普罗帕酮在家兔体内的死后分布1）

朱培培，杨泽国，王 莉，严 鹏，贠克明

普罗帕酮（propafenone，PPF），又名心律平、丙苯酮、丙胺苯丙酮、羟丙苯丙酮，主要用于致命性室性心律失常的治疗，也用于治疗室上性心律失常以及在急性心肌梗死时出现的心律失常。由于在临床患者中应用较多，医生对病人的监管有一定的局限性，故误服中毒成为常见原因之一，偶有中毒或死亡的病例报告[1－4]。有关普罗帕酮法医毒物动力学研究报道较少，仅见个别中毒（死）案件的检验报道[5－7]。本实验建立了普罗帕酮口服中毒致死家兔的动物模型，研究普罗帕酮在家兔体内的死后分布规律，为口服普罗帕酮自杀和中毒案件的法医学鉴定提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康家兔9只，体重（2.0±0.3）kg，雄性，由山西医科大学动物实验中心提供，实验前隔夜禁食。

1.2 试剂和药品 PPF和地西泮标准品购于公安部物证鉴定中心。标准液：普罗帕酮标准品溶液，4℃冰箱保存。内标液：地西泮标准品甲醇溶液，4℃冰箱保存。普罗帕酮片剂每片50 mg，石药集团中诺药业（石家庄）有限公司生产，批号：H13021670。

1.3 染毒和样品采集 健康家兔9只，分实验组和对照组。实验组家兔6只，经胃管注入8LD50剂量的普罗帕酮0.44 g/kg，观察其表现，待家兔血压、呼吸和心电全部消失后，迅速解剖动物，取心血、胆汁、尿液、玻璃体液各1 mL，心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉等组织各1 g，按下述方法提取，高效液相色谱内标法定量检测其中普罗帕酮。

1.4 主要仪器及检测条件 日本岛津LC－20AT高效液相色谱仪，C18柱（日本岛津5μm；150 mm×4.6 mm）；柱温25℃；流动相：甲醇－水－冰醋酸－三乙胺（62.3∶37.7∶0.034∶0.068）；检测波长310 nm；流速1 mL/min；进样量20μL。

1.5 检材提取 取固体检材1 g或液体检材1mL，固体检材超声细胞粉碎匀浆3 min，加入内标液20μL，振荡，加入p H＝10的缓冲液0.5mL，振荡摇匀，加入5mL乙醚，振荡15 min，3 000 r/min离心10 min，将上清液移入另一干净且干燥试管中，重复萃取一次。40℃恒温水浴挥干，500μL甲醇定容，取20μL进样。利用保留时间定性，内标法和工作曲线法（液相色谱）定量[8，9]。

1.6 精密度实验 取浓度为10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的三种普罗帕酮标准溶液在上述液相色谱条件下每样品每日测定5次，连续测定2 d，由峰面积计算日内，日间变异系数（CV＝S/X×100%）。

1.7 工作曲线和回收率实验 取空白检材（血、肝脏），分别加入普罗帕酮标准溶液及地西泮溶液，配制成含有普罗帕酮0.05 μg/g、0.1μg/g、0.2μg/g、0.5μg/g、1μg/g、2μg/g、4μg/g、8 μg/g、10μg/g、20μg/g和地西泮20μg/g的系列样品，按照上述方法提取并检测。以普罗帕酮浓度（μg/g或μg/mL）为横坐标（x），普罗帕酮与内标地西泮的峰面积之比为纵坐标（y）进行线性回归，所得血线性回归方程Y＝1.1012X－0.283，R2＝0.994，肝脏线性回归方程Y＝1.025 6X＋0.035 3，R2＝0.997；取肝组织1 g或心血1mL，各9份，分别加入标准品4μg（3份）、6μg（3份）、8μg（3份），按上述方法提取检测，标准曲线计算回收率。

2 结 果

2.1 中毒症状 实验组家兔染毒后，均出现精神萎靡、尿失禁、惊厥、昏迷、死亡。对照组无死亡。

2.2 液相色谱图 高效液相色谱检测，普罗帕酮和内标物地西泮可完全分离，峰形对称，溶剂和脏器提取内源性杂质对普罗帕酮和地西泮无干扰。空白对照组未见异常峰。详见图1。

图1 染毒家兔血中普罗帕酮高效液相色谱图

2.3 死后分布 染毒死亡家兔胆汁、肺和肝中普罗帕酮浓度最高，玻璃体、肌肉中含量最低，与其他组织脏器样本检测值比较有统计学意义（P＜0.05）。其含量顺序为胆汁、肺、肝＞肾、脾、尿＞心血、心、脑＞玻璃体液、肌肉。详见表1。

