原子荧光法测定桑蝉止咳方中甘草砷汞的含量*

蒲星宇，徐静逍，毕 云，熊丽娟，魏丹霞

(1.云南省药物研究所，云南昆明 650111;2.云南中医学院，云南昆明 650500;3.昆明医科大学，云南昆明 650500;4.昆明市中医医院，云南昆明 650011)

甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药等功效。桑蝉止咳方是昆明医科大学在研课题六类新药临床前研究项目中的处方，临床用于治疗燥热型咳嗽。甘草作为方中的重要组成药物，起着祛痰止咳及处方佐使药的双重功效。随着药材种植过程中农药化肥的广泛使用及环境污染，重金属污染已经严重影响到了药品质量与安全性评价，特别是其中所含的砷和汞等元素对人体有害，在桑蝉止咳方的质量标准制定和质量监控中，对其重金属含量水平的控制及检测尤为重要。本实验通过原子荧光法测定桑蝉止咳方中原料甘草的砷和汞含量，成本低廉，方法准确可靠。

1 仪器和试剂

1.1 仪器

FA2004N电子分析天平，上海精密科学仪器有限公司;Speedwave MWS－3无接触红外测温微波压力消解系统，德国 BERGHOF公司;AFS－3100双道原子荧光光度计，北京科创海光仪器有限公司;AS－10自动进样器，编号91929，北京科创海光仪器有限公司;IFS－30双泵断续流动系统，编号9189，北京科创海光仪器有限公司;As空心阴极元素灯，编号AH951244，北京科创海光仪器有限公司;Hg空心阳极元素灯，编号BH0A2371，北京科创海光仪器有限公司。Easy－Q DI8纯水器 (上海生仪)，Milli－Q Advantage A10(Millipore公司)，可调式电热板 (型号:ML—3—4，北京市永光明医疗仪器厂)。10—100μL移液枪(北京大龙兴创实验仪器有限公司)。所有的玻璃器皿、容器、量具都用20%硝酸浸泡24h以上，取出后用去离子水冲洗干净备用。

1.2 试剂

纯氩，99.99%，昆明梅塞尔气体产品有限公司;硼氢化钠 (AR)，国药集团化学试剂有限公司，批号:F20051130;氢氧化钠 (GR)，国药集团化学试剂有限公司，批号:F20081021;盐酸(GR)，西陇化工股份有限公司，批号:1004262;硝酸 (GR)重庆川东 (集团)有限公司化学试剂厂，批号:20101008;硫脲 (AR)，国药集团化学试剂有限公司，批号:20090212;抗坏血酸(AR)，国药集团化学试剂有限公司，批号:20080107。实验用水为超纯水。1000μg/mL砷(As)标准液 ［GBW(E)080586 SDS332山东省冶金科学院］、1000 μg/mL汞 (Hg)标准液［GBW(E)ZBR802济南众标科技有限公司］。

1.3 标准品的配置

取砷标准品母液用2%的硝酸分别配置为5μg/L，10μg/L，15μg/L，20μg/L 的标准品备用;再取汞标准品母液用2%的硝酸分别配置为0.5μg/L，1μg/L，1.5μg/L，2μg/L的标准品备用。

1.4 还原剂和载液的配制

用去离子水配制含2%NaBH4和0.5%NaOH的溶液作为还原剂，再用去离子水配制5%的盐酸溶液作为载液。

1.5 药材

甘草购于云南药材有限公司中药饮片厂;批号0902127;产地:内蒙古。

2 样品的前处理

精密称取供试品甘草约0.5g 3份各放入聚四氟乙烯罐中再加5mL硝酸 (GR)，盖上盖子，旋紧，放置过夜，第2天补液2mL硝酸 (GR)，按微波消解装样指导放入Speedwave MWS－3无接触红外测温微波压力消解系统中，按表1程序进行消解:

表1 样品消解条件

待消解完毕后取出消解罐，冷却1～2h冷却到室温，小心缓慢的打开消解罐，将消解完毕的液体倒入洁净的250mL三角瓶中，放置在电热板上，缓慢加热，至瓶内液体只有约2～3mL时候，加1～2mL去离子水，待烟雾由黄变白，至不冒烟雾再缓慢加热0.5h，放冷至室温转移到25mL容量瓶中，用5%硫脲－5%抗坏血酸的溶液定容到刻度，待测。

3 检测条件

使用前先将砷和汞元素灯预热20min以上，待灯能量稳定后，使用去离子水装样，运转20min左右以清洗管道。将标准品和样品装样，上机，按下表的条件进行检测:

表2 标准品梯度 μg/L

表3 仪器条件

表4 测量条件

表5 继续流动程序

4 方法与结果

4.1 方法学考察

4.1.1 标准曲线的绘制

按照上述检测条件，分别做As和Hg的标准曲线，得到结果如下:

4.1.2 仪器精密度实验

取As和Hg低浓度的标准液，按相应的方法重复进样6次，As和Hg荧光强度的RSD分别为:0.9%，2.5%.

表6 标准曲线参数

4.1.3 重复性试验

精密称取样品6份，按相应元素的方法制备，再通过相应的方法测定，As和Hg的RSD分别为:1.2%和2.2%.

4.1.4 加标回收率

在一定量的样品中加入标准液，定容，进行加标回收试验，根据测定值计算回收率，见下表:

表7 回收试验结果

4.2 样品的检测

根据2、样品的前处理和3、检测条件，处理提供的样品，分别测定As和Hg的含量，根据荧光强度计算重金属含量 As和 Hg分别为:0.3857mg/Kg;5.8274μg/Kg。

5 讨论

氢化物发生－原子荧光法是基于化学反应后，将分析元素转化为在室温下为气态的氢化物。反应所生成的氢化物被引入石英炉中，并且被原子化，受空心阴极灯激发，原子外层电子跃迁到较高能级，并在回到较低能级的过程中辐射出原子荧光。荧光强度与溶液中被测元素的浓度成正比。硼氢化钠 (钾)是氢化物反应中最重要的试剂，应保证足够纯度及不含有被测元素。且将硼氢化钠 (钾)溶于一定量的氢氧化钠中以保证硼氢化钠 (钾)的稳定性。

样品溶于硫脲－抗坏血酸中，既是砷从五价态还原到三价态的还原剂，同时也是抗干扰的掩蔽剂。

药典中测Hg为冷蒸汽吸收法，而根据此法，Hg也可点火炉丝后测量，甚至可以配混标和As同时测量。根据中国药典2010版［1］一部甘草项下规定:As不得超过百万分之二，Hg不得超过千万分之二。桑蝉止咳方中甘草As、Hg含量都符合规定，通过原子荧光测定As，Hg成本低廉，方法准确可靠。

中药重金属Hg、Ag等元素被人体吸收后，当蓄积至一定量时可起到免疫系统障碍，神经、内分泌、肝、肾功能受损，而引起一系列严重的中毒症状，某些元素还能引起肿瘤，因而世界各国对这些有害元素在药品和食品中的含量制定了严格的限量标准［2］。本实验通过原子荧光法测定桑蝉止咳方中原料甘草的砷和汞含量，从源头严格质量把关，提高了制剂的临床使用安全性。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典 (一部)［M］.北京:中国医药科技出版社，2010:80.

［2］陆宇照，龚跃刚，王兴文，等.中药提取物中重金属的研究 ［J］.云南中医学院学报，2001，1(24):1.