胆汁反流性胃炎与浊毒相关性研究＊

郭喜军 曹 旭 梁 京 河北省中医院消化内科（石家庄050011）

胆汁反流性胃炎（bile－reflux gastritis，BRG）随着胃镜的普及，检出率大大增加，成为消化系统的常见病、多发病。其发病机制复杂，涉及病因多种，包括胃肠动力紊乱，胆囊功能障碍及胃肠激素异常等。目前中医药对此病研究很多，但很少从浊毒立论进行研究。李佃贵教授创立的“浊毒理论”为胆汁反流性胃炎的中医药治疗提供了新的治疗思路，浊毒是当前中医病因病机研究的一个重要内容，本实验通过建立胆汁反流性胃炎大鼠浊毒证模型，从而来研究浊毒在胆汁反流性胃炎发病过程中的有关机制，以期为临床研究提供实验依据。

1 材 料 1.1 实验动物 清洁级Wistar雄性大鼠30只，体重180～200g，购自河北医科大学动物实验中心，动物合格证号：1105033。

1.2 试 剂 将牛黄胴酸钠2.5g（郑州利伟生物实业有限公司，批号20110206）、胰酶1.5g（美国 GIBCO公司，批号27250018）、卵磷脂0.25g（瑞士 ACROS公司，批号 A0277637）溶于蒸馏水100mL中配制成胆汁液。石家庄行唐枣木杠酒（酒精含量为75%）。SOD与MDA试剂盒由北京中杉金桥生物技术有限公司提供。TNF－α检测试剂盒由北京普尔伟业生物科技有限公司提供。

1.3 实验设备 LRI－I－800－GS人工气候箱为广东省医疗器械厂产品；YC－DZ0z亚都超声加湿器为北京亚都科技股份有限公司产品；HM－200电子天平；TDL－5－A离心机上海安亭产品；MDF－382E超低温保存箱日本三洋；LGL－10台式冷冻干燥机宁波新芝生物科技股份有限公司；NW10VF超纯水机 上海力康HeaLForce；DY89－1电动玻璃匀浆机 宁波新芝生物科技股份有限公司；FJ－2021γ－放射免疫计数器西安二六二厂，等。均由河北中医学院提供。

2 方 法 2.1 动物分组及造模 30只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组（A组）、湿热证组（B组）、浊毒证组（C组）。各组动物实验前先适应性喂养7d。对照组正常饲养。模型组参照柴氏[1]的方法并稍加改动。即湿热证组除用上述配制好的胆汁液灌胃外，将大鼠放入温度（38±2）℃、相对湿度（93±2）%的人工气候箱中，安排肥甘污染饲料喂养（将其昨日粪便、猪油、花生油、标准饲料以配比1∶1∶1∶100研碎，混合均匀）10d。浊毒证组除湿热证组方法造模外另加5%乙醇溶液和0.5%辣椒水溶液隔日给予以代替饮水，并延长造模时间，比湿热证组多造模10d。

2.2 一般表现观察 大鼠外观、精神状态及食量、体重、粪便形状等。

2.3 指标检测及方法 据文献[2，3]各组动物于末次灌胃后，禁食不禁水24h，断头取血2mL，在4℃，4 000r/rain条件下离心10min，取上清液，－20℃冻存，留作TNF－α检测，测定方法严格按试剂盒说明书操作。采血后快速剖取胃组织，在低温生理盐水液中洗去血液，沿胃大弯剪开，用冰生理盐水漂洗胃内容物，滤纸吸干，切取胃窦组织一块，立即投入4%甲醛溶液内固定，常规石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下组织形态观察。用刀片刮取余下的胃窦组织粘膜并称重，冰浴下制备10%组织匀浆，3000r/min离心15min，取上清，－20℃以下保存，留作SOD、MDA检测，测定方法严格按试剂盒说明书操作。

3 结 果 3.1 一般表现情况 正常组在喂养期间一般情况良好。湿热证组大鼠前7d体重量增加，开始造模后体重未有明显增长，面背部毛色枯槁，耳尾色白、毛无光泽，大便时干时溏，活动状态不佳。浊毒证组大鼠前7d体重增加，开始造模后食量明显减少，体质量减轻，精神萎靡，嗜卧懒动，全身毛色枯槁萎黄，形体逐渐偏瘦，溏便，出现受惊动时无神，抓取时挣扎无力。

3.2 胃黏膜病理组织学结果 光镜观察正常组黏膜上皮完整，结构排列清楚，固有黏膜密集排列的腺体，未见胃黏膜萎缩脱落或缺损，未见毛细血管扩张及溃疡。湿热证组胃黏膜上皮细胞层未变薄、有脱落，炎细胞浸润，有毛细血管扩张充血。浊毒证组胃黏膜上皮细胞萎缩、脱落、糜烂，胃粘膜腺体和腺细胞减少，肠化生，炎细胞浸润、部分有淋巴滤泡形成。

3.3 各组胃黏膜SOD、MDA及血清TNF－α含量 与正常组比较，湿热证组和浊毒证组血TNF－α及胃黏膜MDA含量均有显著升高，差异有统计学意义（P＜0.01），同时浊毒证组较湿热证组高，差异有统计学意义（P＜0.05）。与正常组比较，湿热证组和浊毒证组胃黏膜SOD含量均显著降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。同时浊毒证组较湿热证组低，差异有统计学意义（P＜0.05），如表1。

