不同精子密度仪测定猪精子密度的准确性比对试验

魏文栋，张 亮*，张 伟

（1.重庆市畜牧科学院，农业部养猪科学重点实验室，重庆 402460；2.重庆隆生农业发展有限公司，重庆 401120）

2009年至今，中央每年安排至少6.25亿元项目资金，对26个省（区、市）及大连、青岛、黑龙江农垦和广东农垦的400个生猪人工授精普及率30%以上、技术服务网络比较健全、能繁母猪存栏2万头以上的县（区、农场），补贴1650万头能繁母猪，支持开展猪人工授精工作。各地纷纷建立猪人工授精站，使得优秀公猪的基因能够被迅速地推广，同时也使得猪人工授精技术的发展取得了长足的进步。但是由于许多猪场对猪精子密度的测定多采取目测估计的方法，生产出来的精液产品质量不稳定，严重地影响了母猪的繁殖效率[1]。

所以我们就目前使用较多的进口的精液密度仪minitube SDM1[2]（图1）、国产的721分光光度计（图2）以及血细胞计数板（图3）手工计数法测定精液密度的结果进行比较，希望对广大从事猪鲜精生产的工作者的实际工作能有所帮助。

1 材料与方法

试验于2012年7月12～30日在重庆市畜牧科学院养猪研究所育种猪场进行，试验期间公猪舍温度为25 ℃左右。试验中分别用3种方法对8头公猪的18份精液样品进行密度测定。

图1 minitube SDM1

图2 分光光度计

1.1 精液采集

采用手握法进行采精，使用保温杯收集精液。采集精液时用3～4层过滤纸滤除精液中的胶质等杂质，过滤的精液保存在集精杯中。

1.2 精液密度测定

采精后用minitube SDM1、分光光度计[3]以及手工计数法3种方法测定公猪精液密度，每种方法测定3次，并记录其密度值。

图3 血细胞计数板

1.3 数据处理

数据在excell 2010中进行准确性和精确性比较，然后在SPSS 17.0中进行配对样本T检验，比较不同仪器测定结果与方法的相关性和差异。

2 结果与分析

从图4可见Minitube SDM1和分光光度计测定精液的结果与手工计数法测定结果相比都偏大，且分光光度计的测定结果较大。

2.1 不同测定仪器的准确性和精确性比较

图4 3种方法测定的精液密度分析

表1 不同检测方法检测结果相关性

表2 配对T检验结果

对不同仪器3次测定结果的标准差求平均值即对2种仪器的精确性作出判断。Minitube SDM1与分光光度计测定精子密度的标准差分别为0.115和0.266，所以用Minitube SDM1测定精子密度的精确性高于分光光度计。

在精液密度检测的方法中手工计数法被认为是金标准，所以我们在本次试验中将手工计数法得到的结果看作真实值。将这2种仪器的测定结果与真实值之差求绝对值后，再求平均值，即可估计出该方法与真实值的接近程度。Minitube SDM1 与 分光光度计 的|x-μ|均值分别为0.73（亿/mL）和1.32（亿/mL），所以用Minitube SDM1测定精子密度的准确性高于分光光度计。

2.2 配对样本的相关性

从表1表明2种检测方法与手工计数的检测结果都有极显著的相关性（P<0.01），而其中分光光度法与手工计数法测出的结果有更高的相关性。

2.3 配对T检验结果

如表2所示，用Minitube SDM1和分光光度计的测定结果分别与手工计数法的测定结果进行配对T检验，其T值分别为2.51和5.562，且mintibe SDM1的P值均小于0.05却大于0.01，而分光光度计的P值小于0.01。故mintibe SDM1测定结果与手工计数法的测定结果存在显著差异，而和分光光度计测定结果与手工计数法的测定结果存在极显著差异。

3 结论与讨论

本实验所用的2种仪器测定精子密度的原理都是利用精液光度值与空白液体光度值的比值来估计样品中的精子密度[4]，故精液中杂质的存在同样会使精液对光的通透性降低从而使得精子密度被过高地估计，这与我们得到的这2种仪器测定猪精子密度偏高的试验结果相符。另外，我们发现当样品中精子密度超过800万/mL或小于100万/mL时，Minitube SDM1会报36和35错误，也就是说Minitube SDM1测定的范围为100万～800万/mL，所以在精液太浓或太稀的情况下不适合使用Minitube SDM1来测定精子密度。

虽然Minitube SDM1和分光光度计测定精子密度的原理相同，但前者的精确性和准确性都高于分光光度计的测定结果。这可能由于分光光度计测量精子密度是根据光度值和精子密度的对应关系来估计精子密度，精子样本容量以及精液取样的误差都对测定结果产生直接的影响。配对T检验的结果表明这两种仪器与手工计数法的测定结果均存在显著差异，那么这2种仪器的测定结果最好作为精子密度测定的参考值。

而在猪人工授精的实践中，在大型的人工授精站中每天有大量精液样品需要测定的情况下，可以发挥Mnitube SDM1操作简单、测定迅速的优点，在稀释过程中适当减少稀释倍数，使得精子数量达到输精要求。然而Mnitube SDM1的耗材价格较高且不可重复使用，这是制约该仪器无法广泛应用的主要因素。而对于规模较小的人工授精站或场内人工授精站，在检测样品数量较少的情况下，可以使用手工计数法，能够得到更准确的测定结果。

[1] 王佳辉，高圣明，唐玲玲，等.应用种公猪精子密度图片估算精子数方法的研究[J].养殖技术顾问，2010(5):211-212.

[2] Mario Baracaldo， Jim Ward，温鹏，等.稀释公猪精液的品质控制[J].今日养猪业， 2009(3):31-34.

[3] 张亮，郭宗义，潘红梅，等.分光光度法快速测算公猪精子密度的研究[J].广东农业科学，2012，5（39）：103-105.

[4] 张涛，张龙珍，庄平，等.分光光度法测定俄罗斯鲟精子密度标准的研究[J].海洋渔业，2009，31(1):87-91.