.999%)。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱为DB-624毛细管柱(60 m 530 μm 3 μm)，柱温:80℃维持5 min，以35℃/min的速率升至220℃，维持10 min;分流进样方式，分流比为10∶1，进样口温度为180℃;采用ECD检测器，检测器温度为300℃，尾吹25 ml/min;载气为氮气，流速为4.5 ml/min，进样量为1 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液 精密称取三氯甲烷对照品约12 mg，置200 ml容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，精密量取10 ml，置100 ml容量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液 精密称取本品约1.0 g，置10 ml容量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 系统适用性试验 取“2.2”项下的对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件注入气相色谱仪，记录色谱图。结果三氯甲烷的理论板数为30029，溶解介质(N，N-二甲基甲酰胺)不干扰三氯甲烷的测定。2.4 线性关系 取三氯甲烷对照品，分别用N，N-二甲基甲0.6、1.2、6.0、12.0、24.0、60.0g/ml酰胺配置成浓度为 μ的溶液，按“2.1”项下的色谱条件注入气相色谱仪，记录色谱图，以峰面积(A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，进行线性回归，线性方程为:A=1025.89 c+880.77，相关系数为:r=0.9999，线性范围为:0.6 ～60 μg/ml。

3 讨论

DB-624是中极性毛细管柱，适用于多核芳烃、酚、酯、碳氢化合物、药物及醇等，比较适合用于残留溶剂分析。在该研究条件下三氯甲烷和溶解介质可达到有效分离，且峰形好，灵敏度高，重现性好。

《中国药典》2010年版性状项下规定:阿奇霉素在甲醇、丙酮、三氯甲烷、无水乙醇或稀盐酸中易溶，在乙腈中溶解，在水中几乎不溶。由于本文采用直接进样方式，尝试用DMF和DMSO作溶剂，样品在两溶剂中的溶解性均较好，选择沸点较低的DMF作溶解介质。DMF对三氯甲烷有较好的溶解与提取能力，因其沸点高(152.8℃)，在色谱柱上保留时间长，可使挥发性较强的三氯甲烷(沸点为61～62℃)先出峰，并且选择程序升温大大缩短了分析时间。

本方法三氯甲烷的定量限为0.98 pg，灵敏度完全可以满足阿奇霉素中三氯甲烷残留量测定的需要。本实验测得3批样品中三氯甲烷均未检出，说明该原料药后续工艺中对三氯甲烷的去除较为完全，工艺较好。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部).北京:化学工业出版社，2010:61-65．

［2］ 宋更申，郭毅，付焱，等.毛细管气相色谱法测定盐酸美金刚原料中三氯甲烷的残留量.中国药房，2010，21(37):3536-3537．

［3］ 宋更申，姜建国，刘红莉，等.顶空气相色谱法测定美罗培南中有机溶剂的残留量.中国药房，2010，21(5):447-448．

050011 石家庄，河北省食品药品检验院

2.5 精密度试验 取三氯甲烷对照品和一批阿奇霉素原料药(批号:20110601)，按“2.2”项下的方法制备对照品溶液和供试品溶液，对照品溶液制备1份，供试品溶液平行制备6份，按“2.1”项下的色谱条件注入气相色谱仪，对照品溶液连续进样6次，三氯甲烷对照品溶液峰面积的RSD为1.0%，按外标法计算三氯甲烷的残留量，结果3批样品中三氯甲烷均未检出。表明精密度良好。

2.6 定量限试验 精密称取三氯甲烷对照品，加入N，N-二甲基甲酰胺逐级稀释制成适宜浓度的对照品溶液，按“2.1”项下的色谱条件注入气相色谱仪，当信噪比约为10时计算三氯甲烷的定量限，结果定量限为0.98pg。

2.7 回收率试验 分别称取同一批阿奇霉素原料药(批号:20110601)各约0.5 g，共9份，精密称定，分别置5 ml容量瓶中，分别加入 0.06 mg/ml的对照品溶液 0.40 ml、0.50 ml、0.60 ml，各3份，再分别用N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，按“2.1”项下的色谱条件注入气相色谱仪，按外标法以峰面积计算，三氯甲烷的平均回收率为99.5%，RSD分别为0.6%。

2.8 样品中三氯甲烷的残留量测定 取三氯甲烷对照品和3批样品，按“2.2”项下的方法制备对照品溶液和供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件注入气相色谱仪，按外标法以峰面积计算三氯甲烷的残留量，结果3批样品中三氯甲烷均未检出。