规模化猪场常见传染病的样品采集方法

代洪波，林 艳，周远成，吴江江,朱 玲

（四川农业大学动物医学院，四川 雅安 625014）

实验室检测与分析主要针对动物的传染性疾病。动物传染病是危害养殖业最严重的一类疾病，它不仅可能造成动物大批死亡，而且某些人兽共患传染病还能给人类健康带来严重威胁。随着我国规模化养殖的不断发展，饲养高度集中，一旦暴发传染病将会造成严重经济损失。因此，做好规模化养殖场传染病检疫与监测至关重要。样品采集是传染病检疫与检测的重要环节之一，关系到传染病检测的准确性与检测效率，本文就规模化猪场常见传染病的样品采集做一简要概述。

1 流行病学调查

当规模化养猪场发现可疑传染性疾病病例后，应及时隔离病猪。调查登记发病年龄、发病时间、发病率、死亡率、主要症状、用药情况以及疫苗免疫情况等，将调查情况随病料一起送检，便于综合分析。

2 不同疾病样品采集

病猪剖检前应充分了解病史，对于可能的人兽共患传染病应谨慎处理，做好个人防护工作，并及时向相关防疫部门报告。选择合适场所进行病猪剖检，避免病原污染扩大，病猪尸体需做无害化处理。优先选取未大量使用药物治疗的病危猪进行剖检，病死猪最好在死后6 h以内进行剖检。

2.1 呼吸道疾病样品采集

引起猪呼吸道疾病的主要传染性疾病有猪繁殖与呼吸综合征（蓝耳病）、猪流感、猪伪狂犬病、猪巴氏杆菌病（猪肺疫）、猪支原体肺炎（喘气病）、猪传染性胸膜肺炎、副猪嗜血杆菌病、猪萎缩性鼻炎等。

图1 采集病猪血液

肺脏是呼吸道疾病检测的主要病料，也是呼吸道疾病实验室检测的最佳病料。[1]猪呼吸道疾病的病原主要通过感染猪的肺脏，引起病猪肺脏炎症、坏死等病变，进而导致呼吸困难等。肺脏是猪呼吸道疾病病原繁殖的主要场所，例如猪蓝耳病病毒、猪伪狂犬病病毒主要侵袭肺泡巨噬细胞，病毒在肺脏的组织细胞内繁殖致病；细菌病原进入肺脏以后，可以吸附并寄生在呼吸道黏膜上，在猪的气管、支气管中大量繁殖，导致肺脏炎症、坏死等。因此采集肺脏可以有效检测出引起呼吸道疾病的病毒、细菌等病原微生物。此外，还可以用无菌棉签采集发病猪鼻腔分泌物，以含10%甘油的生理盐水保存，鼻腔拭子仅能够检测出部分病原，检出率与准确性不如肺脏样品；[2]发热期病猪，可以采集病猪全血样品（抗凝血采集静脉血或采血后剧烈震荡破坏凝血）用于实验室病原检测，全血样品并不能全面分析引起呼吸道疾病的所有病原，仅能检出引起病毒血症与菌血症的病原。

病毒检测的病料需低温冷冻保存，细菌检测病料建议4 ℃保存；如果怀疑有副猪嗜血杆菌或猪传染性胸膜肺炎放线杆菌等分离难度较大的细菌病原，病料最好在12 h以内送实验室进行病原分离，能有效提高检出率。

2.2 腹泻性疾病样品采集

腹泻性疾病主要包括猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻、猪轮状病毒感染、猪瘟、大肠杆菌引起的仔猪黄白痢、仔猪水肿病、沙门氏菌引起的仔猪副伤寒、螺旋体引起的猪痢疾、魏氏梭菌引起仔猪红痢等。

病毒性腹泻主要选用肠内容物、肠黏膜与肠系膜淋巴结进行病原检测，引起腹泻的病毒主要感染肠绒毛上皮细胞，并在肠绒毛中进行增殖。大量病毒随着肠绒毛破坏脱落等，释放至肠内容物中，同时肠上皮细胞破损，病毒可以进入毛细血管，引起肠系膜淋巴结等组织病变。因此，主要选用肠系膜淋巴结、肠黏膜或肠内容物进行实验室病原检测。细菌病原引起的腹泻，主要选用病变部位肠内容物或小肠内容物进行病原菌的分离；腹泻病猪常伴有胃、肠黏膜受损，病原菌容易进入血液循环引起菌血症，常选用肝脏进行病原菌的分离；仔猪水肿病引起仔猪胃黏膜水肿，一般选取病猪胃进行病原菌分离。胃、肠采样前，应先在断端作结扎处理。