表1 普罗帕酮在中毒死亡家兔体内含量（±s） μg/g

表1 普罗帕酮在中毒死亡家兔体内含量（±s） μg/g

最大值 最小值心样品（±s 7.47±10.63 28.07 0.06肝 47.11±53.97 132.63 0.12脾 20.09±15.02 43.44 2.82肺 78.59±37.82 130.29 33.19肾 20.57±12.78 37.99 6.19脑 5.62±5.99 17.33 1.29肌 1.96±1.61 3.88 0.00心血 12.99±15.87 43.09 0.31尿 20.05±18.85 45.71 0.06胆汁 109.59±66.25 212.39 35.62玻璃体液2.10±3.51 8.75 0.00

3 讨 论

3.1 HPLC检测 普罗帕酮的检测方法主要有薄层扫描和高效液相色谱法[10]。薄层扫描法简便、快速、定性好，但定量重复性稍差。已报告的高效液相色谱检测方法主要是药物和血清中普罗帕酮的检测，生物组织检材中普罗帕酮的高效液相色谱检测方法报告较少[11]，而高效液相色谱质谱联用法未见报告。本文采用本实验室先期建立的生物检材中普罗帕酮的提取方法，建立了生物检材中普罗帕酮的高效液相色谱检测方法，未见内源性杂质干扰，具有操作简便快速﹑定性定量准确的特点，组织检材中普罗帕酮提取物检测线性范围、最小检出浓度均达到生物检材中药物检测要求[12]，可应用于普罗帕酮中毒的法医学鉴定。

3.2 死后分布 刘佳佳等[13]报道4LD50染毒致死大鼠体内盐酸普罗帕酮含量顺序为肌肉、肺、脾、肝、外周血、心血、心、肾、大脑。本实验结果显示，4LD50染毒死家兔各脏器组织样本中普罗帕酮含量由高到低分别为：胆汁、肺、肝＞脾、肾、尿＞心血、心、脑＞玻璃体、肌肉。其中胆汁、肺和肝中浓度最高，玻璃体、肌肉样本中含量最低。说明盐酸普罗帕酮的死后分布可能存在剂量和种属差异。因此，在普罗帕酮中毒（死）案件法医学鉴定时，除血外，还应采取胃（胃内容）、胆汁、肺、肝等药物分布量高的脏器，进行全面定性和定量分析，并应考虑中毒量、中毒死亡时间和种属差异的影响。其死后分布含量关系还可用于极端条件下尸体血中普罗帕酮含量的推断。

[1] 辛海莉，熊永娣.心律平中毒致死一例[J].药物与临床，2001，16（1）：55－56.

[2] 路敦祥，孙绪武，陈延军.口服普罗帕酮中毒1例报告[J].黑龙江医学，2001，9（25）：714－715.

[3] 董文彬，胡小雄.口服普罗帕酮中毒死亡1例[J].中国法医学志，2006，21（4）：252.

[4] 黄志平.普罗帕酮中毒一例[J].华北国防医药，2006，18（4）：281.

[5] 贠克明，郑金平，王玉瑾，等.薄层色谱扫描法检测普罗帕酮中毒者血药浓度[J].中国医院药学杂志，1999，19（4）：195－197.

[6] Hilberg T，Bugge A，Beylich KM，et al.An animal model of postmortem amitriptyline redistribution[J].J Forensic Sci，1993，38：81－90.

[7] Palette C，Maroun N，Gaulier JM，et al.Fatal poisoning with propafenone：A case report documented with blood concentration levels[J].Therapie，2003，58（4）：384－386.

[8] 董军亚，张继红，焦晓红，等.高效液相色谱法测定人血清中普罗帕酮的浓度[J].武警医学，2006，17（6）：427－429.

[9] 王艳春.盐酸普罗帕酮在大鼠体内的药动学研究[J].中国冶金工业医学杂志，2008，25（4）：486－487.

[10] 陈秋潮，诸俊仁，江文德，等.高效液相色谱法测定心律平浓度及其药代动力学研究[J].中国临床药理学杂志，1985，1：12.

[11] 刘俊亭，高利娜，王妍.体内普罗帕酮及其代谢物的GC－MS检验[J].分析测试学报，2007，8（26）：44－46.

[12] Lawrence A.Bioanalytic considerations for pharmacokinetic and biopharmaceutic studies[J].Clin Pharmacol，1986，26：332－335.

[13] 刘佳佳，霍立利，杜同蛋，等.盐酸普罗帕酮在大鼠体内的死后分布研究[J].中西医结合心脑血管病杂志，2011，9（12）：1491－1492.