纤维素酶对茵陈蒿散利胆作用的影响

李艳玲，赵建平

（郑州牧业工程高等专科学校药物工程系，河南 郑州 450011）

近年来，纤维素酶在各个领域应用极为广泛，例如化工、食品及提取天然产物等。然而纤维素酶对中兽药药效方面的影响尚处于初步研究阶段，且主要应用于单味药的研究，在成方的研究方面尚存在空白。本课题把纤维素酶应用于茵陈蒿散，观察纤维素酶对茵陈蒿散利胆作用的影响，并对酶的用量及加酶方式进行了考察。

1 材料

注射器、细塑料插管、结扎线、手术剪、眼科镊、止血钳、手术刀、刻度试管、试管架、烧杯、纱布、天平、粗手套。

药品：20%乌拉坦溶液，生理盐水。样品Ⅱ：1g／mL茵陈蒿＋栀子水煎液；样品Ⅲ：1g／mL茵陈蒿＋大黄水煎液；样品Ⅳ：1g／mL大黄＋栀子水煎液。

动物：家兔20只。

2 方法与结果

2.1 不同加酶方法对茵陈蒿散利胆作用的影响

2.1.1 样品的制备 样品Ⅰ：称茵陈蒿散，加蒸馏水，搅匀；样品Ⅱ：称茵陈蒿散，加4倍量预温45℃的生理盐水，取酶0.2%，加少量温水溶解后，逐渐加入样品中，搅匀，放入45℃恒温培养箱中，于4.0 h后取样，干燥。加蒸馏水搅匀。样品Ⅲ：称茵陈蒿散，取酶0.2%，加少量温水溶解后，逐渐加入样品中，加蒸馏水，搅匀。

2.1.2 方法 取家兔20只，随机分为4组，每组5只，编号、称记体重，按10mL／kg体重灌胃给药，空白组灌胃生理盐水，每天2次，连续给药3d，第4天第1次给药后，腹腔注射乌拉坦溶液5 mL／kg体重，使之麻醉。将家兔背固定于手术板上，腹部正中剪毛后作一2cm切口，从幽门向下找出十二指肠及白色的十二指肠乳头部。在乳头部对面十二指肠壁上剪一开口，将胆汁引流管插入总胆管内，用刻度试管承接滴入的胆汁。待胆汁流出恒定后，每0.5h记录1次胆汁分泌量，记录2h。结果见表1。

表1 不同加酶方法对茵陈蒿散利胆作用的影响

表1显示，茵陈蒿散可以使家兔的胆汁流量增加，和空白组相比，P＜0.05，有显著性差异；体外加酶组和空白组相比，在30min、60min时有显著差异，P＜0.05；在90min、120min均有极显著性差异，P＜0.01，说明加酶后，茵陈蒿散的利胆作用增强；体内加酶组和空白组相比、和不加酶组相比均有极显著性差异，P＜0.01，且体内加酶组和体外加酶组相比也有显著性差异，P＜0.05，说明体内加酶的茵陈蒿散利胆作用要明显优于体外加酶的茵陈蒿散。

2.2 酶的用量对茵陈蒿散利胆作用的影响

样品的制备：样品Ⅰ：称过80目筛的茵陈蒿散，加生理盐水搅匀，使浓度为0.25g／mL。取酶0.1%，加少量温水溶解后，逐渐加入样品中，搅匀。样品Ⅱ：称过80目筛的茵陈蒿散，加生理盐水搅匀，使浓度为0.25g／mL。取酶0.15%，加少量温水溶解后，逐渐加入样品中，搅匀。样品Ⅲ：称过80目筛的茵陈蒿散，加生理盐水搅匀，使浓度为0.25g／mL。取酶0.2%，加少量温水溶解后，逐渐加入样品中，搅匀。样品Ⅳ：称过80目筛的茵陈蒿散，加生理盐水搅匀，使浓度为0.25g／mL。取酶0.25%，加少量温水溶解后，逐渐加入样品中，搅匀。样品Ⅴ：称过80目筛的茵陈蒿散，加生理盐水搅匀，使浓度为0.25g／mL。取酶0.3%，加少量温水溶解后，逐渐加入样品中，搅匀。

方法同2.1.2，结果见表2。

表2 酶的用量对茵陈蒿散利胆作用的影响

当加酶量为0.1%，加酶组和空白组相比胆汁流量虽有一定增多，但没有显著差异；当加酶量为0.15%时，加酶组和空白组相比胆汁流量有显著差异，P＜0.05；当加酶量为0.2%、0.25%、0.3%时，和空白组相比均有极显著性差异，P＜0.01；但这3组加酶组相比没有显著性差异。

2.3 不同剂量对茵陈蒿散利胆作用的影响 称茵陈蒿散，加生理盐水，搅匀，使浓度为0.25g／mL，取酶0.2%，加少量温水溶解后，逐渐加入茵陈蒿散中，分别按10mL／kg体重、6.7mL／kg体重、5mL／kg体重灌胃给药，不加酶组按10mL／kg体重灌胃给药，其余方法同2.1.2，结果见表3。

表3 不同剂量对茵陈蒿散利胆作用的影响

从表3可以看出，加酶组的1／2剂量组和空白组相比，虽然可以增加家兔胆汁的流量，但二者相比没有显著差异，而加酶组的2／3剂量组和不加酶组的全剂量组对家兔胆汁流量的影响相当，均能使家兔的胆汁流量增加40%左右。

3 讨论

茵陈蒿散始载于 《伤寒论》，由茵陈、栀子、大黄组成，具有清热利湿、利胆退黄的作用，在兽医临床的应用非常广泛。茵陈蒿散中的3味药均是植物药，构成植物药细胞壁的主要成分是纤维素，而纤维素是由β－D－葡萄糖以1，4－β葡萄糖苷键连接，用纤维素酶酶解可以破坏β－D葡萄糖苷键，使纤维素降解成还原糖从而破坏植物药的细胞壁，有利于对有效成分的提取。

表1结果表明，用纤维素酶处理过的茵陈蒿散的利胆作用均优于不加酶者，说明纤维素酶可以酶解细胞壁，促进茵陈蒿散中有效成分的溶出，从而增强其利胆作用。对比两种不同的加酶方法可以看出，体内加酶的方式对茵陈蒿散的影响要强于体外加酶的方式，说明纤维素酶在体内发挥酶解茵陈、栀子、大黄细胞壁的作用要强于在体外作用，可能和机体的内环境更有利于纤维素酶活性的发挥有关。

表2结果表明，酶的用量会影响茵陈蒿散的利胆作用，但并不是酶量越多越好，这主要是因为在一定条件下，纤维素分子能和酶分子结合的点数有限，当这些结合点全部被纤维素酶分子占据后，再增加纤维素酶的量，起不到酶解的作用。

表3结果表明，茵陈蒿散加酶组的2／3剂量组和不加酶组的全剂量组对家兔胆汁流量的影响相当，即加活力为2000U／g的纤维素酶0.2%可以节约1／3药材。

从本试验结果可以看出，把一定量的纤维素酶以添加剂的形式随药物喂入动物体内，借助于动物消化道内环境和自身能源酶同时发挥作用，能大大提高茵陈蒿散的药理作用，节约原药材。

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