表1 各组TNF－α、MDA、及SOD结果的比较±s）

表1 各组TNF－α、MDA、及SOD结果的比较±s）

注：与正常对照组比较，△P＜0.01，有统计学差异；与湿热证组比较，▲P＜0.05，有统计学差异

组别 n TNF－α（ng/mL）MDA（u/mg prot）SOD（nmol/mg prot）正常对照组10 0.31±0.02 0.48±0.9 226±53湿热证组 10 0.51±0.04△▲ 0.96±1.2△▲ 157±32△▲浊毒证组 10 0.78±0.07△▲ 1.22±1.8△▲ 129±21△▲

4 讨 论 胆汁反流性胃炎（BRG）在临床上随着胃镜的广泛应用，检出率逐年增加，成为慢性胃炎的一种常见类型。BRG可归属祖国医学胃脘痛、嘈杂、呕胆等范畴。近年来国内的中医学者对该病的辨治进行了多方面探索，李佃贵教授创立的“浊毒理论”为本病的中医药治疗提供了新的治疗思路，应用浊毒理论辨证论治在临床上取得了良好的效果。但是缺乏实验依据，本实验以“湿热久居蕴成浊毒”为理论依据，分别建立湿热和浊毒模型，观察和检测相关指标，从而为浊毒理论提供实验依据。

湿热蕴久可化生浊毒。本实验中模型的建立就在湿热证组的基础上刻意延长了浊毒证组的造模时间，并且在大鼠平时饮水中加入了助湿生热之大辛大热的白酒和辣椒水。病理切片和检测指标结果均为浊毒证组较湿热证组严重，提示了湿热证蕴久逐渐向浊毒证发展的病理变化过程。李佃贵[4]认为浊毒互结，浊以毒为用，毒以浊为体，胶着难愈，邪壅经络，气机不畅，邪不得散，血不得行，津不得布，津血停留，化生痰浊瘀血，日久痰浊、瘀浊相互搏结，反复日久，耗伤脏腑气血津液，从而造成浊毒内壅、气滞络阻、脾不升清、胃失和降、阴血耗伤、气虚血郁的证机变化，而浊毒相干为致病的关键。

TNF－α（肿瘤坏死因子）是一种促炎症蛋白，可致胃黏膜内皮细胞的损伤，使血流减少，而胃黏膜血流在胃黏膜屏障的防御作用中至关重要，从而造成胃黏膜损伤[5]。适量的TNF－α可参与免疫细胞的活化炎症反应，具有抗感染、抗病毒和抗肿瘤作用；而过量的TNF－α则增强微血管壁通透性，改变黏膜血管内皮细胞反应性，致微血管内凝血，致细胞破坏，溶酶体漏出，炎性介质释放，使黏膜营养不良[6]。本研究表明，模拟浊毒证组胆汁反流性胃炎大鼠血清TNF－α水平明显升高，说明浊毒的产生可能和血清TNF－α水平升高有关。

自由基是机体内代谢的必然产物，在体内不断产生，同时又被不断清除。一定的含量对人体有生理作用，但是产生过多后超出机体的清除能力，就会对机体造成损伤[7]。丙二醛（MDA）是脂质过氧化作用的最终产物，故测定MDA水平可反映氧自由基的水平。它是评估自由基对机体损害程度的重要参考指标。过氧化物歧化酶（SOD）是自由基清除系统中最重要的酶类之一，在胃壁细胞内活性很强。它能够及时有效地清除体内自由基，免除其对机体的损害作用。体内SOD含量大小，在一定程度上反映机体清除自由基能力的大小。本实验表明，模拟浊毒证组胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜由于MDA水平升高和SOD水平下降，大量氧自由基对胃黏膜造成损伤，说明浊毒的产生可能和胃黏膜MDA水平升高和SOD水平下降有关。

[1]柴天川，王彦刚，王红英.浊毒型慢性胆囊炎豚鼠模型的复制[J].河北中医，2005，22（3）：1556－1561.

[2]张静霜，朱西杰，朱微微，等.复方蜥蜴散对慢性萎缩性胃炎模型大鼠肿瘤坏死因子TNF－α及胃黏膜病理组织学的影响[J].时珍国医国药，2010，21（2）：286－288.

[3]杨牧祥，于文涛，白瑞军，等.胃炎饮对实验性胆汁反流性胃炎大鼠胃黏膜自由基代谢的影响[J].疑难病杂志，2009，11（11）：657－659.

[4]李佃贵，朱 峰，刘建平，等.浊毒论治探讨[J].山西中医，2008，24（11）：1－3.

[5]Appleyard CB，Mc Cafferty DM，Tigle AW，et al.TNF－αmediation of NSAID－induced gastric damage：role of leukocyte adherence[J].Am J physiol，1966，270：42－48.

[6]张静霜，朱西杰，朱微微，等.复方蜥蜴散对慢性萎缩性胃炎模型大鼠肿瘤坏死因子TNF－α及胃黏膜病理组织学的影响[J].时珍国医国药，2010，2l（2）：286－288.

[7]李 涛，王秀玲.氧自由基与胃肠疾病研究进展[J].国外医学·消化系疾病分册，1997，17（4）：204.