2.3 神经症状疾病样品采集

引起猪神经症状的主要疾病包括猪伪狂犬病、流行性乙型脑炎、猪链球菌病、李氏杆菌病、仔猪水肿病、猪丹毒等。

猪伪狂犬病病毒与乙型脑炎病毒主要通过感染病猪脑组织引起神经症状，患猪脑组织是检测神经症状病毒的最佳病料；伪狂犬病病毒还在扁桃体、肺脏等组织中大量存在，乙型脑炎病毒感染还可以选取发热期病猪血液进行病原检测。猪链球菌病、李氏杆菌病、仔猪水肿病等引起神经症状需要病原菌进入血液引起菌血症或毒血症。因此，主要选取发病动物肝脏、脾脏等进行病原菌分离。

2.4 其他疾病样品采集

专嗜性传染病或以侵害某种器官为主的传染病，采集该病侵害的主要器官组织，例如猪瘟引起病猪脾脏梗死，病毒在脾脏中含量较高；口蹄疫、猪水疱病则采集口、蹄部的疱皮和水疱液；猪的皮肤病，例如渗出性皮炎等可以选取坏死皮肤或皮肤结痂部位进行病原检测；呈现流产症状的传染病，例如猪细小病毒病、布氏杆菌病等，则采取流产胎儿和胎衣；引起皮肤充血、出血症状的猪传染病，例如猪瘟、猪圆环病毒2型感染、猪巴氏杆菌病等，应采集病猪体表淋巴结与各内脏器官进行实验室全面分析。提不出怀疑对象时，则采全身各脏器组织与体表淋巴结；对怀疑为中毒性疾病时，应采集喂食的饲料、饮水等，以及胃内容物。

3 规模化猪场抗体与主要病原监测采样

抗体检测主要用于评价疫苗免疫效果；部分抗体检测例如伪狂犬病gE抗体检测，可以用以监测猪场伪狂犬病野毒感染情况。抗体检测应采集猪前腔静脉或耳缘静脉血，采血后容器中应留有一定空隙（利于血清析出），常温或37 ℃倾斜30～45°角放置30 min至1 h使其凝血，再4 ℃放置6～12 h析出血清。抗体检测血样应避免剧烈震荡，分离血清以前应避免0 ℃以下冷冻，剧烈震荡与冷冻将导致红细胞破裂，溶血会对抗体检测产生一定影响。[4]

图2 用无菌棉签采集发病猪鼻腔分泌物

抗体检测采样时间应结合猪群疫苗免疫时间而定，评价免疫效果最好在疫苗免疫20 d以后采样。母源抗体随着仔猪日龄递减，不同日龄仔猪抗体水平各不相同，评价仔猪母源抗体应分年龄段采血检测分析。

猪场引种或定期病原检测，需要对猪群进行活体采样进行实验室病原检测。活体采样一般采集扁桃体、鼻腔分泌物、血液、公猪精液等。扁桃体用于病原监测比较可靠但采样难度较大，需要专门工具进行样品采集；鼻腔分泌物与血液仅对部分病原可行，并且准确率不如扁桃体高。

4 病料的送检

对送检的病料，应在容器上编号，做好记录，并附详细流行病学调查记录。对送检的病料应包装安全稳妥。一般情况下，微生物学检查材料都怕受热，应冷藏包装送检。病料包装好后，应尽快送达检验单位，短途或危险材料应派专人直接送达，远途可以空运。

[1] 陈溥言. 兽医传染病学[M].5版.北京:中国农业出版社,2006.

[2] Straw B E，赵德明，张仲秋，等.猪病学[M].9版.北京:中国农业大学出版社,2008.

[3] 张慧勤，李钊，吴瑞栓，等.采集猪疫病监测样品的方法和注意事项[J].中国兽医文摘，2009（3）:61-62.

[4] 朱义霞，李红燕，苗莲叶.怎样采集病猪样品送检[J].河南畜牧兽医，2002，12(23): 35.