急诊PCI的急性心肌梗死患者外周血CD34＋、CD117＋及CD34/CD117＋干细胞的变化＊

陕西省人民医院（西安710068） 邓争荣 张 颖 朱宏海 李尚俭 王军奎 刘新宏 官功昌

本研究通过检测行急诊经皮冠状动脉介入（PCI）术的急性心肌梗死（A MI）患者外周血 CD34＋、CD117＋及CD34/CD117＋干细胞数，探讨A MI患者干细胞自体动员情况及可能的影响因素。

对象和方法

1 研究对象 36例AMI患者，均在发病12h之内并成功行急诊PCI术，使梗死相关动脉血流TI MI3级，所有患者均给予低分子肝素、阿司匹林、氯吡格雷及他汀类调脂药等标准治疗。心梗患者满足中华医学会心血管病学分会制定的2010年急性ST段抬高型心肌梗死诊断标准［1］。排除：近期患有急慢性感染性疾病，自身免疫性疾病，肿瘤，严重肝肾疾病，使用类固醇药物。选择15例经冠状动脉造影排除冠心病的患者为对照组，排除标准与心梗组一致。两组一般资料比较见附表。两组在年龄、性别、BMI，冠心病危险因素、尿酸及血脂水平方面均无明显差别。A MI组入院时外周血白细胞及中性粒细胞数明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0．05）。

2 方 法 ①流式细胞仪检测CD34＋、CD117＋及CD34/CD117＋干细胞的水平：A MI患者在入院12h内，第3、5天凌晨，对照组患者于入院次日凌晨，均采集外周静脉血5 ml，置入EDTA抗凝管内，4h之内行流式细胞仪分析。将100μl抗凝血加入流式试管内，混匀后加入20μl双标同型对照、FITC－CD34荧光抗体及荧光素藻红蛋白PE－CD117荧光抗体（购自美国Southern Biotech公司，Mouse Anti－Hu man CD34－FITC，CD117/C－kit－PE），室温下避光保存20 min，加入红细胞裂解液2 ml，涡旋混匀，避光待管内液体透亮后离心弃去上清，加入2 ml PBS液，涡旋混匀离心后弃去上清。加入0．5 ml PBS液混匀，4℃避光上流式细胞仪检测（BD FACSCalibur，BD公司）。检测结果以占淋巴细胞亚群的百分率来表示。②其他指标测定：A MI患者在入院12h内行CK－MB、肌钙蛋白I测定，所有入选患者均行血常规、血脂及血尿酸等检测。A MI患者在心梗后第7天行心脏超声测定，测定射血分值（EF）等值。

附表 两组患者临床基本情况

3 统计学方法 采用SPSS15．0统计软件进行统计学处理。计量资料采用均数±标准差表示。多组间比较用方差分析，计数资料的比较用χ2检验。两变量之间的关系采用直线回归和相关分析。一个变量与多个因素之间的关系采用多元回归分析。检测水平为双侧，P＜0．05为差异有统计学意义。

结 果

1 外周血CD34＋、CD117＋及CD34/CD117＋干细胞检测结果 A MI患者入院12h内的外周血CD34＋细胞为4．21±3．66%，对照组为8．47±5．29%，对照组明显高于 AMI患者（P＜0．05）；A MI患者第3天及第5天的CD34＋细胞均有所升高，分别为9．98±5．36%及6．28±4．76%，第3天时最为明显，明显高于发病12h内的CD34＋细胞（P＜0．05），但与对照组相比无明显差异。A MI患者入院12h内的外周血CD117＋细胞为1．16±0．77%，第3天和第5天均有所升高，分别为1．54±0．27%及1．4±1．05%，对照组为0．82±0．22%，第3天的CD117＋细胞明显高于对照组（P＜0．05）。AMI患者在入院后各时间点的CD34/CD117＋细胞分别为0．30±0．33%，0．41±0．39%及0．39±0．31%，对照组为0．18±0．11%，A MI患者均略高于对照组，但差异无统计学意义。

2 急性心肌梗死患者外周血干细胞与心肌坏死标志物及EF值的关系 通过相关分析发现急性心肌梗死患者各时间点的外周血 CD34＋、CD117＋及CD34/CD117＋干细胞与发病12h内的CK－MB水平、肌钙蛋白水平及超声EF值之间均无明显相关性。

3 影响A MI患者外周血干细胞的因素 应用多元回归分析年龄、冠心病危险因素个数（包括吸烟、高血压及糖尿病）、冠脉病变支数、外周血白细胞数、中性粒细胞数、CK－MB及肌钙蛋白与心梗后各时间点的CD34＋、CD117＋及CD34/CD117＋干细胞之间的相关性，发现冠心病危险因素个数与心梗12h内的CD34＋干细胞数有明显相关性（Beta＝0．457，P＝0．019），余变量之间均无明显相关性。

