血管内皮生长因子在喉癌中的表达及其与血管生成和转移的相关性

任光辉 董 朝 耿中利 李鸿涛 马斌林

(新疆医科大学附属肿瘤医院乳腺头颈外科，新疆 乌鲁木齐 830011)

已有研究表明，几乎所有实体肿瘤的生长和转移均依赖于肿瘤的血管生成。肿瘤血管形成受许多因素的调节，其中具有重要实际意义的是血管内皮细胞生长因子(VEGF)。绝大多数恶性肿瘤中，VEGF呈高表达，促进内皮细胞分裂、增殖，诱导血管新生，并直接作用于肿瘤细胞刺激其生长〔1〕。本文对我院诊治的喉癌患者检测VEGF及微血管密度(MVD)表达情况，探讨其在喉癌发生、发展中的作用及临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 病例组50例喉癌患者来自我院2006年6月至2009年6月住院患者，男28例，女22例，年龄50～82〔平均(61.4±10.9)〕岁。所有病例均经病理确诊，依据TNM临床分期，Ⅰ～Ⅱ期21例，Ⅲ～Ⅳ期29例。根据病理中淋巴结转移与否分为转移组与未转移组，转移组26例，未转移组24例。20例对照来自我院声带息肉患者，男12例，女8例，年龄48～81〔平均(61.5±12.1)〕岁。两组性别、年龄无统计学意义。

1.2 方法

1.2.1 试剂与方法 一抗鼠CD34单抗、兔VEGF多抗及即用型SABC试剂盒为武汉博士德生物工程有限公司生产。严格按试剂盒说明书操作，采用免疫组化SABC法检测，VEGF工作浓度为1∶150稀释，CD34工作浓度为1∶50稀释，PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性喉癌切片作为阳性对照。

1.2.2 结果判定 VEGF判定:随机以200倍视野下计数染成棕黄色的肿瘤细胞数占整个肿瘤细胞的比例，至少计数5个视野，1 000个肿瘤细胞。VEGF的表达强度分为0～3级，阳性细胞数 ＜10%计为0，10% ～25%为1，25% ～50%为2，＞50%为3。MVD计数:CD34抗体显示MVD，凡是被抗体染成棕黄色或棕褐色的内皮细胞或细胞簇作为一个微血管计数，即先在低倍镜下寻找瘤内微血管密集区，选取5个血管丰富的视野，于200倍视野内计数，取平均值，即为MVD。

1.3 统计学方法 应用SPSS12.0统计软件进行分析，计量资料用±s表示，计数资料以%表示，相关性分析用非参数检验的Pearson相关系数计算。

2 结果

2.1 两组中VEGF及MVD的表达情况 50例喉癌组织中VEGF表达阳性例数为31例(62%)明显高于对照组阳性例数〔5例(20%)，P＜0.01〕。喉癌组织MVD表达值亦高于对照组〔(22.35±2.1)vs(9.1±3.1)，P ＜0.01〕。Pearson相关分析结果显示，喉癌患者VEGF水平与癌组织中MVD呈明显正相关(r=0.729，P=0.005)。

2.2 VEGF阳性表达与喉癌临床病理参数的关系 VEGF阳性表达率与TNM分期及颈淋巴结转移有关。随临床分期的进展，VEGF表达率增高;且在有淋巴结转移组高于无淋巴结转移组，两者比较有统计学差异(P＜0.01)。见表1。

表1 VEGF阳性表达率与喉癌临床病理参数的关系(n)

