Livin在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及其与Ki-67表达的关系

李敬果，翟晓翔，张翠侠，陈向辉

(徐州市中医院皮肤科，江苏徐州221003)

Livin是近年来发现的人类凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptos protein，IAP)家族的新成员，特异性高表达于某些实体肿瘤组织和肿瘤细胞系，能抑制许多凋亡刺激剂诱发的细胞凋亡。Ki-67是反映肿瘤细胞增殖活性的指标，与肿瘤的发展、转移及预后高度相关。作者应用免疫组织化学方法检测皮肤鳞状细胞癌(cutaneous squamous cell carcinoma，CSCC)组织中 Livin 的表达，并探讨其表达与细胞增殖及CSCC临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 40例CSCC标本取自徐州市中医院病理科2003年至2010年存档蜡块。40例患者中，男性22例，女性18例;年龄38～81岁，平均年龄66岁;面、颈等暴露部位27例，胸、背、四肢及阴部等非暴露部位13例;根据Broders分类，Ⅰ级12例，Ⅱ级18例，Ⅲ～Ⅳ级10例;有淋巴结转移者8例，无淋巴结转移者32例。另取10例正常皮肤组织作为对照。

1.2 检测方法 采用免疫组织化学S-P法检测Livin及Ki-67的表达。Livin单克隆抗体购自武汉博士徳公司，Ki-67单克隆抗体、S-P试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒均购自福州迈新生物技术开发有限公司。检测具体步骤按试剂盒说明书进行，用已知阳性切片作为阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照。Livin以肿瘤细胞的细胞质出现棕黄色颗粒为阳性信号;Ki-67以肿瘤细胞的细胞核出现棕黄色颗粒为阳性信号，随机选择10个高倍镜(×400)视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，计算阳性细胞数占肿瘤细胞总数的百分比，即Ki-67的增殖指数。

1.3 统计学处理 采用SPSS 11.0进行统计学分析，计量资料比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，检验水准 α=0.05。

2 结果

2.1 Livin的表达 40例CSCC组织中Livin的阳性率为70.00%(28/40)，而正常皮肤组织中无表达，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.2 Livin的表达与Ki-67增殖指数的关系 CSCC组织中Ki-67的阳性率为75.00%(30/40)，Livin阳性表达CSCC的Ki-67增殖指数为(36.15±20.27)%，Livin阴性者的Ki-67增殖指数为(20.36±10.82)%，差异有统计学意义(P＜0.05)。

2.3 Livin的表达与CSCC临床病理特征的关系Livin的表达与CSCC的病理分级、淋巴结转移有关(P均＜0.05)，而与患者性别、年龄及肿瘤部位无关(P均 ＞0.05)。见表1。

3 讨论

CSCC在我国的发病率居皮肤恶性肿瘤之首，占皮肤恶性肿瘤的78.5% ～90.9%［1］，且发病率呈上升趋势。目前，CSCC发病机制仍不十分清楚，但多数肿瘤的发生是细胞凋亡与增殖失衡所致，受细胞内外多种因素控制。随着肿瘤分子生物学的研究进展，人们试图从分子水平揭示肿瘤发生、发展的机制，并期望通过调节细胞的凋亡和增殖达到治疗肿瘤的目的。

越来越多的研究表明，Livin基因在肿瘤的发生、发展中起重要作用，并逐渐成为人们研究的热点［2－3］。Livin是凋亡抑制因子，在多种肿瘤细胞中表达，其抑制细胞凋亡主要作用机制如下:BIR区与Caspases家族结合，抑制其活性，尤其是抑制Caspase-3、Caspase-7和Caspase-9的活性，阻止Caspases家族蛋白在细胞凋亡时执行蛋白切除功能，进而阻断凋亡受体及以线粒体为基础的凋亡途径［4］，使有利于细胞的增殖及异常基因进一步积聚，从而促进细胞向恶性方向转化及肿瘤的发展。目前针对CSCC组织中Livin表达状况的研究较少。本研究结果显示，Livin在正常皮肤组织中不表达，而在CSCC组织中的阳性率为70.00%，提示其可能通过抑制肿瘤细胞凋亡对CSCC的发生、发展起重要作用，检测Livin可能对CSCC的诊断有重要价值;病理分级Ⅲ～Ⅳ级的CSCC组织中Livin的阳性率为90.00%，明显高于Ⅰ、Ⅱ级的41.67%和77.78%;有淋巴结转移的CSCC组织中Livin的阳性率为100.00%，明显高于无淋巴结转移者的62.50%。这些均表明检测Livin的表达对CSCC恶性程度及预后的判断有一定的参考价值，对CSCC的发生、临床进展和生物学行为评估也可能具有一定指导意义。

Ki-67是反映肿瘤细胞增殖活性的指标，其表达随细胞周期不同而发生改变，在有丝分裂G1期到晚期出现，S期和G2期逐渐增加，M期达到最高值，在细胞分裂晚期很快消失，G0期不表达。Ki-67仅在增殖细胞核中表达，其半衰期短，脱离细胞周期后迅速降解，已成为检测肿瘤细胞增殖活性的可靠指标［5］。Ki-67增殖指数高低与许多肿瘤的分化程度、浸润、转移及预后密切相关［6］。本研究结果显示，Ki-67在CSCC组织中的阳性率为75.00%，且Livin表达与Ki-67增殖指数有关，提示Livin蛋白促进细胞的增殖，两者有可能在CSCC的发生、发展中共同发挥作用。

综上所述，Livin不仅参与了凋亡的调控，还促进了细胞的增殖，在CSCC的发生、发展中起重要作用，可作为判断CSCC恶性程度、评价预后的指标。

［1］赵辨.临床皮肤病学［M］.3版.南京:江苏科学技术出版社，2001:1106－1110.

［2］Tanabe H，Yagihashi A，Tsuji N，et al.Expression of survivin mRNA and livin mRNA in non-small-cell lung cancer［J］.Lung Cancer，2004，46(3):299 －304.

［3］Lopes RB，Gangeswaran R，McNeish IA，et al.Expression of the IAP protein family is dysregulated in pancreatic cancer cells and is important for resistance to chemotherapy［J］.Int J Cancer，2007，120(11):2344－2352.

［4］Gazzaniga P，Gradilone A，Giuliani L，et al.Expression and prognostic significance of LIVIN，SURVIVIN and other apoptosis-related genes in the progression of superficial bladder cancer［J］.Ann Oncol，2003，14(1):85 －90.

［5］Vernillo R，Lorenzi B，Banducci T，et al.Immunohistochemical expression of p53 and Ki67 in colorectal adenomas and prediction of malignancy and development of new polyps［J］.Int J Biol Markers，2008，23(2):89 －95.

［6］Taheri ZM，Mehrafza M，Mohammadi F，et al.The diagnostic value of Ki-67 and repp86 in distinguishing between benign and malignant mesothelial proliferations［J］.Arch Pathol Lab Med，2008，132(4):694－697.