讨 论

急性心肌梗死时，心肌细胞缺血坏死，发生炎性反应，刺激机体释放大量的炎性因子及细胞因子，这些因子会促使自身干细胞的动员。心梗后升高的CD34＋等细胞有益于梗死后心室重塑［2］，与左室功能有正相关关系［3］。不仅心梗后干细胞数量升高，而且可表达早期心肌、肌肉及内皮细胞的标志［4］。可见急性心肌梗死诱发的自身干细胞的动员是机体自身修复的机制之一。

目前，有许多研究探讨了急性心肌梗死后干细胞的动员情况及影响因素，但是结果各有不同［5－6］。本研究发现接受急诊PCI的心梗患者外周血CD34＋、CD117＋及CD34/CD117＋干细胞在心梗后亦逐渐升高，在第3天最为明显。提示心肌细胞缺血坏死所引起的干细胞动员可能需要一定时间才能使干细胞在外周血中达到高峰。急诊PCI是否会影响干细胞动员高峰时间或可使其动员高峰前移还需进一步的观察。本研究还发现急诊PCI的心梗患者12h的CD34＋细胞低于对照组，CD117＋、CD117/CD34＋与对照组无明显差异。

急性心肌梗死时冠状动脉斑块破裂，局部血栓形成阻断血流，造成心肌细胞缺血坏死，及时尽早行PCI治疗可使罪犯血管再通，减少梗死面积。支架的置入会损伤血管内皮细胞，内皮细胞继之会修复并覆盖支架的表面，支架置入损伤内皮及内皮修复的过程可能会消耗循环中的内皮前体细胞。同时血管再通后亦有更多的干细胞到达缺血心肌局部，这都会使之在外周血中降低。另外，心肌缺血坏死及急诊PCI后的再灌注损伤会释放大量的促炎及抗炎因子，这些因子是否会损伤干细胞目前还不得而知。这可能是急诊PCI术的心梗患者外周血CD34＋细胞减少的原因。

有许多因素影响心梗后干细胞的动员。年龄是常被研究的因素。Turan等［7］发现心梗患者随着年龄的增长，外周血CD34/45＋及CD133/45＋细胞有明显的降低。Chang等［8］发现年轻健康者的干细胞数明显高于急性心梗患者。冠心病危险因素也常与动员的干细胞有关，Turan等［7］研究提示心梗患者冠心病危险因素的多少与外周血中的干细胞成负相关关系，但本研究的结果与之相反。本研究只分析了3个危险因素，是否因素过少，还是急诊PCI的影响，亦或存在其他因素的影响，目前还须探讨。急性心肌梗死患者常并存多种疾病及应用多种药物，各种因素之间互相影响，这可能都会影响干细胞的动员情况。

本研究发现行急诊PCI的急性心肌梗死患者外周血CD34＋及CD117＋干细胞动员高峰时间在心梗后第3天，急诊PCI后短期内的CD34＋干细胞低于健康对照患者，提示接受急诊PCI的心梗患者干细胞的动员情况不同于未行急诊PCI的患者。

［1］中华医学会心血管病学分会，中华心血管病杂志编辑委员会．急性ST段抬高型心肌梗死诊断及治疗指南［J］．中华心血管病杂志，2010，38（8）：675－687．

［2］Leone A M，Rutella S，Bonanno G，et al．Mobilization of bone marrow－derived ste m cells after myocar dial infarction and left ventricular function［J］．Eur Heart J，2005，26（12）：1196－1204．

［3］Wojakowski W，Tendera M，Zebzda A，et al．Mobilization of CD34（＋），CD117（＋），CXCR4（＋），c－met（＋）stem cells is correlated with left ventricular ejection fraction and plas ma NT－pro BNP levels in patients with acute myocardial infarction［J］．Eur Heart J，2006，27（3）：283－289．

［4］Wojakowski W，Tendera M，Michalowska A，et al．Mobilization of CD34/CXCR4＋，CD34/CD117＋，c－met＋ste m cells，and mononuclear cells expressing early cardiac，muscle，and endothelial mar kers into peripheral blood in patients with acute myocardial infarction［J］．Circulation，2004，110（20）：3213－3220．

［5］Shintani S，Murohara T，Ikeda H，et al．Mobilization of endothelial progenitor cells in patients with acute myocardial infarction［J］．Circulation，2001，103（23）：2776－2779．

［6］Grund mann F，Scheid C，Braun D，et al．Differential increase of CD34，KDR/CD34，CD133/CD34 and CD117/CD34 positive cells in peripheral blood of patients with acute myocar dial infarction［J］．Clin Res Car diol，2007，96（9）：621－627．

［7］Turan RG，Breh m M，．Koestering M，et al．Factors influencing spontaneous mobilization of CD34＋and CD133＋progenitor cells after myocardial infarction［J］．Eur J Clin Invest，2007，37（11）：842－851．

［8］Chang LT，Yuen CM，Sun CK，et al．Role of stro mal cellderived factor－1alpha，level and value of circulating interleukin－10 and endothelial progenitor cells in patients with acute myocardial infarction under going pri mar y coronar y angioplasty［J］．Circ J，2009，73（6）：1097－1104．