血、尿β2－微球蛋白在高盐高血压大鼠早期肾损害诊断中的意义

陈景彦 范洪亮 张树峰 (华北煤炭医学院，河北 唐山 063000)

众所周知，高盐可引起高血压，而高血压常引起严重的心、脑、肾损害，一般持续5年以上的高血压患者大多出现不同程度的肾损伤〔1〕。由于在肾损害的早期，患者没有明显的症状，即使发展到相当严重的阶段，症状也不明显，常单纯用血清肌酐和尿素氮来评估高血压患者的肾功能状态，最后导致诊断的延迟〔2〕。目前大多数文献报道认为，血、尿β2－MG是诊断原发性高血压早期肾损害的敏感指标〔3〕。本文旨在进一步比较血、尿β2－MG诊断高血压早期肾损害的敏感性。

1 资料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 3周龄雄性Wistar大鼠180只，体重40～60 g，SPF级，由天津市山川红实验动物科技有限公司提供，动物合格证号:SCXK(津)2009－001。

1.1.2 仪器及试剂 BP－6动物套尾无创血压仪(成都泰盟科技有限公司);低温离心机、代谢笼、JA1003型精密天平、日立7180全自动生化分析仪;FT－630G放免仪(北京核仪器厂);尿β2－MG放射免疫分析药盒(北京原子高科股份有限公司)。

1.1.3 药物 中药饮片(承德医药集团责任有限公司，批号0712002);缬沙坦(北京诺华制药有限公司生产，批号X0796)。

1.2 方法

1.2.1 动物模型制备 根据预实验结果，高盐造成高血压的周期长，并且成模率低，故用3周龄雄性Wistar大鼠180只，选取尿蛋白和尿红细胞均为阴性者作为观察对象，预留10只作为正常对照组，其余170只通过连续22 w 8%高盐饲料自然饲养，并从喂养第8周开始每周一次进行血压测量。在喂养第18～22周时进行血压达标(SBP＞130 mmHg)筛选(用鼠尾动脉测压仪测清醒状态下大鼠的血压)。模型筛选方法:(1)从血压已达标的大鼠中随机抽出10只取肾组织行病理切片观察，尚未发现病理改变者;(2)在大鼠分组前，每3 d测1次血压，连测3次，每次每只大鼠测3遍，血压均＞130 mmHg为造模成功。最后选用40只成模大鼠行8 w干预措施。

1.2.2 分组 从造模成功的大鼠中筛选40只，根据血压值随机分为模型组、缬沙坦组、中药高剂量组、中药中剂量组，每组各10只，加上预留的10只正常组，共50只。

1.2.3 给药方法 正常组:普通饲料，灌蒸馏水;模型组:灌蒸馏水;缬沙坦组:予缬沙坦14.4 mg·kg－1·d－1(研磨，蒸馏水溶解;成人剂量的10倍);泽泻汤加味方高剂量组:予中药饮片16.2 g·kg－1·d－1(含生药为 0.81 g/ml，成人剂量的 15 倍);泽泻汤加味方中剂量组:予中药饮片10.8 g·kg－1·d－1(含生药为0.54 g/ml，成人剂量的10倍)。所有实验大鼠灌胃8 w;除正常对照组外，其余各组大鼠继续8%高盐饲料喂养8 w。

1.2.4 血压测量 采用无创性套尾法测定清醒大鼠收缩压(SBP)，每次测量时记录3次，取其平均值。测定前大鼠在38℃恒温箱内预热15 min，使尾部血管充分扩张，便于准确测量。给药前(0 w)、2 w、4 w、8 w各测一次血压，每次服药后2 h开始测量。

1.2.5 血液指标检测 治疗8 w后，用10%水合氯醛腹腔内给药麻醉，目内眦取血约 3 ml，放入肝素钠管中，离心(4000 r/min，5 min)取血浆，放置 －80℃冰箱备用。用日立7180全自动生化分析仪检测血BUN、血Crea、血β2-MG。

1.2.6 尿中指标检测 在治疗8 w后，将每只大鼠分别置于代谢笼中，收集24 h尿量(自由饮水、禁食)。尿β2-MG用放免仪检测。

1.2.7 取材 干预8 w末，10%水合氯醛腹腔麻醉，并取每只大鼠的双肾置电子天平称重，然后把肾组织放入10%甲醛溶液固定保存(石蜡切片备用)。

1.2.8 光镜观察肾脏组织病理学变化 将10%甲醛固定好的肾脏，经酒精梯度脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察肾脏组织形态学改变。

1.3 统计学分析 采用SPSS16.0统计软件。计量资料用±s表示，多组间比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 各组实验大鼠干预8 w后，血β2-MG、尿β2-MG的变化缬沙坦组、中药中剂量组、中药高剂量组、模型组与正常组比，血β2-MG无显著性差异(P＞0.05)。正常组与模型组比，尿β2-MG降低，有显著性差异(P＜0.05);中药中剂量组与模型组比，尿β2-MG降低，有显著性差异(P＜0.05);缬沙坦组、中药高剂量组与模型组比，尿β2-MG有所降低，但无显著性差异(P＞0.05)。见表1。

