DLC-1蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义

杨春香，张晴菊，顾国浩

(1无锡市第三人民医院，江苏无锡 214000;2苏州大学附属第一医院)

近年来，非小细胞肺癌(NSCLC)发病率、病死率居高不下，晚期患者5年生存率仅为14%［1］。肝癌缺失基因(DLC-1)是一种新的候选抑癌基因，其在大多数肿瘤中表达下降或缺失，包括乳腺癌、胃癌、肝癌、前列腺癌、鼻咽癌等。进一步研究表明，DLC-1基因的RhoGAP结构域可能是其抗肿瘤作用的主要机制，DLC-1基因产物DLC-1蛋白在NSCLC癌组织中的表达情况目前鲜见报道。2011年5月～2012年1月，我们采用免疫组化法检测NSCLC组织中DLC-1蛋白的表达，旨在探讨其在NSCLC发生、发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 收集苏州大学附属第一医院和南京胸科医院外科手术切除的新鲜NSCLC组织标本40份(肿瘤组)，患者男28例，女12例;平均年龄60.1岁。鳞状细胞癌18例，腺癌22例。TNM分期为Ⅰ期13例，Ⅱ期12例，Ⅲ期15例。高分化8例，中分化23例，低分化9例。区域性淋巴结转移20例;肿瘤直径＞2 cm者27例。另选癌旁(距肿瘤边缘＞5 cm)组织标本40份(癌旁组)，两组患者的一般资料无统计学差异。

1.2 DLC-1蛋白表达检测 采用免疫组化染色。所有病理标本均经10%中性甲醛液固定，石蜡包埋，制作4 μm切片。二甲苯脱石蜡3次，70%乙醇脱二甲苯两次，3%H2O2处理10 min，单克隆鼠抗DLC-1抗体购自美国BD公司。具体操作按说明书进行，染色前经1×柠檬酸缓冲液微波修复10 min。DAB显色，苏木精复染。结果判定标准:DLC-1蛋白阳性染色主要定位于细胞质，胞质呈浅棕色至棕黄色。先按阳性细胞所占百分比计分:无阳性细胞为0分，阳性细胞≤10%计1分，11% ～50%计2分，51% ～75%计3分，＞75%计4分;再按染色强度计分，浅黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。以两者乘积为最后得分:0为阴性(－)，1～2分为弱阳性(+)，3～4分为(++)，＞4分为强阳性(+++)。(++)和(+++)为阳性组，(－)和(+)为阴性。

1.3 统计学方法 采用SPSS13.0统计软件，计数资料采用χ2检验，Kruskal-wallis秩和检验。检验水准 α =0.05。

2 结果

2.1 DLC-1蛋白表达 肿瘤组及癌旁组DLC-1蛋白阳性率分别为42.5%(17/40)、0，P ＜0.05。

2.2 DLC-1蛋白表达与NSCLC临床病理参数的关系 见表1。

表1 DLC-1蛋白表达与NSCLC临床病理特征的关系

3 讨论

DLC-1位于人类染色体 8p21.3-22，全长 3.8 kb，含有14个外显子，编码含1 091个氨基酸、分子量为123 kDa的蛋白质。现已发现，其在肝癌、乳癌、结直肠癌、胃癌、前列腺癌、卵巢癌、鼻咽癌等常见肿瘤中均出现低表达或表达缺失。DLC-1蛋白有3个主要功能结构域，分别是 RhoGAP、SAM和START。DLC-1蛋白是一种GAPs蛋白，即GTP酶活化蛋白(GAP)，是Rho家族小分子蛋白。GAP是细胞内多种信号分子的调节开关，能将GAP结合的活化状态转变成为失去活性的GDP结合状态。RhoGAP作为Rho家族小分子鸟苷三磷酸酶的调节子，能促进Rho蛋白的GTPase活性，从而将GTP结合的活化状态转变成为失去活性的GDP结合状态，因而扮演了Rho家族蛋白负调控因子的角色［2］。目前认为，DLC-1内在的RhoGAP结构域可能是其抗肿瘤的主要机制［3］。Yuan等［4］对无内源性 DLC-1基因表达的肝癌细胞系转染DLC-1cDNA后，证实DLC-1基因的表达对肝癌细胞的生长有抑制作用。此外，在肺癌、乳腺癌及鼻咽癌细胞系中的实验也得到了相同的结论。DLC-1蛋白为RhoA-C和Cdc42特异性的GTP酶激活蛋白，主要通过下调Rho蛋白的活性而抑制肿瘤细胞的生长［5］。Healy等［6］在对NSCLC的研究中也提出了DLC-1的抑制肿瘤细胞生长功能存在着RhoGAP依赖性和非依赖性途径。

关于DLC-1蛋白在NSCLC中的表达目前报道较少。分析本文结果，肿瘤组DLC-1蛋白阳性率明显高于癌旁组，表明DLC-1表达下降与NSCLC癌的发生、发展有关;随着肿瘤的分化程度降低，DLC-1表达逐渐减弱，提示DLC-1低表达水平与NSCLC癌细胞增殖活性有一定关系;有淋巴结转移者DLC-1表达阳性率明显低于无淋巴结转移者，提示DLC-1低表达与肿瘤组织浸润转移的危险性有关。DLC-1表达与病理分期相关，表明 DLC-1表达降低与NSCLC癌的侵袭性具有相关性，而癌细胞的增殖、转移活性、侵袭性通常是反映其生物学行为的指标之一。

总之，DLC-1蛋白在NSCLC的发生、发展中起重要作用，其有望为肿瘤的临床治疗及预后判断提供新的方法。

［1］于世英.肺癌分子靶向治疗药物的研究进展［J］.医药导报，2006，25(7):654-656.

［2］Liao YC，Si L，Devere White RW，et al.The phosphotyrosine-independent interaction of DLC-1 and the SH2 domain of cten regulates focal adhesion localization and growth suppression activity of DLC-1［J］.J Cell Biol，2007，176(1):43-49.

［3］Seng TJ，Low JS，Li H，et al.The major 8p22 tumor suppressor DLC-1 is frequently silenced by methylation in both endemic and sporadic nasopharyngeal，esophageal，and cervical careinomas，and inhibits tumor cell colony formation［J］.Oncogene，2007，26(6):934-944.

［4］Yuan BZ，Jefferson AM，Baldwin TK，et al.DLC-1 operates as a tunlor suppressor gene in human non-small cell lung carcinomas［J］.Oncogene，2004，23(7):1405-1411.

［5］Wong CM，Lee JM，Ching YP，et al.Genetic and epigenetic alteratiousof DLC-1 gene in hepatoeellular carcinoma［J］.Cancer Res，2003，22(63):7646-7651.

［6］Healy KD，Hodgson I，Kim TY，et al.DLC-1 suppresses non-smal cell lung cancer growth and invasion by Rho GAP dependent and independent mechanisms［J］.Mol Carcinog，2008，47(5):326-337.