湿证患者外周血TCRVβ亚家族表达及意义探讨

项 婷 林佑武* 张诗军 陈泽雄 孙保国 胡 斌

（1 中山大学附属第一医院，广东 广州 510080；2 中山大学达安基因诊断中心，广东 广州 510080）

湿证是临床常见证候，随着气候环境、生活方式等的变化，“新”的致病因素、“新”的疾病不断出现，其中不乏与湿证相关的“新”的疾病，如SARS、禽流感等疾病[1]。我们通过采用FQ-PCR技术检测湿证患者外周血T淋巴细胞受体β链V区（TCRVβ）基因亚家族的表达， 以及采用化湿法治疗后的变化，以TCRVβ亚家族的表达为切入点从免疫识别的角度来探讨湿证病机的“蒙蔽性”特点，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

2例湿证患者均来自中山大学附属第一医院中医科门诊，男性2例，年龄分别为25岁，36 岁，正常对照组1例，为男性，29岁。

1.2 样本收集标准

①湿证的诊断标准参照《中医证候规范》[2]一书中的湿证相关诊断标准。②健康对照者来自健康体检者，无特殊不适，检查三大常规、肝肾功能 、肿瘤标志物检测、病毒标志物检测均正常。

1.3 治疗方法

对湿证患者进行化湿治疗（藿朴夏苓汤加减），疗程半年，治疗前后抽血备检，同时对健康对照组抽血备检。组成：白蔻仁 10g ，川朴12g，茯苓15g，猪苓15g，泽泻9g，杏仁9g，苡仁9g，藿香12g，法半夏15g，淡豆豉3g。服药方法：每次100ml，3次/日。

1.4 观察指标

1.4.1 症状、体征改善情况

主要观察脘闷腹胀，头重身肢困倦，口粘淡或甜腻，饮食减少，面色淡黄垢浊，口渴不欲饮或喜热饮，大便溏泄等主要症状和舌苔白厚腻等体征变化，根据主要症状、体征轻重程度—轻(+)、中(++)、重(+++)评估。

1.4.2 TCRV β 基因表达的检测

荧光定量PCR检测TCRVβ表达[3]。

2 结 果

2.1 症状、体征变化情况

2例湿证患者治疗前后症状、体征变化比较，治疗后主症全部消失，主舌、主脉、或见症都有明显改善。2例湿证患者治疗后，按照湿证诊断标准均为非湿证者。见表1。

表1 治疗前后症状、体征变化比较

2.2 TCRVβ亚家族表达水平变化情况（数值结果）

2例湿证患者治疗前较正常对照组TCRVβ表达均低下的亚家族是TCRVβ4、TCRVβ5.1、TCRVβ8、TCRVβ14、TCRVβ21.1、TCRVβ21.3、TCRVβ23；2例治疗前较正常对照组TCRVβ表达均偏高的亚家族是TCRVβ3、TCRVβ16、TCRVβ18、TCRVβ24。2例治疗前TCRVβ表达均偏低，经治疗后表达均升高的亚家族是TCRVβ4、TCRVβ14、TCRVβ21.3、TCRVβ23；2例治疗前TCRVβ表达均偏高，经治疗后表达均降低的亚家族是TCRVβ3和TCRVβ18。见表2。

表2 治疗前与正常组比较

3 讨 论

虽然现代医学对TCRVβ基因谱系与某些疾病发生发展的相关性的研究也越来越受重视，但主要集中于对某一疾病相关的病原体或其代谢产物、或某一相关抗原的识别上，而对多种致病因素的条件下其变化如何则研究很少，如湿证所包含的可能不仅仅是某一组病原体或某一相关抗原的分子模式，还可能包括几组病原体或多种相关抗原所公有的分子模式。

我们以前的研究发现湿证患者细胞免疫功能降低，特别是慢性乙型肝炎湿证患者激活和功能T淋巴细胞亚群水平紊乱，以及 T细胞受体可变区β7（TCRVβ7）表达低下与T细胞免疫功能障碍密切相关，导致了病情的迁延发展，经化湿法治疗后湿证不同程度减轻，部分HBV-DNA、HBeAg阴转且肝功能水平正常的患者TCRVβ7基因表达明显增强、功能T淋巴细胞亚群水平明显升高，提示优势克隆参与HBV的清除及细胞毒作用，化湿法清除病毒的疗效，可能与其提高T细胞受体识别功能和功能T淋巴细胞亚群水平有关，因此有必要从免疫识别角度深入开展湿邪致病机理的研究[3,4]。

本研究发现，在湿证患者TCRVβ亚家族表达中，TCRVβ4、TCRVβ5.1、TCRVβ8、TCRVβ14、TCRVβ21.1、TCRVβ21.3、TCRVβ23表达低下，TCRVβ3、TCRVβ16、TCRVβ18、TCRVβ24表达偏高；经化湿治疗后表达上调的亚家族是TCRVβ4、TCRVβ14、TCRVβ21.3、TCRVβ23，表达降低的亚家族是TCRVβ3和TCRVβ18，提示湿证患者TCR Vβ谱系表达紊乱，经化湿治疗后，TCR Vβ谱系不同程度上得以调节，提示化湿中药对湿证患者可能通过调节TCR Vβ的表达，改善免疫识别，激活有效免疫反应来清除外来邪气。

综上所述，TCR Vβ的表达异常可能是湿邪的“蒙蔽性”所致， 进而导致湿邪致病患者免疫功能障碍。通过祛湿治疗之后， 湿邪的“蒙蔽性”逐渐减轻或消退， TCR Vβ的表达得以改善，激活细胞免疫功能而驱邪外出。由于湿证包含的分子模式的多样性和湿证TCRVβ谱系表达的复杂多变性，以及本研究的例数尚少，有必要在今后的研究中采用病证结合等方式来分层研究湿证TCRVβ谱系表达，揭示湿邪致病的“蒙蔽性”特点。

[1]张明雪,曹洪欣,翁维良,等.论湿邪在SARS发病中的作用[J].中医药学刊,2006,24(5):773-776.

[2]邓铁涛,邓中炎,罗益宽.中医证候规范[M].广东:广东科技出版社,1990:145-146.

[3]董霄,林佑武,张诗军.慢性乙型肝炎湿证患者外周血TCRVβ亚家族谱系表达及意义探讨[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(10):179-182.

[4]张诗军,陈泽雄,林佑武,等..化湿中药对慢性乙型肝炎湿证患者激活和功能T淋巴细胞亚群水平的影响[J].中国中西医结合杂志,2006,26(12):1078-1081.