健儿消食颗粒质量标准研究

韩云霞，李 平，靳凤云，李德鑫

健儿消食颗粒由黄芪、白术、陈皮、麦冬、黄芩、山楂、莱菔子7味中药组方，具有健脾益胃、理气消食之功效，可用于小儿饮食不节损伤脾胃引起的纳呆食少、脘胀腹满、自汗乏力、大便不调，以至厌食、恶食等症[1]。该制剂由口服液改剂型而来，原质量控制标准没有含量测定项目。为更好地控制该制剂质量，本研究中对制剂中黄芩、黄芪、莱菔子、陈皮等4味药进行薄层定性鉴别研究，以黄芩中有效成分黄芩苷进行了含量测定研究。现报道如下。

1 仪器与试药

LC－10ATvp泵，SPD－10Avp紫外检测器，CTO－10Asvp柱温箱(日本岛津);Shimadzu Libror AEL 40SM(十万分之一)天平(日本岛津);硅胶G薄层板(青岛洋化工厂)。健儿消食颗粒(贵阳中医学院第二附属医院制剂室，批号分别为20080901，20080902，20080903);黄芩对照药材(批号为 120955 －200301)，没食子酸对照品(批号为110830－200301)，莱菔子对照药材(批号 为 121074－200302)，黄芪 对照 药材(批 号为 120927－200310)，陈皮苷对照品(批号为0775－9901)，黄芩苷对照品(批号为110715－200212)，购自中国药品生物制品检定所;乙腈(天津市大茂化学试剂厂)，其他试剂均为分析纯，水(重蒸馏，临用前制备)。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

黄芪:取本品10 g，研细，加乙醇40 mL，超声处理1 h，滤过，滤液浓缩至约2 mL，作为供试品溶液。取不含黄芪的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。另取黄芪对照药材2 g，加乙醇10 mL，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以苯－醋酸乙酯(8∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气饱和的层析缸内熏5 min后，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1 A。

黄芩:取本品 10 g，加水 50 mL，煮沸 10 min，放冷，滤过，滤液加乙醚提取2次，每次25 mL，分取乙醚层，挥至约2 mL，作为供试品溶液。取不含黄芩的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。另取黄芩对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿－甲醇(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1 B。

山楂:取本品10 g，研细，加乙酸乙酯25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥至约1 mL，作为供试品溶液。取不含山楂的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。另取山楂对照药材1 g，加乙酸乙酯5 mL，超声处理15 min，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－醋酸乙酯－甲酸(20∶4∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液(3→10)，在80℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图1 C。

陈皮:取本品10 g，研细，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2 mL溶解，取上清液作为供试品溶液。取不含陈皮的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。另取陈皮对照药材1 g，加甲醇5 mL，超声处理30 min，滤过，滤液挥至约1 mL，作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2005年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一用1%羧甲基纤维素钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯－甲醇－水(100∶17∶13)为展开剂，展至约3 cm，取出，晾干，再以喷以三氯化铝试液，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，见图1 D。

图1 薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 测定波长选择

取黄芩苷对照品适量，配制成对照品溶液，置分光光度计中，于190～400 nm波长范围内扫描，结果黄芩苷对照品溶液在280 nm处有最大吸收。经验证，供试品在此条件下测定效果良好，故选定280 nm为黄芩苷的检测波长。

2.2.2 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5μm);流动相:乙腈 －水 －磷酸(30∶70∶0.04);流速:1 mL/min;柱温:35℃;进样量:10μL;检测波长:280 nm。

2.2.3 溶液制备

精密称取经60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品适量，置棕色容量瓶中，加甲醇使溶解，摇匀，制成每1 mL含黄芩苷40μg的溶液，即得对照品溶液。取装量差异项下的本品约0.5 g，研细，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，称定质量，超声提取(功率 260 W，频率 40 kHZ)30 min，取出，放冷，称定质量，用70%的乙醇补足减失质量，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取不含黄芩的阴性样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2.4 方法学考察

系统适用性试验:分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各10μL注入色谱仪，记录色谱图，见图2。阴性对照品溶液色谱图在黄芩苷峰位置无色谱峰，表明其他组分对测定无干扰。黄芩苷峰与相邻组分峰的分离度在于1.5，理论板数以黄芩苷峰计不小于5 000。

线性关系考察:精密称取黄芩苷对照品12.19 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取2 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得质量浓度为0.039 01 g/L的黄芩苷对照品溶液，分别精密吸取 2.5，5.0，10.0，15.0，20.0 μL，注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面积积分值，以对照品进样量(μg)为横坐标、峰面积值为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=1 938.29 X －5.88，r=0.999 9(n=5)。结果表明，黄芩苷进样量在0.098～0.780μg范围内与峰面积线性关系良好。

稳定性试验:取同一供试品(批号为20080901)溶液，在室温下固定时间0，2，4，8，12 h进样测定黄芩苷峰面积值。结果的RSD=0.85%(n=5)，表明黄芩苷在12 h内基本稳定。

精密度试验:精密吸取对照品溶液(质量浓度为0.04184g/L)，重复进样5次，测定黄芩苷峰面积积分值。结果的 RSD=0.9%(n=5)，表明仪器精密度良好。

图2 高效液相色谱图

重复性试验:精密取本品内容物(批号为20080901)各0.5 g，共5份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果的 RSD=0.96%(n=5)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:称取已知含量的同一批样品约0.25 g(批号为20080901，黄芩苷含量为2.01 mg/g)6份，分别加入黄芩苷对照品溶液(0.541 g/L)1 mL，按供试品溶液制备方法制备待测溶液，依法测定含量。结果见表1。

表1 黄芩苷加样回收试验结果(n=6)

2.2.5 样品含量测定

分别取10批样品内容物适量，按质量标准草案方法测定其中黄芩苷含量。结果见表2。

表2 10批样品中黄芩苷的含量测定结果(mg/袋)

3 讨论

在薄层鉴别研究中，笔者曾对方中白术、麦冬、莱菔子3味药材分别采用了醋酸乙酯－甲酸－水、石油醚－醋酸乙酯、甲苯－甲醇－冰醋酸等多种类、不同比例展开剂反复试验，但因分离效果不好、重现性差及阴性干扰等原因而未列入质量标准正文。

试验中考察了不同提取方法、不同提取溶剂、不同提取时间。以超声处理和热回流提取时，结果两者黄芩苷的提取量较相近，从操作方便考虑，选择超声提取;以甲醇、乙醇、70%乙醇为溶剂超声提取，结果表明以70%乙醇为溶剂黄芩苷提取量最高;以70%乙醇为溶剂超声15，30，45 min，结果表明，供试品中的黄芩苷在30～45 min时含量变化已不大，说明黄芩苷基本提尽，故选30 min为提取时间。

本制剂由7味中药材组方，本试验对4味药材进行薄层色谱定性鉴别，同时还对黄芩进行含量测定，此质量控制方法能很好控制产品质量。

[1]WS3－B－0997－91，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂(第五册)[S].