3 讨论

恶性肿瘤可呈现出无限制的生长、增殖和侵袭的特点，这一切都依赖于建立更多的血管网络供给大量的营养物质，并带走更多的代谢产物，其中VEGF在肿瘤血管生成中发挥着重要作用〔2，3〕。本组结果说明 VEGF在喉癌发生中起重要作用。VEGF是一个分子量为34～35 kD的高度糖基化的碱性蛋白，由分子量为17～22 kD的同源双聚体构成。人体的许多组织可检测到VEGF的表达，VEGF在肿瘤细胞株中的表达也很普遍，目前已肯定的有胃肠道原发腺瘤、喉癌、肾癌、乳腺癌、肺癌、黑色素瘤等。研究表明，肿瘤生长到1～2 mm3时，必须有新生血管的形成，才能保证其快速生长〔4，5〕。VEGF生物学功能主要有:(1)促进血管形成。作为特异内皮细胞分裂素，能直接促进内皮细胞分裂，增殖，体外促进细胞生长，并可诱导血管增生。(2)增加血管通透性。(3)增加组织因子的产生，可直接改变内皮细胞基因表达，促进细胞浸润，有利于血管形成。肿瘤新生血管有重要作用:(1)输送氧气、营养，转运代谢产物，满足肿瘤组织无限生长的需要。(2)内皮细胞本身对肿瘤细胞有旁分泌刺激作用，产生生长因子、细胞因子促进肿瘤细胞生长转移。(3)肿瘤的血管化使癌细胞易于接近血管系统，并且肿瘤血管的结构缺陷更有利于肿瘤的血管播撒。VEGF可能通过促进喉癌新生血管及淋巴管的增生、提高血管的渗透性等机制促进癌组织的发展和转移〔6〕。恶性肿瘤转移很少发生在血管新生之前，肿瘤的转移及其在转移部位的生长也依赖肿瘤组织的血管新生。肿瘤血管生成分前血管期与血管期，缺乏血液供应的肿瘤细胞主要靠弥散供氧，其体积一般不会超过1～2 mm3，可存在数月至数年而不发生转移，一旦其获得血供则迅速生长并发生转移。

肿瘤的生长和转移受多种因素的影响，其中肿瘤内MVD是影响肿瘤生物学特征的重要因素之一。近年来，人们已经发现肿瘤内的血管形成程度与肿瘤的临床病理特征和预后有密切的关系。MVD是利用针对血管内皮细胞抗原的免疫组化技术对肿瘤血管进行定量，可直接量化反映肿瘤血管生成的程度。MVD指切片中血管“热点”区在1个200倍视野下的血管数目。一般认为肿瘤的转移复发与“热点”区的MVD有良好的相关性。本组喉癌患者VEGF水平与癌组织中MVD呈明显正相关。表明随着VEGF水平的增高，MVD增多，血管增生，促进了肿瘤的生长。

综上所述，VEGF促进血管再生，在喉癌发生、发展过程中起到了重要作用，与淋巴转移明显相关。喉癌中VEGF的表达与MVD呈正相关，可以作为判断肿瘤恶性程度和估计预后的独立影响因子，为抗血管治疗提供依据。抗肿瘤血管生成的基因治疗策略适用于多种实体瘤，随着对VEGF在喉癌发病机制中作用研究的进一步深入，抑制血管形成治疗肿瘤的新策略会越来越被重视，配合其他抗肿瘤方法必将提高治疗效果。

1 李能莲，张 煦，王雅莉.缺氧诱导因子及其应答基因BNIP3和血管内皮生长因子在胃腺癌中表达及临床意义〔J〕.中华肿瘤杂志，2008;30(1):44-7.

2 杨东霞，韩艳春，刘鲁英，等.Elf-1和VEGF在非小细胞肺癌组织中的表达及意义〔J〕.癌症，2009;28(7):762-7.

3 方淯靖，万德森.结直肠癌肝转移的发生机制〔J〕.癌症，2008;27(5):549-54.

4 黄 方，康 瑞，吴春林.VEGF-C、NF-κBp65及 Survivin在鼻咽癌中的表达及临床意义〔J〕.山东大学学报(医学版)，2009;47(6):83-7.

5 彭晓林，王斌全，刘 涛，等.喉癌血清VEGF水平与癌组织中VEGF表达及MVD的关系〔J〕.山东医药，2008;48(32):31-2.

6 卢 培，陆慧琦，韩焕兴，等.2种检测VEGF-C和VEGFR-3基因表达的方法在诊断食管癌淋巴结转移中的价值〔J〕.检验医学，2009;24(6):446-9.