2.2 各组实验大鼠干预8 w后，血BUN、血Crea的变化 缬沙坦组、中药中剂量组、中药高剂量组、模型组与正常组比，血BUN升高，均有非常显著性差异(P＜0.01)。缬沙坦组、中药中剂量组、中药高剂量组、模型组与正常组比，血Crea无显著性差异(P＞0.05)。见表2。

表1 各组大鼠相应干预8 w后，血、尿β2-MG水平的变化( ± s，n=10，mg/L)

表1 各组大鼠相应干预8 w后，血、尿β2-MG水平的变化( ± s，n=10，mg/L)

与模型对照组比较:1)P＜0.05

-MG正常对照组 0.120±0.04216 0.116±0.1031)组别 血β2-MG 尿β2模型对照组 0.120±0.06325 0.226±0.164缬沙坦组 0.140±0.05164 0.153±0.113中药高剂量组 0.100±0.06667 0.154±0.095中药中剂量组 0.120±0.06325 0.119±0.1041)

表2 各组大鼠相应干预8 w后，血BUN、血Crea的变化( ± s，n=10)

表2 各组大鼠相应干预8 w后，血BUN、血Crea的变化( ± s，n=10)

与正常对照组比较:1)P＜0.01

组别 BUN(mmol/L) Crea(μmol/L)7.614±1.12928 36.800±10.37947模型对照组 12.407±1.718761) 35.300±5.27152缬沙坦组 11.972±3.108551) 32.600±7.57481中药高剂量组 11.989±2.465441) 32.000±4.73756中药中剂量组 11.754±1.692441)正常对照组35.000±6.59966

3 讨论

β2-MG是由100个氨基酸残基组成的单链多肽，分子量为11800，人体内几乎所有有核细胞都能合成。它存在于淋巴细胞表面，白细胞、血小板、上皮细胞和间质细胞膜上，同时存在于血清、脑脊液、尿液等体液中。它主要有人体淋巴细胞产生，所以当人体淋巴细胞被激活时，合成β2-MG明显增多，在细胞损伤时，便以游离的形式释放于体液中。正常人体内β2-MG含量较为恒定，在通过肾脏循环时经肾小球滤过并由肾小管重吸收和降解，是反映肾脏功能的较理想的内物质〔4～6〕。当肾小球滤过功能下降时，血β2-MG水平上升，故血β2-MG是测定肾小球滤过功能减退的一个极好标志;尿β2-MG绝大部分在近端小管被重吸收，故尿中含量极微，如血中含量正常，尿中含量增多，则说明近端肾小管重吸收功能受损〔7〕。目前，许多研究已经证实:血BUN、血Crea是反映中晚期肾功能损害的指标;Viberti〔8〕的研究表明，Crea出现异常时，肾小球滤过率已低于50 ml/min，而肾小球滤过率＞80 ml/min时，β2-MG即开始出现异常。本实验结果显示:(1)在高盐高血压大鼠肾损害的早期，尿β2-MG有明显升高，但是血β2-MG无明显变化。(2)在高盐高血压大鼠肾损害的早期，血BUN、血Crea无明显改变;缬沙坦组、中药中剂量组、中药高剂量组、模型组的血BUN升高可能与进食高盐有关。提示尿β2-MG对高盐高血压大鼠早期肾损害的诊断比血β2-MG特异性强。研究证实〔2〕，高血压肾损害时，肾小管损伤出现时间明显早于肾小球损伤，且程度亦较重。临床上，原发性高血压肾损害最早出现肾小管功能障碍，也佐证了这一观点。

总之，对高盐高血压大鼠早期肾损害的诊断，尿β2-MG比血β2-MG更敏感;并且尿β2-MG较常规的肾功能检查能更早地发现肾功能的异常改变，从而为临床诊断原发性高血压早期肾损害提供可靠的检测手段。

1 张 昱，张 秋，王洪霞.中医药治疗高血压肾损害的研究进展〔J〕.世界中西医结合杂志，2010;5(6):549-51.

2 黎磊石，刘志红.中国肾脏病学上册〔M〕.北京:人民军医出版社，2008:829，846.

3 郭增玉，李全瑞.血尿β2-微球蛋白与老年高血压肾损害的关系〔J〕.中国临床医生杂志，2007;35(12):27-8.

4 Shinkai S，Chaves PH，Fujiwara，Y，et al.Beta2-microglobulin for risk stratification of total mortality in the elderly population:comparison with cystatin C and C-reactive protein〔J〕.Arch Intern Med，2008;168(2):200-6.

5 蔡铁铁，冯改涛.肾脏疾病中血清β2-MG的意义〔J〕.内蒙古医学杂志，2007;8:989.

6 Ikee R，Kobayashi S，Hemmi N，et al.Involvement of transglutaminase-2 in pathological changes in renal disease〔J〕.Nephron Clin Pract，2007;105(3):c139-46.

7 王海燕.肾脏病学〔M〕.第2版.北京:人民卫生出版社，1995:322-4.

8 Viberti GC.Beta2-microglobulin:a sensitive index of diminishing renal function in diabetics〔J〕.Br Med J，2002;282(6258):58.