顶空气相色谱法测定氢溴酸加兰他敏中三氯甲烷残留量

范桂强，宋更申

(1.河北省衡水市食品药品检验所，河北 衡水 053000; 2.河北省药品检验所，河北 石家庄 050011)

氢溴酸加兰他敏(galanthamine hydrobromide)临床上主要用于治疗阿尔茨海默病[1]。在氢溴酸加兰他敏合成过程中，使用了乙醇、四氢呋喃、乙酸乙酯、丙酮、异丙醇、甲醇、甲苯、三氯甲烷等有机溶剂，在氢火焰离子化(FID)检测器上，前7种有机溶剂均可得到良好的灵敏度，而三氯甲烷灵敏度低，无法准确定量，因为其结构上含有氯原子，故选用电子捕获检测器(ECD检测器)可显著提高灵敏度。三氯甲烷属第二类残留溶剂，限度均为0.006%，属于在药品中应限制残留量的溶剂[2－3]，控制其残留量对于保证药品质量和用药安全有重要意义。笔者根据ICH的指导原则和2005年版《中国药典(二部)》的相关规定，并参考文献[4－5]，采用ECD检测器，以水为溶解介质，测定氢溴酸加兰他敏中三氯甲烷的残留量。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 6890型气相色谱仪(美国安捷伦公司);Agilent 7694E型顶空进样器，BP211D型电子天平(德国赛多利斯公司)。三氯甲烷为色谱纯(美国Fisher公司)，水为超纯水;氢溴酸加兰他敏(国内 A公司，批号分别为 081021，081022，081023，含量分别为99.6%，99.5%，99.9%)。

2 方法和结果

2.1 色谱条件

色谱柱:DB －624毛细管柱(60 m×530 μm ×3 μm);柱温:85℃;分流进样方式，分流比为10∶1，进样口温度为200℃;采用ECD检测器，检测器温度为250℃;载气为氮气，流速为3.0 mL/min。顶空进样，平衡温度90℃，平衡时间为30 min，顶空瓶加压时间为0.2 min，进样时间为1 min，定量环体积1 mL，定量环温度100℃，传输线温度110℃。

2.2 溶液制备

精密称取三氯甲烷12 mg，置200 mL容量瓶中，用50%的N，N－二甲基甲酰胺水溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液贮备液。精密量取对照品溶液贮备液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。称取样品约0.5g，精密称定，置20 mL顶空瓶中，精密加水5 mL使溶解，摇匀，密封，即得供试品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验:照2.2项下的方法制备对照品溶液和供试品溶液，按2.1项下色谱条件测定，记录色谱图，见图1。结果三氯甲烷的理论板数为38210，水不干扰三氯甲烷的测定。

图1 气相色谱图

线性关系考察:分别精密量取2.2项下对照品贮备液1 mL，共 6 份，分别置 10，25，50，100，200，500 mL 容量瓶中，分别用水稀释至刻度。分别精密量取5 mL，置20 mL顶空瓶中，密封，按2.1项下色谱条件测定，以峰面积(A)为纵坐标、质量浓度(C)为横坐标进行线性回归，得线性归方程 A=1899.25 C+99.23，r=0.9999(n=6)。结果表明，三氯甲烷质量浓度线性范围为0.12 ～ 6.0 μg/mL。

精密度试验:取2.2项下同一对照品溶液，共6份，按2.1项下色谱条件连续测定6次，结果峰面积的 RSD为1.3%(n=6)。

重复性试验:取本品(批号为081021)约0.5 g，精密称定，共6份，分别置20 mL顶空瓶中，精密加水5 mL使溶解，摇匀，密封，按2.1项下色谱条件测定。结果样品中三氯甲烷的平均含量为 0.013%，RSD 为 0.8%(n=6)。

加样回收试验:称取已知三氯甲烷含量的样品(批号为081021)约 0.5 g，精密称定，置20 mL顶空瓶中，共9份，分别加入对照品贮备液 0.400 mL，0.500 mL，0.600 mL，各 3 份，再分别用水稀释至5.0 mL，摇匀，按2.1项下色谱条件测定，以外标法计算含量。结果见表1。

表1 三氯甲烷加样回收试验结果(n=9)

检测限与定量限试验:采用逐步稀释法测得，以 S/N=3时计算三氯甲烷的检测限，以 S/N=10时计算三氯甲烷的定量限，结果检测限为61 pg/mL，定量限为200 pg/mL。

2.4 样品中三氯甲烷的含量测定

取三氯甲烷和3批样品，按2.2项下方法制备对照品溶液和供试品溶液，按2.1项下的色谱条件测定，按外标法以峰面积计算三氯甲烷的残留量。结果3批样品中三氯甲烷的残留量分别为0.013%，0.012%，0.014% ，均不符合规定。

3 讨论

氢溴酸加兰他敏在水中易溶，且在选定的色谱条件下，水对三氯甲烷无干扰，因此选择水作为溶剂。

采用顶空进样法，可以通过控制温度使待测溶剂有效气化，避免了直接进样时样品和水对进样口及色谱柱的污染，同时也减小了主成分对分离测定的干扰。试验考察了不同的顶空温度和顶空平衡时间对样品测定的影响，结果表明，样品在70，80，90℃的顶空温度下均稳定，为了提高检测灵敏度，本试验选择90℃作为顶空温度;样品在30，40 min的顶空平衡时间内得到的峰面积基本一致，本试验选择30 min作为顶空平衡时间。

3批样品中三氯甲烷的残留量均超过了0.006%的限度要求，应对样品进行充分的重结晶和干燥以尽可能的除去三氯甲烷或降低三氯甲烷的残留量，保证药品的质量安全，可控。

[1]马振英，赵文丽.氢溴酸加兰他敏获得美国批准[J].国外医学·药学分册，2001，28(6):378.

[2]周海钧.药品注册的国际技术要求质量部分[M].北京:人民卫生出版社，2001:343.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:54－57.

[4]宋更申，郭 毅，付 焱，等.毛细管气相色谱法测定盐酸美金刚原料中三氯甲烷的残留量[J].中国药房，2010，21(37):3536－3537.

[5]宋更申，曹凤习，闫 凯，等.顶空毛细管气相色谱法测定盐酸地芬尼多原料中有机溶剂的残留量[J].中国药房，2010，21(41):3914－3915.