反相高效液相色谱法测定葆宫止血颗粒中靛玉红含量

曹云飞，叶 飞

(1.江苏省镇江药品检验所，江苏 镇江 212003; 2.江苏吉贝尔药业有限公司，江苏 镇江 212009)

葆宫止血颗粒是秉承中医理论并结合现代医学研制方法而制的一种中成药[1]，适用于固经止血、滋阴清热。笔者采用反相高效液相色谱法测定葆宫止血颗粒中靛玉红成分的含量，进一步提高了该药标准，方法简便、快速，重现性好，现报道如下。

1 仪器与试药

恒温水浴锅(江苏金坛市中大仪器厂);BP211D型电子天平(德国赛多利斯股份公司);Agilent1100型高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)。靛玉红(C16H10N2O2)对照品 (中国药品生物制品检定所，批号为0717－2003);葆宫止血颗粒(中盛海天制药有限公司，批号分别为20091143，20100106，20100607);甲醇为色谱纯;水为二次重蒸水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱:Symmetry C18柱(150 mm × 3.9 mm，5 μm);流动相:甲醇 －水(75∶25);进样量:10 μL;流速:0.5 mL/min;柱温:30℃;检测波长:289 nm。高效液相色谱图见图1。

2.2 溶液制备

取样品内容物1袋，研细，加水50 mL使溶解[2]，用稀硫酸调节 pH为 1～2，在沸水浴中水解1 h，放冷，用40%氢氧化钠溶液调节pH至中性，用乙醚振摇提取 2次(40 mL，30 mL)，合并乙醚液，挥干，残渣加甲醇10 mL溶解并转移至100 mL量瓶中，流动相稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液2.0 mL，置10 mL量瓶中，流动相稀释至刻度，得供试品溶液。精密称取靛玉红适量，加流动相稀释成102.50 μg/mL的对照品贮备液，按处方比例称取除青黛以外的其它几味药[3]，按制备工艺制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

标准曲线制备:取102.50 μg/mL的靛玉红对照品溶液，分别取样 1.0，3.0，5.0，7.0，9.0 mL，置 10 mL 量瓶中，依法进样，以峰面积(Y)为纵坐标、质量浓度(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=1086.3X －2.395，r2=0.9977(n=5)。结果表明，靛玉红进样量在10.25～92.25 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:取同一靛玉红对照品溶液，重复进样5次。结果峰面积的 RSD为1.8%。

图1 高效液相色图谱

重复性试验:取本品1批共5份，依法制备供试品溶液并测定。结果含量的 RSD为1.36%。

稳定性试验:取同一供试品溶液，室温放置12 h，每隔一段时间进样10 μL，记录峰面积。结果靛玉红峰面积平均值为177.6，RSD 为 0.32%。

加样回收试验:取靛玉红适量，配制成质量浓度为23.5139 μg/mL 的溶液，分别取 1.0，2.0，3.0 mL，加入到已知含量的样品中，依法测定。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=9)

2.4 样品含量测定

取供试品溶液和对照品溶液，各进样10 μL，读取峰面积值，按外标法计算含量。结果3批样品中靛玉红含量分别为32.83，32.51，32.30 μg/g。

3 讨论

通过试验得知，靛玉红在289 nm波长处有较大吸收，其他成分在该波长处无干扰，因此可选择此波长作为检测波长。试验过程中曾尝试0.1%磷酸－甲醇(30∶70)[4]及甲醇－水(62∶38)[5]为流动相，经比较，选用甲醇－水(75∶25)[6]为流动相最佳，峰形及柱效较好。曾尝试直接超声提取，所制得供试品溶液峰面积太小，几乎测不到，故选择文中的提取方法。

[1]江苏新医学院.中药大辞典(上册)[M].上海:上海科学技术出版社，2011:998.

[2]中国医学科学院药物研究所.中药志(第一册)[M].北京:人民卫生出版社，1979:355.

[3]WS3－10028(ZD－0028)－2002，国家药品监督管理局标准[S].

[4]林夕霆.RP－HPLC法测定青黛中靛玉红的含量[J].海峡药学，2004，3(6):54－56.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:16.

[6]徐成志.反相高效液相色谱法测定利肝隆片中靛玉红含量[J].中国药业，2007，22(16):28.